新疆库尔勒猪源链球菌分离培养及药敏试验

吕转平剡根强（石河子大学动物科技学院 新疆 石河子 832003 ②巴音郭楞职业技术学院 新疆 库尔勒）

新疆库尔勒猪源链球菌分离培养及药敏试验

吕转平①②剡根强①（①石河子大学动物科技学院 新疆 石河子 832003 ②巴音郭楞职业技术学院 新疆 库尔勒）

本试验利用常规的纸片法将20株临床分离的链球菌菌株对11种日常药物进行药敏试验，结果显示，日常所使用的药品中存在很多类对猪链球菌病的作用不明显，猪链球菌菌株对其具有很强的抗性。试验中所分离的菌株对恩诺沙星、青霉素钾以及庆大霉素都存在超强的抗药性，耐药率已经达到100%，氨苄西林的耐药性虽然没有达到100%，但是也表现出了极强的耐药性；猪链球菌对卡那霉素、环丙沙星、头孢噻呋和氟本尼考的敏感度较高，尤其是对环丙沙星的敏感度已经达到100%，说明这几种药品对猪链球菌病的防治能够起到一定的作用；猪链球菌对阿奇霉素、土霉素和磺胺嘧啶呈现出中度耐药性。

猪链球菌 药敏试验 抗药性 敏感

猪链球菌病是由多种不同群的链球菌所引起的一种传染性疾病，最常见的有关节炎型、淋巴结脓肿型和败血型等几种类型。近些年猪链球菌病在我国发生较为普遍，对我国的养殖业经构成了严重威胁。随着该病情的不断蔓延，治疗此病的多种药物也开始走向市场，但是经过实验和实践使用发现临床效果不佳，多种药物没有达到预期效果。青霉素是治疗猪链球菌病的常见药物之一，但是对于革兰氏阳性菌的治疗效果并不显著，这可能与致病性链球菌的抗药性有关。甘孟侯(1985-1991)利用鸡源葡萄球菌进行药敏试验，结果表明，菌株对青霉素的抗药性由最初的52%上升到100%；链霉素的抗药性由36%上升至50.8%；四环素的耐药性由71.2%上升至85%。1967～1975年美国就曾报道沙门氏菌总的耐药率由最初的22%上升到55%。通过这两组数据可以看出，菌体的耐药性是逐渐增强的，这就致使一些抗生素药类在临床上的效用不大，最终会导致猪链球菌病的流行，提高了猪的死亡率。因此，要加强对细菌耐药性的监查工作，掌握细菌的抗药情况。本论文希望能够通过对药物的药敏实验来筛选出对猪链球菌病具有敏感反应的药物，为临床治疗提高相关依据。

1 材料与方法

1.1 试验药品和药敏纸片

1.1.1 药敏纸片 YZB/国1748-2006《抗生素药敏纸片》北京天坛药物生物技术开发公司。

1.1.2 试验药品 环丙沙星、恩诺沙星、青霉素钾、氨苄西林(北京端木圣达生物技术有限公司)，阿奇霉素、头孢噻呋、氟本尼考、卡那霉素(杨凌正大兽药生物科技有限公司)，庆大霉素、土霉素、磺胺嘧啶(广东利润生物制药有限公司)，共11种。

1.2 病例确诊

1.2.1 病料来源 选自库尔勒7个规模化养猪场20头病猪。

1.2.2 临床症状 20头病例体温都存在显著升高现象，精神萎靡，食欲不振，四肢无力，行走不便，呼吸急促，并且在四肢、颈部、耳廓以及腹下皮肤都出现血点。个别猪伴有腹泻和尿血现象。

1.2.3 病理剖析 在病死猪的腹下、颈下和四肢末端皮肤出现紫色出血斑点，急性型死亡的猪从口鼻中流出颜色发暗的血液。剖检还可以清晰看到胸腔内存有大量的红色和浑浊的液体，含有黄色纤维素物质，并且心包液增量。心机外膜与心包膜连在一起，心机柔软并颜色变淡。机体的右心室扩张，心耳、心冠状沟和右心室内膜有充血现象和出现斑点，脾脏增大，颜色变灰或暗红色。机体淋巴结水肿伴有出血状。患病关节存有浆液纤维素性炎症。

1.2.4 染色镜检 对所取的发病部位触片并革兰氏染色后进行镜检，镜检发现革兰氏阳性球菌，多呈单个或者成对排列，同时也存在几个相连的短链。

1.2.5 细菌培养 无菌状态下取猪的心脏、脾脏、肺脏、淋巴结和肿大的关节组织，之后接种到普通的血液琼脂板上和马丁琼脂平板上，在37℃恒温下培养20～24h。在血液琼脂平板上可以看到无色的、光滑的、边缘整齐的、直径为0.5～1.0mm的细小菌落，周边形成无色透明的溶血环。之后从血液琼脂平板和马丁琼脂平板上选择典型菌落进行涂片，观察可见单个的、成对的、短链的和极少长链的链球菌。

1.2.6 生化试验 通过利用典型菌落进行生化实验发现，可发酵葡萄糖、乳糖以及蔗糖，都不能在0.13%的美兰牛乳和6.6%的氯化钠肉汤中生长，但是能够水解淀粉，这些特性符合猪链球菌的特质。

1.2.7 药敏试验 按照常规纸片法进行操作。在无菌状态下来挑取链球菌菌落，在对其摇匀之后涂在马丁血清琼脂平板上，之后将实验所需要的11种药敏纸片按照1.5cm的距离放在培养基的表面，并且温度需要保持在37℃培养18～24h之后取出，观察是否存在抑菌圈或者抑

菌圈的大小。

2 试验结果

药敏试验的判定以抑菌圈的大小为标准。试验中药敏纸片的周围会形成抑菌圈，当抑菌圈的直径在15mm以上(包含15mm)说明该药品是高敏感；当抑菌圈的直径在10～15mm之间，说明药品具有中毒敏感；当抑菌圈的直径在10mm以内，则该药品表现为低敏感性亦耐药性。具体药敏试验结果如附表。

附表 药品药敏实验结果 (株、%)

3 讨论与小结

（1）从附表中可以看出，日常所使用的药品中存在很多类对猪链球菌病的作用不明显，猪链球菌菌株对其具有很强的抗性。试验中所分离的菌株对恩诺沙星、青霉素钾以及庆大霉素都存在超强的抗药性，耐药率已经达到100%，氨苄西林的耐药性虽然没有达到100%，但是也表现出了极强的耐药性；猪链球菌对卡那霉素、环丙沙星、头孢噻呋和氟本尼考的敏感度较高，尤其是对环丙沙星的敏感度已经达到100%，说明这几种药品对猪链球菌病的防治能够起到一定的作用；猪链球菌对阿奇霉素、土霉素和磺胺嘧啶呈现出中度耐药性。（2）通过试验可以看出，日常用药中有很多类对猪链球菌是没有作用的，菌株对其存在耐药性。而菌株能够产生耐药性一定程度上是与药物的不合理利用有关。其他实验报告曾指出，我国对药物的利用具有随意性和不合理性，缺乏科学用药的意识，滥用现象较为严重。笔者对库尔勒地区多家养殖场进行调研发现，部分养殖场一直使用常用药物作为防病添加剂。这些养殖场对某些药物的使用俨然成为一种习惯。比如最常用的青霉素，在养殖场中作为万能药来使用，猪的消化问题、肠道的问题的首选药物之一。（3）猪链球菌对药物产生耐药性与市场环境也存在关联性。药品商家的违法行为致使大量假药流入市场，而这部分药品对猪链球菌并没有起到杀灭作用，如果不经过化验，养殖场很难知道假药的存在，慢慢其危害性就会显露出来，猪链球菌的发展扩散，最后导致猪的死亡，因此也会加剧养殖业的经济损失，严重阻碍养殖业的发展。

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[2] 乎显生, 李静姬. 1株猪源性链球菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 中国公共卫生, 2006(22): l-2.

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