胸腹水高荧光细胞筛查恶性积液价值研究

左路广，马 科，冯 博，周素涛，李 洁

胸腹水高荧光细胞筛查恶性积液价值研究

左路广，马 科，冯 博，周素涛，李 洁

目的：研究胸腹水高荧光细胞筛查恶性积液价值。方法：选取2014年1月至12月住院、门诊患者400例，收集临床诊断结果及胸腹水标本，选用Sysmex XE-5000血细胞分析仪检测高荧光细胞数并涂片染色镜检，运用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线，分析研究胸腹水高荧光细胞筛查恶性积液的灵敏度、特异性、阳性似然比及阴性似然比，探讨高荧光细胞对恶性积液的诊断价值。结果：恶性肿瘤患者组高荧光细胞数明显高于非恶性肿瘤患者组（Z=-7.372，P＜0.05），高荧光细胞数曲线下面积（area under curve，AUC）为0.801，灵敏度70.67%，特异性84.31%，阳性似然比4.50，阴性似然比0.35。结论：检测胸腹水高荧光细胞可用于恶性积液的筛查，当胸腹水标本高荧光细胞数临界值（cut-off值）≥68时，应进一步检查并跟踪随访。

胸腹水；高荧光细胞；恶性积液

0 引言

近年来，环境变差、食品质量不良等问题导致人群患有恶性肿瘤的概率增大。对于肿瘤早期病变检测，目前主要以病理学、影像诊断为依据，病理学检测受标本取材部位、医师能力及肿瘤疾病的发展程度等多种因素影响，诊断结果差异较大；影像学检查不易发现肿瘤早期病变，当肿瘤发展至影像、病理学技术检查程度时，多已进入中晚期，延误疾病的预防、治疗[1-2]，寻找提示肿瘤早期病变的指标亟待解决。Sysmex XE-5000血细胞分析仪具有检测体液细胞功能，还能提供与肿瘤细胞密切相关的高荧光细胞计数检测项目[3]。高荧光细胞（high-fluorescent cells，HFC）核酸含量较高，仪器进行荧光染色后具有高荧光强度，细胞核酸染色后应用流式细胞技术检测荧光强度，当光照射到经过荧光染色的细胞上时，会产生比入射光波长更长的光。随着染色集团浓度增加，荧光强度亦增加。通过测量荧光强度，可以得到有关细胞内部结构的信息，现阶段流式细胞技术已被广泛应用于各类血细胞分析仪。Sysmex XE-5000血细胞分析仪采用鞘流电阻抗检测方法，结合半导体激光流式细胞技术、特殊化学试剂及核酸荧光染色技术对体液中高荧光细胞（HF-BF#）进行定量测定，是临床检验工作中的重要仪器[4]。胸腹水中出现高荧光细胞对恶性肿瘤诊断和评价具有重要意义，提示体液中可能存在恶性细胞，文章借助Sysmex XE-5000血细胞分析仪体液模式[5]，对胸腹水进行测定，研究高荧光细胞筛查恶性积液的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

河北北方学院附属第一医院2014年1月至12月住院及门诊患者体液标本400例，男性258例，女性142例，年龄19～89岁，平均年龄（63.5±16.2）岁。所有患者均知情同意，符合本院医学伦理委员会标准。

1.2 仪器与试剂

Sysmex XE-5000血细胞分析仪，原装配套试剂和校准品，e-CHECK（XE）高值、中值质控品，奥林巴斯显微镜，BASO染液（A、B），EDTA-K2抗凝管。

1.3 方法

1.3.1 标本采集

由临床医师按照标准操作规程经患者胸腔、腹腔穿刺采集标本2 ml，注入EDTA-K2抗凝管中，立即送检，2 h内进行检测。

1.3.2 细胞计数

Sysmex XE-5000切换至体液模式，将标本缓慢颠倒混匀8次，手工上机操作，记录体液高荧光细胞数（HF-BF#），并涂片染色镜检，记录计数100个白细胞的同时出现的间皮细胞、巨噬细胞数，并计算百分比。

1.3.3 病例收集归纳

收集归纳体液标本患者的性别、年龄、临床及病理诊断结果等信息，对各类病变进行分类。恶性肿瘤患者纳入条件：（1）胸腹水病理脱落细胞学检查发现肿瘤细胞；（2）组织病理学诊断为恶性肿瘤；（3）实验室、影像学检查诊断为恶性肿瘤并跟踪证实。

1.4 统计学处理

所有数据选用SPSS 19.0进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正态性检验

所收集标本中恶性肿瘤患者标本75例，非恶性肿瘤标本325例，病例分类见表1。对2组标本高荧光细胞数进行正态性检验，恶性肿瘤患者组偏度5.761，峰度39.166；非恶性肿瘤患者组偏度9.424，峰度95.056，均属于偏态分布。对2组数据进行Mann-Whitney U检验，Z=-7.372，P＜0.05，2组数据存在统计学差异，恶性肿瘤患者高荧光细胞中位数为118，非恶性肿瘤患者高荧光细胞中位数为15。

表1 病例分类 例

2.2 诊断价值研究

仪器检测高荧光细胞数记为HF-BF#和HFBF%，结合所收集患者诊断及仪器检测结果，运用受试者工作特征（receiveroperatorcharacteristic，ROC）曲线进行分析，可知曲线下面积（area under the curve，AUC）=0.773，高荧光细胞对于恶性积液的诊断价值中等，根据统计学分析，高荧光细胞数临界值（cut-off）值为69。

2.3 诊断指标评价

依据cut-off值，当高荧光细胞数≥69时，记为阳性，反之则记为阴性。结合标本临床诊断，同时诊断为阳性的标本记真阳性，同时诊断为阴性的标本记真阴性，临床诊断阳性高荧光计数检测阴性的记为假阴性，临床诊断阴性高荧光计数检测阳性的则记为假阳性。标本中真阳性53例，假阴性22例，假阳性69例，真阴性256例，见表2。

表2 高荧光细胞诊断指标评价统计 例

由表2可知：

灵敏度=真阳性/恶性肿瘤患者组=53/（53+22）= 70.67%

特异性=真阴性/非恶性肿瘤患者=

256/（256+69）=78.77%

阳性似然比=灵敏度/（1-特异性）=

70.67%/（1-78.77%）=3.32

阴性似然比=22（69+256）/256（53+22）=0.37

由于胸腹水常含间皮、巨噬等细胞容易被计数为高荧光细胞，所以镜检过程应排除间皮细胞、巨噬细胞，修正高荧光细胞数后选用受试者工作特征曲线（如图1所示）进行研究，AUC=0.801。

图1 高荧光细胞修正后诊断恶性积液价值ROC曲线

此时，cut-off值为68，标本中真阳性53例，假阴性22例，假阳性51例，真阴性274例，见表3。

由表3可知：

灵敏度=真阳性/患 者 组 =53/（53+22）=70.67%

特异性=真阴性/对照组=274/（274+51）=84.31%

阳性似然比=灵敏度/（1-特异性）= 70.67%/（1-84.31%）=4.50

阴性似然比=22（51+274）/274（53+22）=0.35

3 讨论

现阶段，肿瘤检测诊断依然局限于“以病理学检查为金标准，综合各种临床检查”，这不仅使患者有较大经济负担，而且由于确诊实验耗时长，加之检验者技术水平差异[6]，易造成患者早期诊断延误，不能满足临床需要。

表3 高荧光细胞修正后诊断指标评价统计 例

高荧光细胞是一类核酸量较高，仪器检测具高荧光强度的细胞（如图2所示）。Sysmex XE-5000血细胞分析仪采用鞘流电阻抗检测方法，结合半导体激光流式细胞技术、特殊化学试剂及核酸荧光染色技术对体液中RBC、WBC、HF-BF进行定量测定。

图2 高荧光细胞

由实验数据可知，应用Sysmex XE-5000血细胞分析仪检测胸腹水高荧光细胞，恶性肿瘤患者组与非恶性肿瘤患者组经Mann-Whitney U检验，Z= -7.372，P＜0.05，2组数据存在统计学差异。恶性肿瘤患者组高荧光细胞中位数为118，明显高于非恶性肿瘤患者组高荧光细胞中位数15。检测胸腹水标本高荧光细胞下面积AUC=0.801，灵敏度70.67%，特异性84.31%，阳性似然比4.50，阴性似然比0.35，表明应用Sysmex XE-5000血细胞分析仪检测胸腹水高荧光细胞对恶性积液的诊断价值为中等，且检测高荧光细胞是应用Sysmex XE-5000血细胞分析仪体外检测，不能完全反映体腔内癌性变化，因此检测高荧光细胞只能筛查癌变高风险群体，并不能作为癌症患者的确诊实验[7-9]。由于标本为临床医生穿刺身体组织取得，检测过程中可能将间皮细胞、巨噬细胞误计数为高荧光细胞，影响细胞计数准确性。由实验数据可知，对荧光计数较高的标本进行染色镜检修正高荧光细胞计数，高荧光细胞的AUC由0.773提高至0.801，证明修正后的高荧光细胞计数筛查能力较修正前增强；灵敏度仍然为70.67%，特异性由78.77%提升至84.31%，提升5.54%，则假阳性率会随之下降；阳性似然比由3.32提升至4.50，表明对真实患某种恶性肿瘤患者的筛查能力提升；阴性似然比由0.37降至0.35，即正确判断为阳性的可能性是错误判断为阳性的可能性倍数有所提高，降低了漏诊率。实验结果表明，对于检测高荧光细胞计数较高的临床标本，应进行涂片染色镜检排除间皮细胞、巨噬细胞对于高荧光细胞的干扰，增强细胞计数准确性，与Boer、Tanaka等报道基本一致[10-11]。

实验中，发现51例标本（乙型肝炎患者13例，肝硬化患者9例，胸膜炎8例，腹膜炎5例，慢性阻塞性肺炎患者8例，肺源性心脏病患者5例，肺结核患者3例），高荧光数量高于实验得出的cut-off值68，且临床诊断或影像、病理学检查并未提示为恶性肿瘤患者，由实验可知该类患者可能存在患恶性肿瘤风险，因此对于该类患者建议临床医生作好记录，对患者进行跟踪随访，嘱咐其按时就诊，并进行影像、病理学复查，降低恶性肿瘤漏检风险。

[1]Lee J H，Chang J H.Diagnostic utility of serum and pleural fluid carcinoembryonic antigen，neuron-specific enolase，and cytokeratin 19 fragments in patients with effusions from primary lung cancer[J]. Chest，2005，128（4）：2 298-2 303.

[2]Korczynski P，Krenke R，Safianowska A，et al.Diagnostic utility of pleural fluid and serum markers in differentiation between malignant andnon-malignantpleuraleffusions[J].EurJMedRes，2009，14（Suppl4）：128-133.

[3]Zimmermann M，Otto C，Gonzalez J B，et al.Cellular origin and diagnostic significance of high-fluorescent cells in cerebrospinal fluid detected by the XE-5000 hematology analyzer[J].Int J Lab Hematol，2013，35（6）：580-588.

[4]马科，左路广，李宝亮，等.Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪检测血液标本性能评价研究[J].医疗卫生装备，2013，34（12）：80-82.

[5]Perné A，Hainfellner J A，Womastek I，et al.Performance evaluation of the Sysmex XE-5000 hematology analyzer for white blood cell analysis in cerebrospinal fluid[J].Arch Pathol Lab Med，2012，136（2）：194-198.

[6]温小梅，孙嘉峰.Sysmex XE-5000血细胞分析仪用于体液白细胞计数及分类的评价[J].福建医药杂志，2014，36（3）：91-92.

[7]Zimmermann M，Otto C，Gonzalez J B，et al.Cellular origin and diagnostic significance of high-fluorescent cells in cerebrospinal fluid detected by the XE-5000 hematology analyzer[J].Int J Lab Hematol，2013，35（6）：580-588.

[8]Takemura H，Tabe Y，Ishii K，et al.Evaluation of capability of cell count and detection of tumor cells in cerebrospinal and body fluids by automatedhematologyanalyzer[J].RinshoByori，2010，58（6）：559-564.

[9]罗丽贞，刘春林，吴清念，等.Sysmex XE-5000血液分析仪体液模式筛查肿瘤细胞价值的评价[J].检验医学，2014，29（2）：169-171.

[10]Boer K，Deufel T，Reinhoefer M.Evaluation of the XE-5000 for the automated analysis of blood cells in cerebrospinal fluid[J].Clin Biochem，2009，42（7/8）：684-691.

[11]Tanaka C，Nagai T，Nakarnura M，et al.Automated hematology analyzer XE-5000：overview and basic performance[J].Sysmex J lnt，2008，17：125-130.

（收稿：2015-01-20 修回：2015-05-15）

Study on high-fluorescent cell for screening malignant hydrothorax or ascites

ZUO Lu-guang,MA Ke,FENG Bo,ZHOU Su-tao,LI Jie
（Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Hebei North University, Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China）

ObjectiveTo study the value of high-fluorescent cell for the screening of malignant hydrothorax or ascites.MethodsThe clinical diagnosis results and hydrothorax or ascites specimens of 400 outpatients registered from January to December in 2014 were collected,and high-fluorescent cells were counted with Sysmex XE-5000 blood cell analyzer, and then stained for microscopy.Receiver operating characteristic(ROC)curve was used to explore the sensitivity,specificity,positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of high-fluorescent cell for screening malignant hydrothorax or ascites.ResultsThe numbers of high-fluorescent cells of the cancer patients were significantly higher than those of the non-cancer patients,with Z equal to-7.372 and P less than 0.05.The values of the area under curve(AUC),sensitivity, specificity,positive likelihood ratio and negative likelihood ratio were 0.801,70.67%,84.31%,4.50 and 0.35 respectively.ConclusionDetection of high-fluorescent may be used to screen malignant hydrothorax or ascites,and further examination and follow-up have to be performed in case the number of high-fluorescent cells in the hydrothorax or ascites is not less than 68.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（9）：78-80]

hydrothorax and ascites;high-fluorescent cell;malignant effusion

R318；R446.1

A

1003-8868（2015）09-0078-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.09.078

河北省高等学校科学技术研究青年基金项目（Q2012141）

左路广（1987—），男，检验师，主要从事临床检验工作，E-mail：zuoluguang@163.com。

075000河北张家口，河北北方学院附属第一医院检验科（左路广，马 科，冯 博，周素涛，李 洁）

马 科，E-mail：mkzyj@139.com