盐酸伊立替康注射液对直肠癌晚期患者血清GPX3及肿瘤组织液WISP2、FGFBP1的影响

张占东，杨巍，孔烨，马二民，张斌，路明，花亚伟

(1.郑州大学附属肿瘤医院，河南省肿瘤医院 普外科，河南 郑州 450008；2.郑州人民医院 普外科，河南 郑州 450000；3.博爱县人民医院 普外科，河南 焦作 454450)



盐酸伊立替康注射液对直肠癌晚期患者血清GPX3及肿瘤组织液WISP2、FGFBP1的影响

张占东1，杨巍1，孔烨1，马二民2，张斌1，路明3，花亚伟1

(1.郑州大学附属肿瘤医院，河南省肿瘤医院 普外科，河南 郑州 450008；2.郑州人民医院 普外科，河南 郑州 450000；3.博爱县人民医院 普外科，河南 焦作 454450)

目的 探讨盐酸伊立替康注射液对直肠癌晚期患者血清谷胱甘肽过氧化物酶3(glutathione peroxidase 3，GPX3)、肿瘤组织液中WNT1诱导信号通道蛋白2(WNT1 inducible signaling pathway protein 2，WISP2)及成纤维细胞生长因子结合蛋白1(fibroblast growth factor binding protein 1，FGFBP1)的影响。方法 选取郑州大学附属肿瘤医院已确诊为晚期直肠癌患者90例，随机分为实验组和对照组，对照组给予奥沙利铂+亚叶酸钙+氟尿嘧啶化疗方案，实验组给予奥沙利铂+亚叶酸钙+盐酸伊立替康化疗方案，每4周重复1次，共6次。治疗前后分别检测2组患者的血清GPX3蛋白含量、肿瘤组织液WISP2、FGFBP1蛋白水平，评价临床疗效。结果 与对照组比较，实验组患者血清GPX3蛋白含量明显升高(P<0.05)；肿瘤组织液WISP2蛋白水平显著升高(P<0.05)；肿瘤组织液FGFBP1蛋白水平显著降低(P<0.05)；实验组的总有效率为明显高于对照组(64.44% vs.42.22%；χ2=4.46，P<0.05)，实验组的临床获益率明显高于对照组(93.33% vs.75.56%；χ2=5.41，P<0.05)。结论 盐酸伊立替康注射液能够使直肠癌晚期患者血清WISP2、肿瘤组织液GPX3表达水平升高，肿瘤组织液FGFBP1表达水平降低，具有良好的临床疗效。

伊立替康；晚期直肠癌；谷胱甘肽过氧化物酶3； WNT1诱导信号通道蛋白2；成纤维细胞生长因子结合蛋白1

直肠癌主要是由于直肠组织的细胞病变后不断增长而引发的恶性肿瘤，是临床最常见的消化道恶性肿瘤之一[1]。资料显示[2]，结直肠癌在美国常见的癌症中排第3位，居死亡原因的第2位。我国2007年新病例接近120万，死亡63万，分别比2000年增加27%和28%，平均年增加3.9%和4.0%，呈逐年增加趋势[3]。直肠癌早期临床症状不明显，出现便血、脓血便、排便梗阻、恶病质等表现时多已到肿瘤晚期，晚期直肠癌已失去手术机会[4]。目前临床上多采用全身化疗抑制病情发展，5-氟尿嘧啶(5-Fu)是目前治疗晚期直肠癌的主要药物，通常作为一线治疗[5]，但是其不良反应较多，容易产生耐药性，往往治疗失败，因此，寻找其他化疗药物成为目前研究的重点。已有研究显示[6]，伊立替康(CPT-11)是近年来发现的抗肿瘤药物，属于广谱抗癌药，能够抑制拓扑异构酶1，既往多用于对5-Fu产生耐药性的患者的二线化疗，关于其用于一线化疗的相关研究较少。因此，本研究通过对直肠癌晚期患者体内WISP2、GPX3和FGFBP1的变化，以及药物的临床疗效，探讨伊立替康对晚期直肠癌的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集郑州大学附属肿瘤医院2013年6月～2015年1月的确诊为晚期直肠癌的患者90例。将所有患者随机分为实验组和对照组，每组各45例。实验组男性29例，女性16例，年龄30～80岁，平均(53.6±8.1)岁；对照组男性30例，女性15例，年龄29～79岁，平均(52.4±8.3)岁；2组在年龄、性别组成、病情方面无明显差异。该研究经过伦理委员会批准，并获患者知情同意。纳入标准：经组织病理学检查确诊为晚期直肠癌，且病灶无法经手术切除。排除标准：①患有其他恶性肿瘤；②合并胸水、腹水、肠梗阻、肠穿孔等严重并发症；③近3个月存在胃肠道出血，凝血功能异常；④存在恶病质；⑤有活动性感染；⑥对研究药物具有抗药性或者不能耐受化疗的患者。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：对照组给予奥沙利铂(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20050962)100 mg/m2，d1+亚叶酸钙(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20023636)200 mg/m2，d1+氟尿嘧啶(亚宝药业集团股份有限公司，国药准字H20057995)500 mg/ m2，d1～d5化疗方案，每4周重复1次，共6次；实验组给予奥沙利铂100 mg/m2，d1+亚叶酸钙400 mg/m2，d1+盐酸伊立替康注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20040711)180 mg/m2，d1化疗方案，每4周重复1次，共6次。

1.2.2 血清指标采集：所有研究对象在治疗前后分别取空腹静脉血5 m，然后分离血清，选用谷胱甘肽过氧化物酶3(glutathione peroxidase 3，GPX3)检测试剂盒(上海一研生物科技有限公司)进行检测；分别于治疗前后在直肠镜下取患者癌组织，剪碎，放入1～2 mL匀浆器中，使用匀浆器反复匀浆，加入400 μL裂解液，裂解30 min后，将裂解液移入1.5 mL离心管，在4 ℃下12000 r/min离心5 min，制备肿瘤组织液，置于-20 ℃保存备用，选用WNT1诱导信号通道蛋白2(WNT1 inducible signaling pathway protein 2，WISP2)ELISA试剂盒(上海纪宁实业有限公司)、成纤维细胞生长因子结合蛋白1(fibroblast growth factor binding protein 1，FGFBP1)检测试剂盒(武汉云克隆科技股份有限公司)进行检测。严格按照试剂盒说明，利用雷杜Rayto RT-6000全自动酶标仪，通过酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中GPX3含量、组织液中IGFBP1、WISP2蛋白含量。

1.2.3 疗效评价：所有患者治疗前后均进行全面检查，根据实体瘤疗效评价标准(response evaluation criteria in solid tumors，RECIST)疗效评定标准对治疗效果进行评价[7]，分为完全缓解(complete response，CR)，部分缓解(partial response，PR)，疾病稳定(stable disease，SD)，疾病进展(progressive disease，PD)。(CR+PR)%为总有效率，(CR+PR+SD)%为临床获益率。

2 结果

2.1 治疗前后2组患者血清GPX3蛋白含量比较 治疗后2组患者GPX3蛋白含量明显高于治疗前(P<0.05)。与对照组比较，实验组患者血清GPX3蛋白含量明显升高(P<0.05)。见表1。

表1 治疗前后2组患者血清GPX3蛋白含量比较±s)Tab.1 Comparison of serum GPX3 content between two ±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.2 治疗前后2组患者肿瘤组织液中WISP2蛋白含量比较 治疗后2组患者WISP2蛋白含量指标明显高于治疗前(P<0.05)。与对照组比较，实验组患者血清WISP2蛋白含量明显升高(P<0.05)。见表2。

组别 例数时间WISP2(mg/mL)对照组45治疗前8.27±1.65治疗后12.87±2.56*实验组45治疗前8.36±1.86治疗后16.37±2.76*#

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.3 治疗前后2组患者组织液FGFBP1蛋白含量比较 治疗后2组患者FGFBP1蛋白含量指标明显低于治疗前(P<0.05)。与对照组比较，实验组患者血清FGFBP1蛋白含量明显降低(P<0.05)。见表3。

组别 例数时间FGFBP1(mg/mL)对照组45治疗前42.48±5.97治疗后20.38±2.42*实验组45治疗前42.58±6.13治疗后14.38±2.01*#

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.4 2组患者临床疗效比较 实验组的总有效率为64.44%，明显高于对照组的42.22%(χ2=4.46，P<0.05)；实验组的临床获益率为93.33%，明显高于对照组的75.56%(χ2=5.41，P<0.05)。见表4。

表4 2组患者临床疗效比较[n(%)]Tab.4 Comparison of efficacy between two groups[n(%)]

#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

3 讨论

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，过去数十年间，全球结直肠癌年发病例数超万，发病呈上升趋势[8]。目前，对于直肠癌的治疗，早期多采用手术根治疗法，取得了良好的临床疗效，但由于直肠癌早期临床症状不明显，发现时多已不适合手术治疗，只能通过化疗减缓病情发展，提高患者的生活质量。资料显示[9]，FOLFOX方案(氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合奥沙利铂)是临床上较常用的治疗晚期直肠癌的方案，但是氟尿嘧啶需要静脉输注，易引起感染等相关并发症，而且肿瘤组织容易产生耐药性。伊立替康是由美国FDA批准的治疗晚期结直肠癌的药物，能够抑制DNA拓扑异构酶1，研究表明[10]，其在机体内与羧酸酯酶反应，产生SN-38，SN-38和伊立替康均能够导致DNA损伤，产生细胞毒性，抑制肿瘤细胞的生长，促进其凋亡，发挥抗肿瘤作用。体外研究显示[11]，伊立替康对离体的人结直肠癌HCT-116细胞仍能发挥细胞毒性作用。在本实验中，通过观察2组患者患者体内WISP2、GPX3和FGFBP1的变化，以及药物的临床疗效，探讨伊立替康应用于晚期直肠癌的疗效。

本研究结果发现，实验组患者血清GPX3蛋白含量与对照组比较明显升高(P<0.05)，提示伊立替康能够促进GPX3的表达。GPX3属于谷胱甘肽过氧化物酶家族的一员，具有清除人体内过氧化物的作用，能够减少机体内过多的活性氧(reactive oxygen species，ROS)。ROS能够使氧化应激过程加剧，损伤细胞及DNA，引起基因突变，产生肿瘤细胞，曾有研究报道[12]，GPX3在结肠癌、食管癌、胃癌等多种消化道肿瘤中表达异常，与肿瘤的发生发展关系密切。本研究结果表明，实验组血清GPX3蛋白含量高于对照组(P<0.05)，提示伊立替康能够上调GPX3基因的表达，促使其发挥抗氧化应激、抗基因突变的作用。

WISP2为连接组织生长因子，具有介导细胞信号转导的作用，能够抑制细胞增殖，调控肿瘤细胞的生长，相关研究发现[13]，WISP2对肿瘤增殖起到负性调节的作用，属于抑癌基因的一种，其在结肠癌组织的表达较正常组织呈现下调现象，肿瘤的发生发展与其低表达有关。本研究结果显示，实验组患者肿瘤组织液WISP2蛋白含量与对照组比较明显升高(P<0.05)，提示伊立替康能够使WISP2的表达上调，增强抑癌效果。

FGFBP1最初来源于表皮鳞状细胞癌株，属于成纤维细胞生长因子家族，资料显示其在人肺癌组织及细胞系呈现高表达[14]，FGFBP1上调能够促进肿瘤细胞增长，还能够促进新生血管的发生，使得肿瘤组织血液供养丰富，有利于肿瘤细胞的生长、增殖以及转移。本研究结果显示，实验组患者血清FGFBP1蛋白含量与对照组比较明显降低(P<0.05)，提示伊立替康有下调FGFBP1表达的作用，能够通过降低FGFBP1蛋白的表达水平来抑制肿瘤发展。本研究结果显示，实验组的总有效率及临床获益率均明显高于对照组(均P<0.05)，这与赵得平等[15]报道，利用伊立替康联合卡培他滨治疗原发性及转移性结肠癌患者46例，肿瘤控制率达到70.6%～75.9%的结果相类似。

本实验通过对90例晚期直肠癌患者血清GPX3蛋白含量、肿瘤组织液WISP2、FGFBP1蛋白水平，临床疗效等结果进行分析，证实了盐酸伊立替康注射液能够使直肠癌晚期患者体内WISP2、GPX3表达水平升高，FGFBP1表达水平降低，具有良好的临床疗效。

[1] 胡喆.直肠癌治疗研究进展[J].吉林医学，2014，35(1)：142-144.

[2] 杨同军，袁文贤.结肠、直肠癌筛检进展[J].中国综合临床，2001，17(12)：895-896.

[3] 万德森.结直肠癌流行趋势及其对策[J].癌症，2009，28(9)：897-902.

[4] 陆世珍，符发年.直肠癌早期诊断[C].//中国老年学学会老年肿瘤专业委员会年会暨第五届中国老年肿瘤学大会论文集.2011：434.

[5] 杨科，李晓芳.伊立替康联合替吉奥胶囊与伊立替康联合5-氟尿嘧啶治疗晚期直肠癌的疗效对比观察[J].中国医药导刊，2013，15(7)：1278-1279.

[6] 刘凌翔，刘平.伊立替康治疗结直肠癌的耐药及其解救的研究进展[J].实用临床医药杂志，2005，9(11)：38-41.

[7] Therasse P,Arbuck SG,Eisenhauer EA,et al.New guidelines to evaluate the response to treatnlent in solid tunlors.European Organization for Research and Treatment of Cancer,National Cancer Institute of the United States，National Cancer Institute of Canad[J].J Natl Cancer Inst,2000,92(3):205-216.

[8] 陈坤，蔡剑，刘希永，等.结肠癌和直肠癌危险因素的巢式病例对照研究[J].中华流行病学杂志，2001，22(6)：739-441.

[9] 翁成荫，刘国龙，关明媚，等.三维适形放疗联合改良FOLFOX方案治疗42例局部晚期直肠癌的临床观察[J].广东医学，2012，33(23)：3596-3598.

[10] 邵腾飞，郑媛婷，徐佳琳，等.人血浆中伊立替康及其活性代谢物SN-38浓度高效液相色谱-荧光测定方法的建立[C].//2010第十二次全国临床药理学学术会议论文集.2010：184-187.

[11] 张依宁，魏敏杰，孙明军，等.伊立替康抑制人结直肠癌细胞增殖和ATP敏感性钾通道的相关性研究[J].中国医科大学学报，2010，39(1)：10-13.

[12] 沈磊，贺远龙，张巍巍，等.GPX3表达与消化系肿瘤关系的研究进展[J].临床与实验病理学杂志，2014，30(6)：670-672.

[13] 秦燕子.Wisp2在人类肿瘤发生关系的研究进展[C].//安徽省医学会病理学分会九届二次学术会议论文集.2012：72-77.

[14] 阎红娥，秦越，鲍文华，等.WISP-2及FGFBP1在非小细胞肺癌中的表达[J].黑龙江医药科学，2015，38(2)：99-101.

[15] 赵保平，韩全乡，姜祖光，等.伊立替康联合卡培他滨治疗晚期大肠癌近期疗效观察[J].临床医学，2008，28(8)：58-59.

(编校：王俨俨)

Effect of irinotecan hydrochloride injection on serum GPX3 and WISP2, FGFBP1 in tumor tissue fluid of patients with advanced rectal cancer

ZHANG Zhan-dong1, YANG Wei1, KONG Ye1, MA Er-min2, ZHANG Bin1, LU Ming3, HUA Ya-wei1

(1.Department of General Surgery, The Affiliated Cancer Hospital of Zhengzhou University, Henan Cancer Hospital, Zhengzhou 450008, China; 2.Department of General Surgery, Zhengzhou People’s Hospital, Zhengzhou 450000, China; 3.Department of General Surgery, Boai Xian Ren Min Yi Yuan, Jiaozuo 454450, China)

ObjectiveTo analyse the effect of irinotecan hydrochloride injection on serum glutathione peroxidase 3 (GPX3), and WNT1 induced signaling pathway protein 2 (WISP2) and fibroblast growth factor binding protein 1 (FGFBP1) in tumor tissue fluid of patients with advanced rectal cancer.Methods90 patients who were diagnosed with advanced rectal cancer in the hospital were collected.All patients were randomly divided into experimental group and control group,control group were treated with oxaliplatin + calcium folinate + fluorouracil chemotherapy, and experimental group were treated with oxaliplatin + calcium folinate + irinotecan hydrochloride injection chemotherapy. The treatment were repeated every four weeks, a total of six times.The serum GPX3 content, and WISP2, FGFBP1 levels in tumor tissue fluid were detected in two groups pre-and post treatment.The clinical efficacy was evaluated.ResultsCompared with control group, the serum level of GPX3 in experimental group increased significantly (P<0.05); WISP2 level in tumor tissue fluid of experimental group increased significantly (P<0.05); FGFBP1 level in tumor tissue fluid of experimental group decreased significantly (P<0.05).The total efficiency of experimental group was higher than that of control group(64.44% vs.42.22%；χ2=4.46，P<0.05), and the clinical benefit rate of experimental group was significantly higher than that of control group(93.33% vs.75.56%；χ2=5.41，P<0.05).ConclusionThe irinotecan hydrochloride injection could increased levels of serum GPX3 and WISP2 in tumor tissue fluid, reduce FGFBP1 level in tumor tissue fluid, which has good clinical curative effect.

irinotecan; advanced rectal cancer; glutathione peroxidase 3; WNT1 inducible signaling pathway protein 2; fibroblast growth factor binding protein 1

张占东，男，硕士，主治医师，研究方向：胃肠肿瘤，E-mail：hnzhangzhandong@163.com。

R735.3

A

1005-1678(2015)08-0098-04