口服补液盐泡腾片中5—羟甲基糠醛含量检测

时菲菲 汪燕 张铎 张亮

摘 要： 本研究采用高效液相色谱法，测定口服补液盐泡腾片中有关物质5-羟甲基糠醛含量，以乙腈-水（1：20，V/V）为流动相，使用Luna C18柱为色谱柱，检测波长为284 nm，采用本法检测5-羟甲基糠醛精密度、稳定性良好，平均回收率为98.396%（n=3）、RSD为0.77%，最低检测限为1.5ng/mL。5-羟甲基糠醛含量测定方法操作简便、结果准确可靠，可用于口服补液盐泡腾片的质量控制。

关键词： 高效液相色谱法 5-羟甲基糠醛 口服补液盐泡腾片

5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，5-HMF）又称5-羟甲基-2-糠醛，为葡萄糖等单糖的降解产物[1]，广泛存在于含有糖类物质的食品和药品中。有文献[2]-[4]报道，5-HMF可能引起血栓性静脉炎、致突变、促进皮肤癌等不良反应。在口服补液盐泡腾片的处方中含有大量葡萄糖，制备中经过烘干过程，葡萄糖易分解产生5-羟甲基糠醛。《中国药典》2015年版二部[5]规定1%葡萄糖溶液中5-HMF的检查是在284nm处测定溶液的吸光度，其值应<0.32，当其吸光度为0.32时，5-HMF浓度约为2.5ug/mL。本文建立了5-HMF的HPLC检测方法并对口服补液盐泡腾片中5-HMF含量进行了检测。

1.仪器与试药

1.1仪器

LC-10ATvp（VP）高效液相色谱仪（日本岛津）；色谱柱（Luna C18）；JB/T 5374-1991电子天平[梅特勒—托利多仪器（上海）有限公司]。

1.2试药

口服补液盐泡腾片（自制）；5-羟甲基糠醛对照品（中国药品生物制品检定所，标准品）；乙腈（色谱纯）。

2.实验方法

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Luna C18（4.6mm×150mm，5μm）柱；流动相：乙腈-水（1：20，V/V）；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：284nm；进样量：20uL。在此色谱条件下，取5-羟甲基糠醛对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液各20uL注入色谱仪，记录色谱图，由图1可见阴性对照无干扰。

图1 系统适用性试验色谱图

A.对照品；B.供试品；C.阴性对照品

Fig 1 HPLC chromatogram of 5-HMF

A reference；B sample；C blank

2.2标准曲线的制备

标准溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品12mg，置于1000mL容量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀。取标准溶液0.2mL、0.35mL、0.7mL、1.2mL、3.0mL，分别置100mL容量瓶中，加流动相定容并摇匀，5-羟甲基糠醛浓度分别为0.026ug/mL、0.042ug/mL、0.084ug/mL、0.144ug/mL、0.36ug/mL。准确量取上述五种浓度5-羟甲基糠醛溶液20ul注入液相色谱仪。以峰面积与浓度进行线性拟合，得线性方程Y=126720X-178.26，r=0.9995线性范围：0.026～0.36ug/mL。

2.3精密度试验

配制浓度为0.042ug/mL、0.12ug/mL、0.16ug/mL的三种5-羟甲基糠醛标准品溶液，每种浓度溶液分别连续进样3次，每次准确量取20ul注入高效液相色谱仪，计算RSD分别为1.08%、0.17%、0.89%。

2.4稳定性试验

取线性测定中浓度为0.1856ug/mL样品，分别于0，1，2，4，6h进样，每次准确量取20ul注入高效液相色谱仪，计算RSD为1.68%，说明本品在6h内稳定。

2.5回收率试验

称取0.5g口服补液盐泡腾片样品三份，分别溶解于三个100mL容量瓶中，再分别加入0.0232mg/mL的5-羟甲基糠醛0.24mL、0.48mL、0.8mL，定容，摇匀。每份溶液分别进样三次，记录色谱图，取三次进样平均值，以峰面积由回归方程计算出回收率。结果见表1：

表1 回收率试验结果

Tab 1 Results of recovery tests

2.6最低检测限试验

准确称取5-羟甲基糠醛对照品1.5mg置于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为储备液。取储备液1.0mL置于100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。再由以上溶液中量取1.0mL置于100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。在信噪比为3的情况下，其检出限为1.5ng/mL。

3.样品中5-羟甲基糠醛含量测定

取口服补液盐泡腾片样品三批各1.85g，分别置于100mL容量瓶中，用纯净水溶解并定容。所配储备液相当于1%葡萄糖溶液。精密量取20uL注入液相色谱仪，进样2次并记录色谱图，以峰面积由回归方程计算5-羟甲基糠醛含量。结果如表2：

表2 样品中5-HMF测定结果

Tab 2 Results of the sample determination（n=2）

4.讨论

利用HPLC法可以准确5-HMF含量，峰面积和含量之间存在良好的线性关系，测定结果具有较高准确度，5-HMF回收率达98.396%。本法不仅适用于口服补液盐泡腾片中5-HMF含量的测定，而且可作为其他情况下5-HMF检测的依据，具有较强的现实意义。

参考文献：

[1]吴立军.天然药物化学[M].4版.北京：人民卫生出版社，2004：73-74.

[2]Cook AP，Macleod TM.Appleton JD，et al.Reversed-phase high-performance liquid chromatographic method for the quantification of 5-hydroxymethyl furfural as the major degradation product of glucose in infusion fluids [J].J Chromatogr A，1989，467：395-401.

[3]Surh Y，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-Hydroxymethyl furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination [J].Chem Res Toxico，l 1994，7（3）：313-318.

[4]Miyakawa Y，Nishi Y，Kato K，et al.Initiating activity of eight pyrolysates of carbohyates in a two - stage mouse skin tum origenesis model[J].Carcinogenesis，1991，12（7）：1169-1173.

[5]国家药典委员会中华人民共和国药典[S].2015年版，二部.附录22.