刺芒柄花素对老年晚期肺癌患者胸水及血清中内皮抑素、VEGF、MMP-2、bFGF及肿瘤标志物的影响

张蕾，任中海，薛永飞

(河南省南阳市中心医院 肿瘤内科二病区，河南 南阳 473000)



刺芒柄花素对老年晚期肺癌患者胸水及血清中内皮抑素、VEGF、MMP-2、bFGF及肿瘤标志物的影响

张蕾，任中海Δ，薛永飞

(河南省南阳市中心医院 肿瘤内科二病区，河南 南阳 473000)

目的 探讨刺芒柄花素对老年晚期肺癌患者胸水及血清中内皮抑素(endostatin，ES)、血管内皮素生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinases 2，MMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)及肿瘤标志物的影响。方法 选取河南省南阳市中心医院诊治的老年晚期肺癌患者67例，根据随机数字表法随机分为2组：对照组33例，行临床常规NP方案化疗；实验组34例，在对照组相同的临床常规治疗基础上加用刺芒柄花素予以治疗，比较2组患者胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF、肿瘤标志物水平以及生存质量评分变化。结果 与对照组比较，实验组胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量均明显降低(P<0.05)；实验组血清癌胚抗原(carcino embryonie antigen，CEA)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、细胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragments，CYFRA21-1)、糖类抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)水平明显降低(P<0.05)；实验组患者生存质量评分情况明显优于对照组(χ2=4.96，P<0.05)。结论 刺芒柄花素对老年晚期肺癌患者治疗具有较好的临床疗效，且能有效改善患者生存质量，降低胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF等指标和肿瘤标志物水平，对临床治疗老年晚期肺癌具有重要意义。

刺芒柄花素；晚期肺癌；内皮抑素；血管内皮素生长因子；基质金属蛋白酶2；碱性成纤维细胞生长因子；肿瘤标志物

肺癌(lung cancer)是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，也是目前全世界发病率和死亡率最高的癌症[1]，对人类健康和生命安全带来了较大威胁。肺癌的高发年龄为 50～80 岁，近年来，青年人肺癌的发病率呈明显上升趋势，男性发病率和死亡率明显高于女性，其原因与男性为主要吸烟人群有主要关系[2]。大量样本调查后指出，长期大量吸烟者的肺癌发生率为不吸烟者20倍[3]，且近年来工业发展、城市大气污染加重，肺癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势，值得引起人们高度关注。临床实验指出，化疗是导致肺癌患者并发静脉血栓栓塞症的主要危险因素[4]，加重晚期肺癌患者出现凝血、纤溶系统紊乱而发生静脉血栓栓塞症的风险。刺芒柄花素(formononetin)是提取自豆科植物红车轴草有效成分[5]，具有较好的抗癌作用，临床已将之应用于乳腺癌、前列腺癌、结肠癌等疾病的预防，但将之用于治疗老年晚期肺癌的报道却并不多见。本研究通过对老年晚期肺癌患者应用刺芒柄花素治疗后其胸水和血清中内皮抑素(endostatin，ES)、血管内皮素生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinases 2， MMP-2)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)表达水平的变化，以探讨刺芒柄花素对老年晚期肺癌患者的影响，为老年晚期肺癌患者的诊断和治疗提供新的思路和方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例来源选择2013年1月～2014年10月于河南省南阳市中心医院肿瘤科以老年晚期肺癌为诊断而收入院的患者67例，男性34例，女性33例，采用随机数字表法随机分为实验组和对照组。其中实验组34例，男性17例，女性17例，平均年龄(74.2±10.5)岁；对照组33例，男性17例，女性16例，平均年龄(74.8±10.7)岁。病理分型：实验组小细胞肺癌患者8例，非小细胞肺癌患者26例，其中腺癌14例、鳞癌12例；对照组小细胞肺癌患者7例，非小细胞肺癌患者26例，其中腺癌15例、鳞癌11例。临床分期：实验组ⅢA期11例，ⅢB期15例，Ⅳ期8例；对照组ⅢA期12例，ⅢB期13例，Ⅳ期8例[按国际抗癌联盟(UICC)最新版恶性肿瘤的TNM分期标准]。所有老年晚期肺癌患者其临床及影像学诊断均符合诊断标准，且均已丧失手术治疗机会。2组研究对象性别、年龄、病理分型、临床分期一般资料比较差异无统计学意义。

诊断及排除标准：①参照中国抗癌协会出版《2010中国肺癌临床指南》[6]中关于老年晚期肺癌的诊断标准而拟定以下纳入标准：初次入院并诊断为肺癌者；年龄在65～79岁之间者；TNM分期符合晚期肺癌变化，失去手术机会并自愿同意接受本实验者；实验前2周内未用过任何相关药物治疗者。②排除标准：不愿参与本研究或不符合纳入标准者；同时患有其他系统肿瘤者；患有艾滋病、乙肝等具有较重传染性疾病患者；合并有严重心、肝、肾功能不全疾病患者；对刺芒柄花素及其制剂过敏者；患有精神类疾病不能配合研究者。

1.2 方法 所有老年晚期肺癌患者严格按照2010年美国临床肿瘤学会IV期非小细胞肺癌化疗的临床实践指南[7]中关于老年晚期肺癌的治疗标准予以治疗：

对照组行NP方案化疗，顺铂注射液(锦州九泰药业有限责任公司，国药准字H20033936)70 mg/m2，分3 d使用，分别为第10、20、30天；长春瑞滨注射液(江苏豪森药业股份有限公司，国药准字H20031377)25 mg/(m2·d)，于第1、8天使用。在治疗过程中，如并发其他临床症状，均予相应的对症处理。以4周为1个周期进行治疗，共化疗2个周期。实验组在与对照组相同的临床常规治疗基础上加用刺芒柄花素(陕西慧科植物开发有限公司，纯度>98%)，1.2 g/次，3次/天，共治疗8周。

血清样本采集：2组患者均在入院后及治疗结束后空腹采集10 mL肘静脉血，将其中部位血液装入采血管中，按3000 r/min离心10 min，待离心结束后将上层血清装入采血管中，放入-80 ℃冰箱中保存备用；剩余血液装入采血管备用。以上均由本院检验科专业人员负责操作。

胸水样本采集：2组患者均在入院后及治疗结束后经无菌操作胸腔穿刺收集胸腔积液送检脱落细胞学检查，同时收集胸腔积液10 mL，按3000 r/min 离心10 min，然后将上清液分别装入采血管中，放入-80 ℃冰箱中保存备用。

1.3 观察指标及检测方法

1.3.1 胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量：4种指标均采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测量其浓度水平。以血清ES含量测量为例：①选取96孔板按说明书要求设置标准品、空白孔及检测样本孔；②在标准品孔中加入标准品50 μL，链霉亲和素-HRP50 μL；③代测样品孔中加入样本40 μL ，然后各加入抗ES抗体10 μL、链霉亲和素-HRP50 μL，盖上封板膜，混匀后于37 ℃条件下温育60 min；④每孔先后加入显色剂A50 μL、显色剂B50 μL，混匀后于37 ℃条件下避光显色10 min；⑤每孔加终止液 50 μL；⑥以450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)；⑦根据标准品的浓度及对应的OD值和样品OD值计算出对应的样品浓度。其余指标浓度测量方法同上。试剂盒均由江苏晶美生物科技有限公司提供，其操作方法按照说明书严格操作，全自动酶标仪购于美谷分子仪器(上海)有限公司。

1.3.2 血清中肿瘤标志物含量：取所有患者预留血清2 mL，采用ELISA法检测所有研究对象血清中肺癌肿瘤标志物浓度水平，肿瘤标志物包括：癌胚抗原(carcino embryonie antigen，CEA)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、细胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragments，CYFRA21-1)、糖类抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)等(试剂盒由郑州安塞生物科技有限公司提供，其操作方法按照说明书严格操作)。以上所有操作均由本院检验科专业人员负责操作。

1.3.3 生存质量评价：依据Karnofsky功能状态评分[8]标准进行评价，①改善：治疗后较治疗前得分提高≥10分；②下降：治疗后较治疗前得分下降≥10分；③稳定：治疗后较治疗前提高或下降得分<10分。总有效率=(改善例数+稳定例数)/总例数×100%。

2 结果

2.1 胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量水平的比较 本研究显示，治疗前2组患者胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量相比较，差异无统计学意义。经8周治疗后，2组患者胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量均较治疗前降低(P<0.05)，且实验组明显低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量的比较Tab.1 Comparison of ES，VEGF，MMP-2 and bFGF in hydrothorax between two ±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.2 血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量水平的比较 本研究显示，治疗前2组患者血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量相比较，差异无统计学意义。经8周治疗后，2组患者血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量均较治疗前降低(P<0.05)，且实验组明显低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量的比较Tab.2 Comparison of ES, VEGF, MMP-2 and bFGF in serum between two ±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.3 血清中肿瘤标志物水平比较 本研究显示，治疗前2组患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125的含量相比较，差异无统计学意义，基线可比。本研究中，经8周治疗后2组患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125水平均较治疗前降低(P<0.05)，但实验组水平明显低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者血清中肺癌肿瘤标志物水平比较±s，μg/L)Tab.3 Comparison of tumor biomarkers between two ±s，μg/L)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.4 2组患者生存质量评价比较 本研究中，经治疗后，实验组患者生存质量评分情况明显优于对照组(χ2=4.96，P<0.05)。见表4。

表4 治疗过程中Karnofsky评价比较情况[n(%)]Tab.4 Comparison of Karnofsky score between two groups[n(%)]

#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

3 讨论

在我国近10年来，肺癌发病率以每年11%的速度递增，总患病率在男性恶性肿瘤中超越前列腺癌而处于第1位，女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌而位于第2位[9]。对于失去手术治疗机会的老年晚期肺癌患者，化疗是其主要的治疗方案，但化疗并不能十分有效地延长其生存期。随着现代科学对肿瘤发生及进展中小分子认识的逐渐增多，研究者已逐渐认识到血管生成是肿瘤发生、生长及转移的关键环节。研究发现[10]，血管生成在肿瘤的恶性增殖以及侵袭转移过程中发挥着重要的作用，而且肿瘤血管密度对患者的生存期和生存质量有重要的影响。另外有研究表明[10]，小细胞肺癌患者胸水或血清中VEGF、ES显著升高，bFGF、MMP-2也被证实在肺癌患者肿瘤生长、转移过程中具有重要作用。

研究表明[11]，恶性肿瘤患者大多都存在血清ES、VEGF水平的升高现象，本研究结果也证实了此结论。本研究结果显示，2组患者胸水和血清中ES、VEGF、bFGF、MMP-2均异常增高。研究发现[13]，VEGF和ES分别是作用最强的内源性血管生成因子和抗血管生成因子。VEGF在恶性肿瘤细胞的生长、分化及转移中发挥促进肿瘤内皮细胞有丝分裂、病理性血管生成的作用，从而促进肿瘤细胞转移；ES则被认为是至今发现的最有效的内源性血管生长抑制剂之一，具有非常广泛的抗癌活性。bFGF是近年来新发现的一种具有重要作用的血管新生调控因子， 具有促进肿瘤细胞有丝分裂和诱导新血管生成的作用，在肿瘤分化、浸润、转移以及新生血管的形成过程中起着重要作用， 并成为判断实体瘤预后的一项重要的独立性指标[14]。

本研究结果显示，实验组患者经治疗后胸水和血清中ES、VEGF、bFGF、MMP-2经治疗后均明显降低(P<0.05)，且低于对照组(P<0.05)。在治疗前，2组患者胸水中各指标水平虽略高于患者血清中水平，但差异并无统计学意义。经8周治疗后，胸水和血清中各指标水平亦无明显差异。由本研究结果可知，刺芒柄花素具有较好的降低血清和胸水中VEGF、bFGF、MMP-2水平的作用，其原因可能与刺芒柄花素的抗肿瘤活性有关[15]，而其具体的疗效机制目前仍不十分明确。bFGF水平是预测肿瘤患者预后的重要指标[16]，本研究中实验组患者bFGF水平明显低于对照组，可见实验组患者预后应优于对照组，而表4中实验组患者生存质量评分和有效率明显优于对照组(P<0.05)，且实验组各肿瘤标志物的水平也更低于对照组(P<0.05)，CA125作为肺癌的独立预后指标，其水平的降低也共同证实了这一结果。

本实验通过观察67例老年晚期肺癌患者治疗前后胸水和血清ES、VEGF、bFGF、MMP-2、肿瘤标志物和生存质量评估的情况，证实了刺芒柄花素能够明显降低老年晚期肝癌患者胸水和血清ES、VEGF、bFGF、MMP-2以及肿瘤标志物等指标水平，对老年晚期肺癌患者具有重要意义。在下一步研究中，本课题组将寻找新的信号分子和目的基因，为本实验所反映的现象做出进一步论证和分析。

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(编校：王俨俨)

Effect of formoononetin on endostatin, VEGF, MMP-2 and bFGF in hydrothorax and serum and tumor biomarkers of elderly patients with advanced lung cancer

ZHANG Lei, REN Zhong-haiΔ, XUE Yong-fei

(Department of Internal Medicine-Oncology, Nanyang Central Hospital of Henan Province, Nanyang 473000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of formoononetin on endostatin (ES), vascular endothelial growth factor (VEGF), matrix metalloproteinases 2(MMP-2), basic fibroblast growth factor (bFGF) in hydrothorax and serum, and tumor biomarkers of patients with elderly advanced lung cancer.Methods67 cases elder with advanced lung cancer were selected and randomly divided into two groups.33 cases in control group were treated with conventional therapy of NP chemotherapy regimen, 34 cases in experiment group were combined with formononetin.The changes of ES, VEGF, MMP-2, bFGF, tumor marker levels in hydrothorax and serum and life quality evaluation were compared.ResultsCompared with control group, the contents of ES, VEGF, MMP-2, bFGF in hydrothorax and serum of experiment group significantly decreased (P<0.05); the carcino embryonie antigen (CEA), neuron specific enolase (NSE), cytokeratin-19-fragments (CYFRA21-1), and carbohydrate antigen 125 (CA125) in serum of experiment group significantly decreased (P<0.05); the life quality evaluation improved better of experiment group (χ2=4.96,P<0.05).ConclusionFormononetin has better clinical effect in treatment of elderly patients with advanced lung cancer patients.It could effectively improve the quality of life, reduce ES, VEGF, MMP-2, bFGF and other indicators in hydrothorax and serum, which has the vital significance to the clinical therapy.

formononetin; advanced lung cancer; endostatin; vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinases 2; basic fibroblast growth factor; tumor biomarkers

张蕾，女，本科，主治医师，研究方向：肿瘤内科，E-mail：zhangleiyis@163.com；任中海，通讯作者，男，硕士，主任医师，研究方向：肿瘤内科，E-mail：renzhonghai@medmail.com.cn。

R734.2

A

1005-1678(2015)08-0154-04