胎盘胎膜中细胞凋亡与分娩发动、产程进展的研究

康 凌李梦梦

（1 河南省南阳市第二人民医院妇产科，河南 南阳 473012；2 南阳医专附属医院，河南 南阳 473000）

胎盘胎膜中细胞凋亡与分娩发动、产程进展的研究

康 凌1李梦梦2

（1 河南省南阳市第二人民医院妇产科，河南 南阳 473012；2 南阳医专附属医院，河南 南阳 473000）

目的 研究胎盘胎膜中羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞凋亡情况与分娩发动的关系。方法 回顾性分析我院49例未临产和顺产患者，用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化和用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞的凋亡指数在未临产组与顺产组有显著性差异（P＜0.05）。结论 胎盘胎膜中细胞凋亡的变化可能与分娩发动、产程进展有关。

胎盘胎膜；细胞凋亡；分娩发动

细胞凋亡是细胞的生理性死亡。在胚胎形成与生长、内环境的稳定、神经系统以及调节免疫功能等方面有重要作用。近年来，胎盘胎膜中细胞凋亡与分娩发动的相关性研究已成为热点。胎盘胎膜细胞的凋亡对妊娠以及结局至关重要，其增殖分化与凋亡的发生可能导致一系列的病理性妊娠，有文献报道，细胞凋亡的变化及异常表达与妊娠的发生、发展有着密切的关系［1］。本实验通过对未临产剖宫产和顺产病例的研究，探讨细胞凋亡与分娩动因的关系，分析细胞凋亡与分娩发动的相关性，为病理性妊娠提供理论依据。

1　资料与方法

1.1一般资料：所有入选病例均为我院2008年5月至2010年10月的妊娠患者，均为足月妊娠初产妇。入选条件：全部病例均无妊娠高血压、前置胎盘、胎盘早剥、羊水过多或过少、胎儿宫内发育受限以及胎膜

早破以及无糖尿病、肝炎、甲状腺功能亢进症、心脏病和肺结核等妊娠合并症，且产程中均无特殊用药。月经周期规律（28～30 d），准确记录末次月经时间，妊娠期间未使用激素或放置宫内节育器，身体素质良好。所有病例分为未临产和顺产两组，其中未临产组18例，患者因臀位、头盆不称或相对头盆不称等选择性剖宫产终止妊娠，B超检测及临床证实胎儿已成熟而无产兆者，年龄22～34岁，平均26.9岁，孕龄37～41周，平均39周；顺产组31例，B超检测及临床证实胎儿已成熟，年龄23～35岁，平均25.9岁，孕龄38～41周，平均39周。两组之间在年龄和孕龄上无统计学差异（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1取材：取胎盘母面中央部约1.2 cm×1.2cm×1.2 cm大小组织块，避开出血、坏死及钙化部位。用Hank's液洗3次，手术剪将胎盘胎膜剪成小块（1 mm2），再用Hank's液3次，转移至小青霉素瓶中，加入5～6倍的0.5%胰酶液，37 ℃消化20～30 min，每隔5 min振荡1次，使细胞分离。加入5 mL DMEM培养液终止胰酶消化，静置10 min，取悬液加入到离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃上清液，再加入Hank's液5 mL，离心，弃上清液，将细胞调整到5×105/mL，转移至25 mL细胞培养瓶中，37 ℃下培养，取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2试剂：Hank's液（购于上海生科生物科技有限公司）；0.5%胰酶（购于上海博升生物科技有限公司）；PBS缓冲液（购于上海生科生物科技有限公司）；DMEM培养液（购于Gibco公司）；Hoechst33258-PI试剂盒（购于南京碧波生物科技有限公司）；Annexin/PITC试剂盒（购于上海优宁维生物科技有限公司），具体操作按试剂盒步骤进行，并设对照组。

1.2.3仪器：细胞培养箱（上海隆拓设备仪器有限公司）；流式细胞仪（北京东讯天地医疗仪器有限公司）；荧光显微镜（上海蔡康光学仪器厂）。

1.3统计学处理：采用统计学软件SPSS 17.0，所得数据进行统计学分析，两组率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结 果

2.1Hoechst 33258/PI染色观察凋亡细胞形态改变：未临产组与顺产组细胞Hoechst 33258/PI染色观察细胞凋亡形态变化比较，可见顺产组凋亡细胞增多，表现为染色质凝集，细胞核碎裂成碎片状等细胞凋亡特征性变化（图1、2）。

图1　未临产组Hoechst 33258/PI染色凋亡细胞形态变化

图2　顺产组Hoechst 33258/PI染色凋亡细胞形态变化

2.2胎盘胎膜中细胞凋亡情况：顺产组羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞凋亡指数均比未临产组升高，两组之间差异有显著性（P＜0.05）。见表1。

2.3流式细胞仪分析细胞凋亡情况：流式细胞仪分析羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘绒毛滋养细胞、蜕膜细胞可见，顺产组与未临产组比较，凋亡率显著升高（P＜0.05）。见图3、4。

表1　未临产组与顺产组凋亡指数比较

图3　未临产组流式细胞仪检测凋亡细胞（A：羊膜上皮细胞；B：绒毛膜滋养细胞；C：胎盘绒毛滋养细胞；D：蜕膜细胞）

图4　顺产组流式细胞仪检测凋亡细胞（A：羊膜上皮细胞；B：绒毛膜滋养细胞；C：胎盘绒毛滋养细胞；D：蜕膜细胞）

3　讨 论

1972年Kerr首次提出细胞凋亡的概念，宣告细胞凋亡探索的开始，之后进行了较多的研究［2］。细胞凋亡在胚胎发育、细胞更替、激素退化、萎缩和、老化以及自身免疫性疾病和肿瘤中，起着举足轻重的作用［3］。细胞凋亡是受环境的刺激引起的一种受基因调控的主动的生理性死亡，以形态学和生化改变为特性［4-5］。本实验用荧光显微镜技术发现，顺产组凋亡细胞增多，表现为染色质凝集，细胞核碎裂成碎片状等细胞凋亡特征性变化，未临产组细胞凋亡相对较少。流式细胞仪分析羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘绒毛滋养细胞、蜕膜细胞可见，顺产组与未临产组比较，凋亡率显著升高（P＜0.05）。实验结果显示随分娩发动胎盘、胎膜组织中发生凋亡的细胞逐渐增多，产程进展越到后期发生凋亡的细胞数目也越多，表明胎盘、胎膜细胞凋亡的变化与分娩发动和产程进展有关。

目前，关于分娩发动与产程进展学说主要理论有雌孕激素理论、前列腺素理论，受体理论，免疫因素理论以及宫颈成熟理论等。现已证明蜕胎盘胎膜可合成和代谢雌、孕激素，使局部子宫内雌激素水平升高，超过孕激素的抑制作用，就可使分娩发动［1］。本实验认为胎盘细胞凋亡与分娩发动关系密切，机制可能为胎盘中的细胞凋亡发生率升高，影响胎盘的作用，使对雌激素、孕激素、前列腺素等的合成和代谢发生变化，从而导致分娩发动与产程进展。细胞凋亡与分娩发动、产程进展的关系以及与上述理论因素的相关性仍需进一步研究。

［1］Kokawa K，Shikone T，Nakano R.Apoptosis in human chorionic villi and decidua during normal embryonic development and spontaneous abortion in the first trimester［J］.Placenta，1998，19（1）： 21-26.

［2］Kerr JF，Wyllie AH，Currie AR.Apoptosis ： abasic biological phenomenon with wide-ranging implications intissue kinetics［J］. Br J Cancer，1992，26（4） ：239-257.

［3］李玉林.病理学［M］.7版.北京：人民卫生出版社，2008： 17-18.

［4］李巨.产科理论与手术［M］.沈阳：辽宁科学技术出版社，1998：147-152.

［5］Aqarwal S，Roy S，Ray A，et al.Arsenic trioxide and lead acetate induce apoptosis in adult rat hepatic stem cells［J］.Cell Biol Toxicol，2009，25（4）： 403-413.

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1671-8194（2015）29-0175-02