厚朴三物栓剂的最佳提取工艺

2015-12-08 05:34胡建萍黄庆德

福建中医药 2015年1期

胡建萍，黄庆德，王杰

（福建中医药大学药学院，福建福州 350122）

厚朴三物汤出自《金匮要略》，由厚朴、大黄、枳实3味药组成。具有行气除满、去积通便的功能。主治实热内积、气滞不行、腹部胀满疼痛、大便不通。为提高用药的便利性及患者的顺应性，我们将厚朴三物汤改剂型为栓剂。根据处方中各药味中有效成分的性质及文献报道，确定将方中厚朴、大黄、枳实3味药用乙醇回流提取，以柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚提取率和收膏率为评价指标，用单因素实验及L9（34）正交实验，对提取次数、乙醇浓度、乙醇用量、提取时间等因素进行考察，优选最佳提取工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器岛津LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；XS205十万分之一电子天平［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司］；FA2004N万分之一电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；KQ-500E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州市长城科教仪器有限公司）；HH-6数显恒温水浴锅（常州市国华电器有限公司）。

1.2 试药厚朴酚、和厚朴酚、柚皮苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110729-200412、110730-201112、110722-201111）；厚朴、大黄、枳实购于福建中医药大学附属第三人民医院，由福建中医药大学药学院杨成梓副教授鉴定，符合《中华人民共和国药典》［1］2010 版相关规定；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水；乙醇、磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件 ① 色谱柱：Diamonsil®Platisil ODS （250 mm×4.6 mm，5 μm）。 ② 流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）。 ③ 梯度洗脱条件：0～10 min A为 20%，10～30 min A由 20%～85%，30～40 min A为85%。④ 检测波长：283 nm；柱温：35℃。 ⑤ 流速：0.8 mL／min。 ⑥ 进样量：10 μL。

2.1.2 对照品储备液的制备取柚皮苷对照品、和厚朴酚对照品、厚朴酚对照品各6.97、7.07、7.59 mg置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得含柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚分别为0.697、0.707、0.759 mg／mL的对照品储备液。

2.1.3 提取液的制备按照处方比例称取厚朴、大黄、枳实共120 g，6倍量70%乙醇水浴回流提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，浓缩，置500 mL量瓶中，加70%乙醇定容，即得提取液。

2.1.4 供试品的制备精密吸取“2.1.3”项提取液1 mL，挥干，用甲醇溶解并移至10 mL量瓶中，加甲醇定容，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.1.5 线性关系考察精密吸取混合对照品储备液各 0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5 mL 至 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成系列浓度的混合对照品溶液，摇匀。分别精密吸取10 μL进样，测定峰面积，以质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚回归方程为：

Y＝2.15×107X－1.70×104，r＝0.9999

Y＝1.78×107X－5.36×104，r＝0.9999

Y＝1.64×107X－3.29×104，r＝0.9999

结果表明：柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚分别在0.00697～0.34850、0.00707～0.35350、0.00759～0.37950 mg／mL线性关系良好。

2.1.6 精密度试验吸取混合对照品储备液1 mL至10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得对照品溶液，按“2.1.1”项条件重复进样6次，测定峰面积，计算柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的RSD分别为0.46%、0.37%、0.39%，表明仪器精密度良好。

2.1.7 重复性试验精密吸取“2.1.3”项同一批样品6份，照“2.1.4”项方法制备，测定峰面积，柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的RSD分别为0.49%、0.32%、0.28%，表明本方法重复性良好。

2.1.8 稳定性实验取同一供试品溶液，室温放置0、2、4、6、8、12、24 h，测定。柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的RSD分别为2.47%、2.31%、2.08%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.9 加样回收试验精密吸取“2.1.3”项已知含量的提取液0.5 mL，分别加入混合对照品溶液0.5 mL，照“2.1.4”项方法制备6份，测定峰面积，计算柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的平均回收率。结果见表1。

2.2 收膏率的测定精密吸取“2.1.3”项提取液10 mL，置105℃已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h至恒重，置干燥器中冷却至室温，迅速称定质量，计算收膏率。

表1 加样回收率测定结果

2.3 提取工艺条件

2.3.1 提取次数按处方比例，称取药材3份，每份24 g，置 500 mL圆底烧瓶中，加入8倍量的70%乙醇，水浴回流，分别提取3次，每次提取1.5 h，纱布滤过，合并滤液，将提取液浓缩，置至100 mL量瓶中，加70%乙醇定容。精密吸取提取溶液1 mL，照“2.1.4”项方法制备供试品溶液，测定，计算柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的提取率，结果表明第3次的提取较好。见表2。

表2 提取次数的实验结果

2.3.2 正交试验设计参考相关文献及预实验结果［2-6］，以柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的提取率及收膏率为评价指标，选用L9（34）正交实验表对乙醇浓度（A）、乙醇用量（B）、提取时间（C）3 个因素，每因素3个水平进行考察。因素水平见表3。

2.3.3 提取液的制备按照处方比例称取厚朴、大黄、枳实共 120 g，按 L9（34）正交实验条件进行水浴回流提取，滤过，合并滤液，浓缩，置500 mL量瓶中，加70%乙醇定容，即得提取液。

表3 正交实验因素

2.3.4 样品测定精密吸取“2.3.3”项提取溶液1 mL，按“2.1.4”项方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的提取率。另精密吸取“2.3.3”项提取溶液 10 mL，按“2.2”项方法进行操作，测得收膏率。正交试验安排及结果见表4，方差分析见表5～表8。

由直观分析及方差分析可知，各因素对提取工艺的影响顺序为A＞C＞B；其中乙醇浓度、提取时间对收膏率和柚皮苷提取率的影响较大，结合直观分析结果，选择A2、C2，乙醇用量对实验结果影响不大。为了使操作简单，适合大生产，选择B1。故确定优选工艺为A2B1C2，即加6倍量70%乙醇提取3次，每次1 h。

2.4 验证试验按处方量称取3份药材，每份24 g，按优选的提取工艺进行3次验证试验，结果表明此工艺稳定可行。见表9。

3 结论

厚朴三物汤为复方制剂，成分复杂，采用单一评价指标筛选提取工艺条件并不全面，不能确保质量。研究［7］表明：厚朴中的厚朴酚及和厚朴酚、大黄中的蒽醌类成分、枳实中的柚皮苷均有抗炎作用，但大黄中的主要成分对光敏感，水解不稳定，且重复性低，故选择厚朴酚、和厚朴酚、柚皮苷作为评价指标。本实验所得最佳提取工艺稳定可行，为有效开发利用厚朴三物汤剂型提供了实验依据。