一种小型复方雷帕霉素栓剂的制备及其体外质量评价

周伟忠，傅红兴，吴岚岚，刘成洋，廖丽，黄斌炯

（1.义乌市中医医院 药剂科，浙江 金华 322000；2.温州医科大学 药学院，浙江 温州 325035）

·技术与方法·

一种小型复方雷帕霉素栓剂的制备及其体外质量评价

周伟忠1，傅红兴2，吴岚岚1，刘成洋2，廖丽2，黄斌炯2

（1.义乌市中医医院 药剂科，浙江 金华 322000；2.温州医科大学 药学院，浙江 温州 325035）

目的：制备一种适用于大型动物腹部器官移植术后的免疫抑制药物栓剂，并对其进行质量评价。方法：以雷帕霉素（rapamycin）和他克莫司（tacrolmius）为原料药，聚乙二醇2000和聚乙二醇4000为主要基质，采用热熔法结合定量注模成型工艺制备复方栓剂，并对其外观、重量差异、融变时限、药物含量进行评价。结果：复方雷帕霉素栓剂外观呈白色半透明状，室温下硬度较好，长度短，重量差异、融变时限和药物含量均符合栓剂要求。结论：本方法制备的复方雷帕霉素栓剂质量符合栓剂要求，为该药物的新药开发奠定了基础。

复方；雷帕霉素；他克莫司；栓剂；质量评价

大型实验动物腹部器官移植术后往往进食困难，但及时应用免疫抑制剂又是术后抗排异治疗的重要内容[1]。栓剂可经直肠给药，避免口服和胃肠道药物吸收的首过效应，达到全身疗效，可作为替代胃肠道给药的一种良好的选择[2]。

免疫抑制药物的联合应用可起到减量、增效和降低不良反应[3]的效果，如临床上经常同时应用雷帕霉素（rapamycin）和他克莫司（tacrolmius）作为免疫抑制剂[4-6]。本研究以雷帕霉素和他克莫司为模型药物，采用热熔法结合定量注模成型工艺制备了含该两种药物的小型复方雷帕霉素栓剂，并对其体外质量进行了评价，为该药物应用于犬或猕猴等动物腹部器官移植打下了基础。

1 材料和仪器

1.1 试剂 雷帕霉素原料药（纯度98.0%，批号：P130825，广州亿邦医药科技有限公司），标准品（纯度99.0%，批号：20130605，大连美仑生物技术有限公司）；他克莫司原料药（纯度98.0%，批号：1309892，湖北盛天恒创生物科技有限公司），标准品（纯度99.5%，批号：20130726，上海惠诚生物科技有限公司）；聚乙二醇2000、聚乙二醇4000，甘油（国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，德国默克公司），其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器 SJM-10子弹型栓剂模型（长沙市岳麓区常宏制药机械设备厂）；大功率恒温磁力搅拌器（90-1B，上海司乐仪器有限公司）；融变时限仪（WZ-50CZ，浙江大学医学仪器有限公司）；色谱柱：Agilent Eclips XDB-C18 4.6 mm×250 mm，Agilent高效液相色谱仪，VWD检测器（Agilent1100，美国）；电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

2 实验方法

2.1 复方雷帕霉素栓剂的制备

2.1.1 处方：根据前期摸索[7]，得到栓剂配方如下：聚乙二醇2000 0.208 g，聚乙二醇4000 5.06 g，甘油0.8 g，蒸馏水0.528 mL，雷帕霉素50 mg，他克莫司50 mg，制备栓剂10粒。

2.1.2 制备工艺：采用热熔法[3]结合定量注塑成型工艺制备栓剂，具体如下：取30 mL烧杯，加入磁力搅拌子，依次称取聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、甘油和蒸馏水至烧杯中，放至带加热功能的磁力搅拌器上，70 ℃水浴融化；称取雷帕霉素和他克莫司至已融化的含基质烧杯中，继续水浴70 ℃搅拌15～20 min，使两种药物混悬均匀；用1 mL一次性注射针筒依次吸取已经混悬好的含药混悬栓剂的基质0.66 mL，快速推注至含脱模剂（乙醇）的栓剂模型中，等其冷却，或置于-4 ℃冰箱中3～5 min，等其充分凝固后，脱模即得。

2.2 栓剂的质量评价

2.2.1 栓剂的外观检查：栓剂应要求外形光滑完整，不得软化、变形或干裂；颜色均匀一致，药物和基质混合完全；塞入腔道后应无刺激性，并能融化、软化[8]。

2.2.2 重量差异检查：根据《中国药典》[8]规定：取栓剂10粒，精密称定质量，求得平均粒重后，再分别精密称定各粒的质量。每粒的质量与平均粒重相比较，超出质量差异限度的粒数不得多于1粒，并不得超出限度的一倍。

2.2.3 融变时限：取栓剂3粒，按《中国药典》2010年版[8]融变时限检查装置和检查方法检查，水溶性基质的栓剂应在60 min内全部溶解。如有一粒不合格应另取3粒复试，应符合规定。

2.2.4 药物含量测定：

2.2.4.1 色谱方法的建立：参考文献[9-10]并结合实验室前期摸索，色谱条件如下：色谱柱：Agilent Eclips XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-3.3%磷酸溶液（65∶35）；流速：1.0 mL·min-1；柱温：50 ℃；紫外检测波长：210 nm；进样量：20 μ L；走样时间：20 min。

2.2.4.2 样品溶液的配制：配制空白栓剂样品溶液，称取不含药物的空白栓剂样品0.1450 g（相当于1/5含药栓的重量），以乙腈为溶剂溶解并定容至10 mL即得；配制两种药物标准品溶液，分别称取雷帕霉素标准品和他克莫司标准品各1.0 mg，混合后以乙腈为溶剂溶解并定容至10 mL即得；配制供试品溶液，称取含药栓剂样品0.1462 g（相当于1/5含药栓的重量），以乙腈为溶剂溶解并定容至10 mL即得。分别以此三种溶液进样，观察药物的出峰情况，记录出峰时间、分离度、理论塔板数等参数。

2.2.4.3 线性关系考察：精密称取雷帕霉素标准品和他克莫司标准品各10.0 mg，分别置于25 mL干燥棕色容量瓶中，加适量乙腈振荡溶解，用乙腈定容至终浓度为400.0 μ g/mL，作为标准品储备液。用移液管分别精密量取该储备液0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL至10 mL干燥棕色容量瓶中，用乙腈稀释至浓度为8.0、20.0、40.0、80.0、200.0 μ g/mL的工作液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，母液进样方法同上。以浓度（C，μ g/mL）为纵坐标，峰面积（A）为横坐标进行线性回归。

2.2.4.4 药物的含量测定：取3批复方雷帕霉素栓剂样品，切碎后精密称取栓剂粉末（含雷帕霉素和他克莫司各约0.5 mg），置于50 mL干燥容量瓶中，加入乙腈振摇使其溶解并定容，吸取标准品溶液、供试品溶液各20 μ L进样，测定雷帕霉素和他克莫司的峰面积，并按外标法计算含量。

2.3 统计学处理方法 采用SPSS 17.0统计软件进行方法分析处理。所有数据以±s表示。

3 结果

3.1 外观色泽 复方雷帕霉素栓剂外观呈白色半透明状，表面光滑完整，在室温25 ℃下成型性较好，有一定的硬度，无软化、变形或干裂，如图1所示。本方法制备的栓剂长度为（16.0±0.7）mm，远短于该模具常规方法制备的栓剂长度（29.3±0.6）mm。

图1 复方雷帕霉素栓剂外观图

图2 各药物的高效液相色谱图

3.2 重量差异 本实验制备的栓剂重量为（0.67± 0.01）g，差异非常小，而且符合栓剂质量标准中对重量差异的要求（＜±10%），远低于该模具常规方法制备的普通聚乙二醇栓剂的重量[为（1.75±0.05）g]。

3.3 融变时限结果 本实验制备的复方雷帕霉素栓剂融变时限为（16.4±0.8）min，水性基质栓剂融变时限＜60 min，因此本栓剂符合栓剂融变时限要求。

3.4 含量测定结果

3.4.1 各药物的出峰结果：抽取空白栓剂样品溶液、标准品溶液和供试品溶液各20 μ L进样，色谱图见图2。

由图2可见，他克莫司与雷帕霉素有较好的分离，两种药物的色谱峰保留时间分别为约15和18 min，分离度R为2.01，理论板数分别为2 358和3 618，空白栓剂成分在该处不出峰。

3.4.2 线性关系结果：雷帕霉素和他克莫司的峰面积和浓度的回归方程分别为：C=0.0616A+0.5503，r=0.9999和C=0.0615A+0.3639，r=0.9999；结果表明两药物浓度在8.0～400.0 μg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好。

3.4.3 药物的含量测定：取3批复方雷帕霉素栓剂样品配成雷帕霉素和他克莫司溶液后，HPLC进样20 μL，对各药物的峰面积按外标法计算含量，结果见表1。

表1 样品含量测定结果

4 讨论

为解决大型实验动物腹部器官移植（如猕猴的肾移植、胰岛细胞移植）术后，口服免疫抑制剂困难的问题，并结合动物直肠较短和免疫抑制剂需剂量准确的特点，本实验开发了该小型复方雷帕霉素栓剂，可提高实验动物的给药顺应性，弥补常规口服免疫抑制剂的不足和常规栓剂长度较长（对于实验动物）及切后使用不便的缺陷。如果动物实验结果理想，该药可进一步开发成临床应用的复方免疫抑制剂，具有较好的应用前景。

本研究为相关小型栓剂的开发提供了参考，也为该新型免疫抑制药物的开发奠定了基础。

[1] Niemann CU,Eilers H.Abdominal organ transplantation[J].Minerva Anestesiol,2010,76(4):266-275.

[2] 崔福德.药剂学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2011:298-305.

[3] Wei X,Jiang H,Li Q.Organ transplantation in China—not yet a new era[J].Lancet,2014,384(9945):741.

[4] 陈国勇,孙建军,谢寒冰,等.他克莫司和雷帕霉素对肝癌移植患者Foxp3+Treg产生的影响[J].中国医药指南,2011,9(36):26-27.

[5] Flechner SM,Gurkan A,Hartmann A,et al.A randomized,open-label study of sirolimus versus cyclosporine in primary de novo renal allograft recipients[J].Transplantation,2013,95(10):1233-1241.

[6] Soleimani AR,Kamkar I,Nikoueinejad H,et al.Comparison of cyclosporine and sirolimus effects on serum creatinine level over five years after kidney transplantation[J].Transplant Proc,2013,45(4):1644-1647.

[7] 朱雁林,傅红兴,周伟忠,等.雷帕霉素栓剂的制备及质量评价[J].温州医科大学学报,2014,44(2):148-150.

[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社,2010:附录ID.

[9] 陈悦.HPLC法测定他克莫司的含量及有关物质[J].药物分析杂志,2008,28(2):309-313.

[10] 魏静,徐国旭,龚铠,等.雷帕霉素眼膏的制备及其含量测定[J].中国现代医药杂志,2010,12(6):11-14.

（本文编辑：吴昔昔）

Preparation and in vitro quality evaluation of a small type of compound rapamycin suppositories

ZHOUWeizhong1,FU Hongxing2,WU Lanlan1,LIU Chengyang2,LIAO Li2,HUANG Binjiong2.
1.Department of Pharmacy,Yiwu Chinese Medicine Hospital,Jinhua,322000; 2.School of Pharmacy,Wenzhou Medical University,Wenzhou,325035

Objective:To develop a small type of suppository of immunosuppressive agents to suit for large animals after abdominal organ transplantation,and carry out it’s quality evaluation.Methods:Rapamycin and tacrolimusas were chosed as active pharmaceutical ingredients,and polyethylene glycol 2000,polyethylene glycol 4000 were used as substrate.Melting followed with a quantitative injection molding process was used to prepare he small type of compound suppository.The appearance,weight difference,melting time and drug content of he suppository were evaluated.Results:The compound rapamycin suppository was translucent,white,and had good hardness at room temperature.It’s short,and the weight variation,melting time and drug content were conormed to the requirements of the suppository.Conclusion:The compound rapamycin suppository prepared by his method conforms to the quality of suppository,which makes a good foundation for the development of the new drug.

compound; rapamycin; tacrolimus; suppositories; quality evaluation

R944

B

10.3969/j.issn.2095-9400.2015.04.011

2014-09-11

义乌市科研计划项目（13-3-28）。

周伟忠（1964-），男，浙江绍兴人，副主任药师。