复方九节茶乳膏的抗炎镇痛及皮肤安全性的初步研究

李　杰，欧余航，陈　强*

(1.中国人民解放军第175医院/厦门大学附属东南医院药剂科，漳州　363000；2.福建中医药大学药学院，福州　350122)



复方九节茶乳膏的抗炎镇痛及皮肤安全性的初步研究

李杰1，欧余航2，陈强2*

(1.中国人民解放军第175医院/厦门大学附属东南医院药剂科，漳州363000；2.福建中医药大学药学院，福州350122)

摘要：目的初步评价复方九节茶乳膏的抗炎、镇痛作用及其使用安全性。方法采用醋酸扭体法和小鼠耳廓肿胀模型观察镇痛、抗炎作用，并进行家兔皮肤刺激实验和豚鼠皮肤过敏实验。 结果复方九节茶乳膏能显著性减少冰醋酸引起的小鼠扭体次数；抑制由二甲苯所致小鼠耳廓肿胀。复方九节茶乳膏对家兔完整皮肤无刺激性，单次给药破损皮肤组1只家兔出现轻度水肿，24 h后恢复正常；豚鼠实验未出现变态反应。结论 复方九节茶乳膏具有明显的镇痛、抗炎作用；复方九节茶乳膏对家兔皮肤无明显刺激性作用，对豚鼠皮肤无明显致变态反应作用。

关键词：复方九节茶乳膏；抗炎;镇痛；安全性

九节茶为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb.) Nakai的干燥地上部分[1]。复方九节茶乳膏是由九节茶、冰片制成的外用中药乳膏剂，二药合用具有活血化瘀、消肿止痛的功效，可用于关节扭伤、肌肉拉伤、韧带捩伤等急性软组织损伤。本实验主要采用醋酸扭体法观察镇痛作用；采用小鼠耳廓肿胀模型观察抗炎作用。根据《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》，《中药天然药物免疫毒性(过敏性、光过敏反应)研究技术指导原则》对该制剂进行了家兔皮肤刺激性以及豚鼠皮肤致敏性实验研究，进一步探讨该制剂临床使用的安全性。

1仪器与材料

1.1仪器DRL-1型实验室乳化机(上海迪真化工设备有限公司)；CP214电子天平(奥豪斯仪器有限公司)；8 mm打孔器。

1.2试药硬脂酸98 g，十八醇35 g，甘油122 g，液状石蜡108 g，吐温-80 54.5 g，山梨酸钾3 g，九节茶浸膏100 g，加水适量制成复方九节茶乳膏1 000 g(动物给药按广东省中药材标准收载的药材用量换算)；九节茶乳膏(不含冰片，自制)；空白基质(自制)；扶他林(北京诺华制药有限公司)；复方醋酸地塞米松乳膏(沈阳圣元药业有限公司)；二甲苯，冰醋酸，2，4-二硝基氯代苯(分析纯，成都西亚化工股份有限公司，批号201205120)、丙酮(分析纯，衡阳市凯信化工试剂有限公司，批号20120425)。

1.3实验动物昆明种小白鼠，体质量18～22 g，雌雄各半，清洁级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证编号：SCXK(沪)2007-0005；健康成年新西兰兔，体质量2.5～3.0 kg，雌雄各半，由上海市松江区松联实验动物场提供，许可证编号：SCXK(沪)2012-0011；豚鼠体质量300～350 g，雌雄各半，由上海市松江区松联实验动物场提供，许可证编号：SCXK(沪)2012-0011。

2方法

2.1(复方)九节茶乳膏制备取处方量的九节茶水提醇沉上清液、甘油、山梨酸钾、吐温-80和适量纯化水，加热至80 ℃作为水相；另取处方量的十八醇、液体石蜡和硬脂酸在80 ℃水浴上熔化后作为油相。油相水相均保温5 min，然后将油相水相同时缓缓加入到容器中，按同一方向搅拌至呈棕黄色乳状液，等温度降至约60 ℃时，加入冰片，连续搅拌并冷却至室温，即得复方九节茶乳膏(不加冰片，连续搅拌至室温，即得九节茶乳膏)。

2.2抗炎镇痛实验

2.2.1二甲苯致小鼠耳肿胀取小鼠50只，随机分5组,每组10只，雌雄各半，分别为复方九节茶乳膏组；阳性组(复方醋酸地塞米松)；九节茶乳膏组；空白基质组；空白组(生理盐水10 mL·kg-1)。将药物涂于左右耳，每隔30 min涂药1次，共3次。于末次涂药60 min后，以蒸馏水洗去药物，用干棉球擦净。给小鼠右耳涂以二甲苯0.05 mL·只-1，与左耳作对照，1 h后通过颈椎脱臼法处死小鼠，立即用直径8 mm打孔器沿小鼠左右耳廓相同部位打孔取材，分别称质量，以左、右耳片质量(mg)之差为肿胀程度，计算各组肿胀度[2]。求出每组小鼠的平均值，并进行统计学处理。

2.2.2小鼠醋酸扭体反应取小鼠50只，随机分5组，每组10只，雌雄各半，分别为复方九节茶乳膏组；阳性组(扶他林)；九节茶乳膏组；空白基质组；空白组(生理盐水10 mL·kg-1)。将每组小鼠背部脱毛约2×2 cm2，第2天涂药，连续给药3 d，于末次给药1 h后，每鼠ip 6 mL·L-1冰醋酸溶液0.2 mL致痛，记录20 min内每只小鼠的扭体次数[3]。计算各给药组小鼠的平均扭体数，并进行统计学处理。

2.3皮肤刺激性实验

2.3.1单次给药皮肤刺激性实验取健康成年新西兰兔8只，在给药前24 h用80 g·L-1硫化钠将新西兰兔背部脊柱两侧毛脱掉，脱毛面积每侧约10 cm×10 cm。随机分2组，每组4只，分为完整皮肤组和破损皮肤组。破损皮肤组使用灭菌针头将新西兰兔背部脱毛部位的消毒皮肤划“#”字破口，破口横竖约3 cm，且以渗血为度，并使左右两侧皮肤破损程度一致。2组新西兰兔左侧背均涂抹复方九节茶乳膏1.0 g，右侧背均涂抹空白乳膏基质1.0 g，用3层纱布覆盖，再用医用橡皮膏固定6 h后，用温水洗净药物，观察涂抹部位1，24，48和72 h皮肤刺激反应，按表1、表2相关标准进行评分[4-8]。

表1皮肤刺激反应评分标准

Tab.1The standard of grading for skin irritation test

红斑分值水肿分值无红斑0无水肿0轻度红斑(勉强可见)1轻度水肿(勉强可见)1中度红斑(明显可见)2中度水肿(明显隆起)2重度红斑3重度水肿(皮肤隆起1mm,轮廓清楚)3紫红色红斑到轻度焦痂形成4重水肿(皮肤隆起1mm以上并有扩大)4最高总分值8

表2皮肤刺激强度评价标准

Tab.2 The standard of grading for skin irritation strength

平均分值评价0～0.49无刺激性0.5～2.99轻度刺激性3.0～5.99中度刺激性6.0～8.00强刺激性

2.3.2多次给药皮肤刺激实验实验动物、背部脱毛面积、实验分组均同单次给药皮肤刺激实验。2组新西兰兔左侧背均涂抹复方九节茶乳膏1.0 g·只-1·d-1，右侧背均涂抹空白乳膏基质1.0 g·只-1·d-1，连续涂抹1周，停药后观察1周。分别记录1，24，48和72 h给药部位出现红斑、水肿及其他异常情况。

2.4皮肤过敏性实验

2.4.1致敏接触取白色豚鼠30只，将豚鼠随机分为3组，即复方九节茶乳膏组、空白基质组和阳性对照组(2，4-二硝基氯代苯)，每组10只，雌雄各半。于给受试药物前24 h，用剪刀先将长毛发剪掉，再使用80 g·L-1硫化钠溶液将豚鼠背部两侧脱毛，每侧面积约为10 cm2。致敏接触:将受试药物分别涂于豚鼠背部左侧脱毛区，给药组涂复方九节茶乳膏0.2 g·只-1，空白基质组涂乳膏基质0.2 g·只-1，阳性对照组涂10 g·L-12，4-二硝基氯代苯0.2 mL·只-1，给药6 h后，用温水洗净药物。实验第7天和第14天，采用相同方法重复操作一次，连续观察每组动物受试区域的水肿及红斑情况，并做详细记录[9-11]。见表3。

表3皮肤致敏性评价标准

Tab.3 The standard of grading for skin sensitization test

致敏发生率/%皮肤致敏性评价0～10无致敏性11～30轻度致敏性31～60中度致敏性61～80高度致敏性81～100极高度致敏性

2.4.2激发接触于致敏接触末次给药后14 d，采用相同方法将受试药物分别涂于豚鼠背部右侧去毛区。其中阳性对照用1 g·L-12，4-二硝基氯代苯。给药6 h后，用适量温水洗净受试物，即刻观察，于24，48和72 h再次观察皮肤过敏反应情况，按表1和表3评价标准记录各时间过敏反应分值。

反应平均分值=(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数

致敏率(%)=发生过敏动物数/合计动物数×100%

3结果

3.1二甲苯致小鼠耳肿胀见表4。

表4复方九节茶乳膏对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

Tab.4 The effect of CompoundSarcandraglabraOintment in the xylene-induced mice′s auricular swelling test

±s，n=10)

注：与空白组比较φ:P<0.01；与空白基质组比较:**P<0.01，*P<0.05。

由表4可知，复方九节茶乳膏组与空白基质组及空白组比较有极显著性差异(P<0.01)；复方九节茶乳膏组与阳性组(复方醋酸地塞米松)比较无显著性差异(P>0.05)；九节茶乳膏组与空白基质组及空白组比较有显著性差异(P<0.05，P<0.01)，且复方九节茶乳膏组的效果优于九节茶乳膏组。复方九节茶乳膏能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀。

3.2小鼠醋酸扭体反应见表5。

表5复方九节茶乳膏对小鼠醋酸扭体的影响

Tab.5 The effect of CompoundSarcandraglabraOintment in the mice’s wrenching body test

±s，n=10)

注：与空白组比较φ:P<0.01；与空白基质组比较**:P<0.01。

由表5可知，复方九节茶乳膏组与空白基质组及空白组比较均有显著性差异(P<0.01)；九节茶乳膏组与空白基质组及空白组比较均有显著性差异(P<0.01)；复方九节茶乳膏组能显著减少醋酸所致小鼠扭体次数。

3.3皮肤刺激性实验见表6。

表6复方九节茶乳膏对家兔完整和破损皮肤刺激反应结果

Tab.6 The result of CompoundSarcandraglabraOintment on the integral and damaged rabbit skin irritation test

组别动物数/只观察时间和反应平均分值1h14h48h72h刺激强度完整皮肤给药侧40000无刺激性对照侧40000无刺激性破损皮肤给药侧40.25000无刺激性对照侧40000无刺激性

单次给药皮肤刺激性实验结果见表6。经观察及评分比较，单次给复方九节茶乳膏对家兔正常皮肤刺激反应分值为0，表明无刺激性。对损伤皮肤刺激的平均反应值在1 h为0.25，24 h以后为0，表明对损伤皮肤有轻度刺激性。多次给药皮肤刺激实验结果发现，复方九节茶乳膏对家兔正常皮肤和损伤皮肤刺激反应性分值均为0，表明多次给药对皮肤无刺激性。提示单次给药对损伤皮肤有轻度刺激性。本制剂对损伤皮肤应慎用。

3.4皮肤过敏性实验见表7。

表7复方九节茶乳膏对豚鼠皮肤的过敏反应结果

Tab.7 The result of CompoundSarcandraglabraOintment on guinea pig skin sensitization test

组别动物数/只观察时间和反应平均分值1h14h48h72h致敏率/%给药组100.20.1000阴性对照组1000000阳性对照组101.51.51.01.090

由表7可见，复方九节茶乳膏组，在去掉受试药物后即刻观察24 h，可见1只豚鼠皮肤出现轻度红斑，但未观察到动物有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身性变态反应。空白基质组在去掉受试物后未观察到动物皮肤有严重的全身性变态反应。根据实验组与对照组豚鼠皮肤反应的差别以及致敏率情况，可认为复方九节茶乳膏及其基质均为弱致敏物质。

4讨论

在进行二甲苯致小鼠耳肿胀抗炎实验时，考察了背部给药和双耳给药，结果双耳给药组的效果明显优于背部给药组，可能是由于受试药物直接作用于致炎部位，起效明显。在进行小鼠醋酸扭体反应实验时，发现冰醋酸的浓度低或高，扭体次数均过少或过多，同时发现实验动物的体质量、实验环境的温度和安静程度对扭体次数均有较大影响。初步药效实验结果表明，复方九节茶乳膏能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，减少冰醋酸所致小鼠扭体次数。九节茶乳膏对抗炎镇痛模型也有一定疗效，复方九节茶乳膏中加入冰片后抗炎镇痛效果优于九节茶乳膏，认为二者有协同作用(需进一步验证)。进一步安全性实验表明，复方九节茶乳膏对豚鼠无明显致敏作用，家兔完整皮肤和破损皮肤的刺激性实验也无明显刺激性。表明该药是一种具有一定抗炎镇痛作用及安全性较好的外用乳膏剂。

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Preliminary study of anti-inflammatory and analgesic effects and safety of CompoundSarcandraglabraOintment

LI Jie1，OU Yuhang2，CHEN Qiang2*(1.Department of Pharmacy，the 175th Hospital of PLA，the Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University，Zhangzhou 363000，China；2.Department of Pharmacy，Fujian Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the anti-inflammatory and analgesic effects and enepidermic safety of Compound Sarcandra glabra Ointment. MethodsThe auricular swelling test，the wrenching body test caused by the irritation of acetic acid in mice，guinea pig skin sensitization test and the rabbit skin irritation test were conducted. ResultsCompound Sarcandra glabra Ointment could reduce the swelling of mice in auricular swelling test and reduce the times of bodies wrenching caused by the irritation of acetic acid sharply．There was no irritation on the integral rabbit skin， but one rabbit damaged skin group appeared slight edema after a singal dose and recovered 24 h after the administration. Skin allergic reactions such as erythema and edema or systemic allergic reactions were not observed in the Guinea pig's skin test . ConclusionCompound Sarcandra glabra Ointment could suppress inflammation and alleviatie pains without irritative, allergic and toxic effects.

Key words:Compound Sarcandra glabra Ointment；anti-inflammatory; analgesic；safety

收稿日期：(2015-03-02)

通信作者：*陈强，男，研究员

作者简介：李杰，女，药师

基金项目：福建省科技厅重点项目(编号：2011I0003)

中图分类号：R265

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2016)01-0064-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.020