二甲基亚砜在猪瘟病毒培养中的应用

郝鹏 孔彩平 商晓桂

摘 要：猪瘟病毒能在猪肾细胞和其它一些哺乳动物细胞内增殖。感染性最强的是PK15和ST等几株猪肾和猪睾丸细胞系[1]。本实验室保存的ST细胞株易形成复层，长时间培养形成组织块突起，细胞团易脱落，无法长期连续收获猪瘟病毒。二甲基亚砜（DMSO）不仅可以影响细胞代谢促进蛋白合成[2]而且DMSO对猪瘟病毒囊膜中的脂质和脂蛋白有稳定作用[1]。

关键词：猪瘟病毒；二甲基亚砜；ST细胞；细胞抑制

中图分类号：S851.33 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）11-0044-02

1 材料与方法

1.1 材料来源

1.1.1 细胞

ST细胞，购自美国ATCC。

1.1.2 猪瘟病毒

猪瘟兔化弱毒株，购自中国兽医药品监察所，经家兔传代制备的脾淋毒。

1.1.3 溶液

MEM：宜兴赛尔生物科技有限公司提供。

1.1.4 血清

猪瘟专用血清：金源康生物工程有限公司。

1.1.5 二甲基亚砜（DMSO）

Sigma-Aldrich公司生产。

1.2 方法

（1） 取生长良好的ST细胞（25 cm2培养瓶），待细胞铺满80 %左右时，弃去原培养液，加入含1 %血清的MEM培养液，按培养体积的0.3 %～0.5 %接种合猪瘟病毒。

（2） 按照培养体积分别加入0.5 %；1 %；1.5 %； 2 %；2.5 %的DMSO，对照组不添加DMSO，分别编为1至6号（表1）。

（3） 37 ℃培养96 h后，取样检测，更换培养液，按原比例继续添加DMSO，如此循环，至第10次收获（图1）。

2 结果

添加DMSO抑制劑后可明显抑制细胞生长，随DMSO浓度的增高，抑制细胞生长明显增强，且不影响猪瘟病毒产量。

除第5组（2.5 %DMSO）影响细胞生长，细胞逐渐脱落死亡，产毒偏低外，其余实验组均未影响猪瘟产毒量，且与对照组毒价基本相同。实验1组与对照组细胞生长较快，0.5 %DMSO对细胞的抑制效果不强，后期出现大量细胞团块、凸起。实验2、3、4组均能很好的抑制细胞生长，可用于长期连续产毒（图2）。

3 讨论

二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，常用于细胞冻存、医药生产、有机合成等多种领域。二甲基亚砜对病毒囊膜中的脂质和脂蛋白有稳定作用。10 %DMSO液中的猪瘟病毒对反复冻融有耐受性。添加1 %～2 %的DMSO不影响细胞产毒且可有效控制细胞生长速度，使细胞长时间处于单层培养状态，有利于工艺控制。

参考文献：（2篇，略）