广西某市猪病毒病的检测与调查

骆永泉 黄伟坚 谭意军 覃焕鹏 陈记文 邓晓霞 李军

（1，广西壮族自治区贺州市动物疫病预防控制中心 542800；2，广西大学动物科学技术学院 530005；3，广西壮族自治区贺州市八步区动物疫病预防控制中心 542800；4，广西兽医研究所 530001）

广西某市猪病毒病的检测与调查

骆永泉1,2黄伟坚2*谭意军1覃焕鹏1陈记文1邓晓霞3李军4

（1，广西壮族自治区贺州市动物疫病预防控制中心 542800；2，广西大学动物科学技术学院 530005；3，广西壮族自治区贺州市八步区动物疫病预防控制中心 542800；4，广西兽医研究所 530001）

对广西某市以发热、咳嗽、呼吸困难、皮肤及耳朵发绀和高发病率及高病死率等为主要临床特征的39个发病猪场所采集的53份病料进行了主要病毒病的检测。检测结果显示，猪繁殖与呼吸综合征病毒 （PRRSV）阳性30份，阳性率56.60% （30/53）；猪2型圆环病毒 （PCV2）阳性25份，阳性率47.17% （25/53）；猪流感病毒 （SIV）阳性21份，阳性率39.62% （21/53）；猪瘟病毒 （CSFV）未检出阳性；其中可检出两种以上病原的有29份病料，占54.72%（26/53）。检测结果与调查分析表明，猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、 猪2型圆环病毒 （PCV-2） 和猪流感 （SI） 是导致该市猪场疾病发生流行的主要病种，而且PRRS、PCV2和SIV常呈多重感染，这为该市发病猪场针对性地做好疫病的防控提供了科学依据。

猪繁殖与呼吸综合征；猪圆环病毒2型；猪流感；猪瘟；流行病学；调查分析

广西某市为养殖大市，生猪养殖业是其主导产业。近年来，该市部分猪场出现以仔猪发生一种以发热、咳嗽、呼吸困难、皮肤及耳朵发绀为主要临床特征的猪传染病，发病率为20～80%，病死率达20～50%，给养猪业造成严重经济损失。为了查明病因，查清该病在该市的流行现状，尽快制定针对性强的防控技术措施，笔者对采自39个发病猪场的53份病料进行主要病原检测以及初步调查分析，先将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料

收集该市部分乡镇的39个发病猪场53份病料，包括病猪的脾、肺、淋巴结等，按常规方法采集送交实验室检测。

1.1.2 试剂

病毒DNA/RNA提取试剂盒、Trizol、Rnasin、M-MLV反转录酶、Taq PCR Mix等试剂均采购自大连宝生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 流行病学调查

了解各发病猪场对猪主要传染病的免疫情况、猪的购入来源情况、猪的发病日龄、发病率、死亡率、病程、用药治疗情况、主要临床症状、剖检病变等相关流行病学资料。

1.2.2 病毒核酸的提取

取病死猪的脾、肺、淋巴结2g左右，在灭菌研钵里剪碎并磨至糊状，加入8ml的Hank’s液 （pH7.0～7.2（，研磨，分装。 于-20℃冰箱和室温反复冻融3～5次，10000rpm10min，取上清液待用。应用病毒DNA/RNA提取试剂盒对上清液提取病毒的RNA或DNA，方法按说明书进行。

1.2.3 病毒的PCR检测

按文献 [1-3]的方法对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV（、猪瘟病毒 （CSFV（、猪流感病毒 （SIV（和猪圆环病毒2型 （PCV-2（进行检测。取16ul RNA与1ul反向引物（25pmol/ul（混匀，于PCR仪中70℃5min，90℃5min， 水浴中 5min。 加入如下试剂： 5×Buffer5ul； 10 mMol/LdNTP2ul、Rnasin（RNA酶抑制剂（1.0ul，M-MLV （反转录酶（0.5ul，总量 25ul。置 PCR仪，42℃1h，95℃5min，产物 cDNA于20℃保存。

PCR反应在25ul体系中进行，反应程序：95℃，预变性， 5min； 95℃30s、 57℃30s、 72℃45s共 45 循环； 72℃10min，延伸。扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳观察结果。

2 结果

2.1 猪病发生的主要流行特点

猪场发生疫情后，几天可波及整个猪群，并可向周边猪场传播。呈爆发流行，大中小猪场或散养猪户均有发病，发病率为20～80%，病死率达20～50%。以中小年龄猪较多发生，育肥猪发病较轻，母猪发病多样化。疫情发生复杂，呈混合感染多，发病后细菌性感染常见。使用药物治疗的效果不理想，收效甚微。

病猪临床表现为发热、咳嗽、呼吸困难，皮肤及耳朵发绀，部分病猪眼睛有结膜炎等。部分病猪便秘或腹泻、尿黄。母猪感染发病后有流产、死胎、木乃伊发生，个别死亡。病程长的病猪皮肤苍白、被毛松乱、个别后退转圈、后肢瘫痪站立不稳，有神经症状。

剖检见肺部有出血斑点、部分出现斑驳褐色状的间质性肺炎病变，肺门淋巴结出血；淋巴结有的肿大、水肿、出血；心脏质地变软，有的心冠出血；个别脾脏边缘有锯齿状梗死；肾脏有的肿大，土黄色、质脆、部份有的针尖状出血点；部份病猪软脑膜充血、出血、水肿。

2.2 病毒的检测

对所采集的53份病料，用RT-PCR或PCR方法进行检测，有36份病料检测到病毒感染，以PRRSV的检出率最高，为56.60% （30/53（，其次是PCV-2，检出率为47.17%（25/53（、SIV，检出率为39.62% （21/53（，未检测到CSFV。

在采集的53份病料中，有29份病料检出2种以上病毒感染，占检测样品的54.72% （29/53（，其中，以PRRSV与其它病毒的混合感染居多，PRRSV和PCV-2混合感染的比率为22.64% （12/53（，PRRSV和SIV混合感染的比率9.43%（5/53（，PCV-2和 SIV混合感染的比率为 7.55% （4/53（；PRRSV、PCV-2和SIV三重感染的比率为15.09% （8/53（；单一感染的数量较少，PRRSV、SIV和PCV-2单一感染的数量分别为2、4和1例。

3 讨论

本调查应用PCR技术从送检病料中检测PRRSV、PCV-2和SIV的存在，具有准确、特异、快速简便的优点，在当前猪病疫情复杂、临床症状及病理变化不够典型、只凭眼观判断易造成误诊的情况下，更适用于对临床样品的快速诊断。

我们进行本试验调查的目的是了解引起当前当地猪病的主要病原感染情况。由于进行过猪伪狂犬病 （PR（的免疫后，PR的发生已明显降低，所以本次试验未进行PR的检测。从检测结果看，分别从53份病料中检出了PRRSV阳性30份，阳性率56.60% （30/53（；PCV-2阳性25份，阳性率47.17% （25/53（； SIV阳性21份， 阳性率 39.62% （21/53（。其中有29份病料检出两种以上病原存在，占54.72% （29/53（。表明发病猪中，PRRSV、PCV2、SIV感染比例比较大，且存在多重病毒混合感染现象，应该引起养猪户和有关部门的重视，做好防疫工作。

PRRSV、PCV2、SIV等均可导致猪体的免疫抑制，降低机体抵抗力，造成细菌的继发感染，加重疫情，造成严重经济损失。因此为了提高猪只对疫苗的免疫效果，建议这些猪场注射疫苗时配合使用免疫增强剂。这次从发病猪的病料中没有检测到CSFV，由此可以看出这些猪场的猪瘟防治措施做得比较好，这和猪场长期以来重视猪瘟免疫工作分不开。

在本次检测过程中我们还发现，SIV的检出率较高，而SIV具有重要的公共卫生意义，应引起重视。同时发现SI主要集中在秋冬季节；5～10月后病料中没有检出到流感SIV，这说明在秋冬季节要特别重视流感SIV的预防。

[1]蒋小红,黄伟坚,连慧香,等.应用RT-PCR技术快速诊断广西猪繁殖与呼吸综合征病毒研究[J].广西畜牧兽医,2003(2):53-55.

[2]罗廷荣,孙敬锋,莫扬,等.RT-PCR检测健康猪扁桃体和流产死胎猪瘟病毒的应用及RFLP分析 [J].中国预防兽医学报,2004(3):192-195.

[3]李军,曾芸,贾永起.猪圆环病毒2型和胸膜肺炎放线杆菌的混合感染[J].中国动物保健,2006(9):31-33.

作者简价：骆永泉 （1965-），男，广西人，高级兽医师，主要从事猪病防治工作。*

黄伟坚，教授，博士。