热毒宁与头孢哌酮钠/舒巴坦钠对泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抑菌作用

李新，陈化禹，杨桂芳，耿洁，贾志杰(天津中医药大学第一附属医院，天津300193)

热毒宁与头孢哌酮钠/舒巴坦钠对泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抑菌作用

李新，陈化禹，杨桂芳，耿洁，贾志杰
(天津中医药大学第一附属医院，天津300193)

摘要:目的探讨体外环境下中药热毒宁联合头孢哌酮钠/舒巴坦钠(SCF)对泛耐药鲍曼不动杆菌(XDR-AB)的抑菌作用。方法取33株XDR-AB培养传代，采用微量肉汤棋盘稀释法检测SCF和热毒宁的单独及联合最低抑菌浓度(MIC)、热毒宁联合SCF对XDR-AB的抑菌浓度指数(FICI)，以FICI≤0.5为协同作用。结果热毒宁与SCF联合用药时与单独用药时相比MIC下降，热毒宁与SCF联合用药时的FICI均≤0.5。结论体外环境下，热毒宁联合SCF对XDR-AB有很好的协同作用。

关键词:泛耐药鲍曼不动杆菌;热毒宁;中药;头孢哌酮钠;舒巴坦钠;抑菌试验;体外试验

鲍曼不动杆菌为条件致病菌，常引起呼吸道感染、泌尿系统感染、败血症、继发性脑膜等。近年来，随着广谱抗菌药物的广泛应用，鲍曼不动杆菌的耐药性不断增加，出现了泛耐药鲍曼不动杆菌(XDRAB)。XDR-AB对常用抗菌药物几乎全部耐药，仅对多黏菌素和替加环素敏感［1，2］，给临床治疗带来巨大挑战。本研究观察了热毒宁与头孢哌酮钠/舒巴坦钠(SCF)联合对XDR-AB的体外抑菌作用。现报告如下。

1　材料与方法

1.1材料33株XDR-AB分离自2014年1～10月份天津中医药大学第一附属医院住院患者，其中30份来源于痰液标本、3份来源于尿液标本。根据《全国临床检验操作规程》(第3版)选用法国梅里埃公司VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统及配套的分析卡进行菌种鉴定和药敏的筛选。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。SCF购自美国辉瑞公司，热毒宁注射液购自江苏康缘药业，药敏纸片为美国辉瑞公司提供的SCF纸片。

1.2检测方法

1.2.1 SCF对XDR-AB的最低抑菌浓度(MIC)将XDR-AB菌株培养传代，分离单个菌落，用比浊仪配制细菌悬液1×108CFU/mL，再用M-H肉汤以1∶100稀释(含菌量约106)备用。用M-H肉汤将SCF原液倍比稀稀成256、128、64、32、16、8、4、2 μg/mL的药液，分别取50 μL依次加入96孔板中，将备用菌液50 μL加入已加药的孔中，使最终接种菌量约5×105CFU/孔。另设无菌对照孔(孔内只加MH肉汤100 μL)和无药对照孔(孔内只加M-H肉汤和菌液各50 μL)，振荡1min混匀后，35℃恒温培养箱孵育20 h，肉眼观察结果，记录MIC。

1.2.2热毒宁对XDR-AB的MIC制备终浓度为原液的1、0.80、0.64、0.51、0.41、0.33、0.26、0.21、0.17倍的热毒宁，分别取50 μL按浓度由低到高依次加入96孔板中。分别取备用菌液50 μL加入已加药的孔中，另设无菌对照孔和无药对照孔。振荡1min混匀后，35℃恒温培养箱孵育20 h，肉眼观察结果，记录MIC。

1.2.3热毒宁联合SCF对XDR-AB的抑菌作用

采用微量肉汤棋盘稀释法测定。称量并配制2倍MIC浓度的药物，SCF制备方法同1.2.1，热毒宁制备方法同1.2.2。在96孔板上做好标记，SCF从上到下浓度依次递减，热毒宁从左到右浓度依次递减，另设无菌对照孔和无药对照孔。在96孔板中，每个对应孔加两种药液各50 μL和菌液100 μL后，振荡1min混匀，35℃孵育20 h，观察抑菌浓度指数(FICI)。FICI =(联合用药时SCF的MIC/单用时SCF的MIC)+(联合用药时热毒宁的MIC/单用时热毒宁的MIC)。FICI≤0.5为协同，0.5＜FICI≤1.0为相加，1.0＜FICI≤2.0为无关，＞2.0为拮抗。

2　结果

2.1热毒宁和SCF单独及联合用药的MIC见表1。

表1　热毒宁和SCF单独及联合用药的MIC

2.2热毒宁联合SCF对XDR-AB的抑菌作用热毒宁与SCF联合用药时的FICI为0.345～0.468，均≤0.5。

3　讨论

XDR-AB耐药现象十分严重，对氨基糖苷类、氟喹诺酮类以及β-内酰胺类等抗菌药物均有一定的耐药性，给临床治疗造成极大困难。研究显示，某些中药具有提高抗菌药物抑菌效果的作用［3］。中药可直接作用于致病菌，通过干扰细菌的代谢过程，影响其结构与功能，如干扰致病菌细胞壁合成、阻碍菌体内蛋白质合成、抑制核酸代谢及干扰其他代谢途径等［4～6］。另外，中药还能够激发调动机体内在的抗菌因素，通过调节免疫功能、增强机体免疫力而调动自身潜力抗感染，达到治疗疾病的目的［7，8］。目前关于细菌对中药产生耐药性的报道很少，表明中药联合抗菌药物治疗抗耐药菌具有广阔的应用前景［9，10］。热毒宁注射液为临床常用中药，具有清热解毒之功效，其主要成分为青蒿、金银花、栀子。现代药理研究表明，青蒿、金银花均有抑菌作用［11］。青嵩具有免疫抑制及细胞免疫促进作用;金银花可破坏细菌细胞壁的肽聚糖层的结构，改变包膜屏障的通透性，从而抑制细菌生长［12］;栀子具有抗感染、镇静降温的作用。临床常用于抗菌、抗病毒治疗，对细菌或病毒感染所致的上呼吸道疾病疗效显著［13，14］。

SCF是临床常用广谱抗菌药物，广泛用于革兰阴性菌引起的中、重度感染细菌，但2014年我院XDR-AB对SCF的耐药率已高达46.85%。本研究显示，不同XDR-AB对SCF的敏感性不同，分别为128、64、32 μg/mL;联合热毒宁后，SCF的MIC降至2、4、8 μg/mL。表明SCF联合热毒宁后，菌株对SCF的敏感性明显提高，SCF对XDR-AB的MIC明显下降;且对SCF耐药程度越高的菌株MIC下降越明显。进一步观察两药的协同作用，结果显示，二者联合用药时的FICI均≤0.5，说明两者有协同作用。XDR-AB是具有产β-內酰胺酶、膜通透性改变及多药外排系统等多种复杂耐药机制并存的细菌，热度宁联合SCF可能通过对某些细菌耐药基因的改变，从而减少抗菌药物用量或逆转某些抗菌药物的敏感性，减少药物不良反应，提高疗效。关于热毒宁如何逆转SCF敏感性将是我们下一步的研究目标。

综上所述，体外环境下热毒宁联合SCF对XDR-AB有很好的协同作用，临床治疗XDR-AB可联合使用SCF和热度宁注射液。

参考文献:

［1］张仲新.泛耐药鲍曼不动杆菌感染现状及耐药机制研究［J］.中国医疗前沿，2012，7(6): 69-72.

［2］曾春晖，杨柯，徐明光，等.广西藤茶总黄酮与β-内酰胺类抗菌药物合用的体外抗菌活性研究［J］.医药导报，2013，32(3): 292-297.

［3］杨再昌，杨小生，王伯初，等.从中药筛选金黄色葡萄球菌耐抗菌素抑制剂［J］.天然产物研究与开发，2005，17(6): 700-703.

［4］李建农，包旭，包定元.解热毒注射液抗菌作用研究［J］.中药药理与临床，2001，17(1): 30-32.

［5］熊英，傅颖媛，况南珍，等.黄芩苷抗白色念珠菌作用及机制研究［J］.中国药理学通报，2004，20(12): 1404-1407.

［6］刘波，李雪驼，徐和利，等.5种中药制剂杀灭幽门螺杆菌的实验研究［J］.中国新药杂志，2002，11(6): 457-459.

［7］孙健，吴国娟.抗菌中药的作用机理研究进展［J］.中国兽医杂志，2007，43(2): 42-43.

［8］陈雨姣.从现代免疫学角度探讨中医中药抗感染作用［J］.江西中医学院学报，2002，14(4): 5-6.

［9］陈美玲，王剑，周红霞，等.中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用［J］.中医药学报，2012，40(2): 10-13.

［10］许麾，孙建成，许德华.热毒宁注射液的临床应用［J］.海军总医院学报，2011，24(4): 223-225.

［11］管仲莹，赵金明，林巧智.金银花提取物抑菌作用的实验研究［J］.中医中药，2009，47(15): 150-153.

［12］冯秀丽，许庆华，赵晓云，等.金银花及其复方的体外抑菌活性与体内抗炎作用［J］.沈阳药科大学学报，2013，30(1): 35-39.

［13］王科峰，杨海卿.中药抗菌作用研究思路探讨［J］.临床合理用药，2012，5(3B): 83-84.

［14］吴晓丰，洪艳.热毒宁对肺炎支原体肺炎患儿血清EC和hs-CRP的影响［J］.中华全科医学，2013，11(10): 1580-1581.

·综述·

收稿日期:( 2015-01-26)

基金项目:天津市中医药管理局中医中西医结合科研课题(13065)。

文章编号:1002-266X(2015)34-0092-02

文献标志码:B

中图分类号:R978.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.041