白血病患者血清VEGF和sFas水平及其相关性分析

杜小红，陈列光，李空飞，张碧波

白血病患者血清VEGF和sFas水平及其相关性分析

杜小红，陈列光，李空飞，张碧波

目的分析白血病患者血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）和sFas水平及二者的相关性。方法运用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对34例白血病患者行血清VEGF和sFas水平同步检测，并分析其水平的相关性。结果难治/复发组与初发组VEGF和sFas水平较缓解组及正常对照组高（＜0.05），难治/复发组较初发组高（＜0.05），缓解组VEGF和sFas水平与对照组差异无统计学意义（＞0.05）。VEGF与sFas呈正相关。结论联合检测血清VEGF与sFas水平可用于血病的病理状态及转归的评价。

白血病；血管内皮细胞生长因子；sFas

血管内皮细胞生长因子（VEGF）与血液系统恶性肿瘤存有紧密关联性，其除了以旁分泌方式促进血管内皮细胞血管新生的作用之外，还可促进其增强化疗药物相应抵抗作用，最终产生细胞耐药。Fas/FasL为一对膜蛋白分子，在肿瘤细胞凋亡进程中起到一定作用[1]。可溶性Fas（sFas）是一种跨膜区缺乏，且具有可溶性的Fas分子，能以竞争性方式，与Fas形成FasL，进而阻断由Fas介导所造成的细胞凋亡。白血病细胞多药耐药（MDR）是造成白血病化疗失败关键性因素，而MDR的发生，则与凋亡调控障碍紧密相关[2]。在白血病的发生与发展中，sFas、VEGF与之密切相关[2-3]，但在二者联合检测方面研究却较少。本研究采用双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）法测定白血病患者的VEGF和sFas水平，并分析了二者相关性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2015年3月至2016年3月在宁波大学附属鄞州医院诊治的白血病患者34例，排除严重活动性感染、糖尿病、肝肾功能异常及糖尿病者。其中男18例，女16例；年龄16～81岁，平均（36.4±2.6）岁。初发12例，难治/复发9例，完全缓解/部分缓解13例。另选取同期健康体检者30例，设为对照组，其中男14例，女16例；年龄20～69岁，平均（25.4±1.6）岁。

1.2 标本采集于清晨空腹状态下抽取静脉血5 ml，不抗凝，并于2 h内用离心机2 000 r/min离心15 min，取血清标本，并将标本完成分装，于―18℃冻存，不可反复冻融。

1.3 sFas和VEGF测定运用ELISA法分别对sFas及血清VEGF水平进行测定，选用武汉尚柏生物技术有限公司试剂盒，依据说明书步骤，完成各项操作。选用美国Therrno公司的MuLtiskanMK3，BIO-TEK公司的ELX800酶标仪。平衡血小板数差异所致系统误差，每份样本血小板计数（PLT）优化其VEGF测定值，最终将标化值VEGF/PLT（pg/106），作为本次的研究指标。1.4统计方法采用SPSS 19.0统计软件进行处理，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用方差分析，多重比较采用LSD-检验；两组比较采用检验；相关性分析采用Pearson相关分析。＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 sFas、血清VEGF在白血病的表达

难治/复发组、初发组VEGF和sFas水平均高于对照组（均＜0.05）；难治/复发组VEGF和sFas水平高于初发组（均＜0.05）；缓解组与对照组差异无统计学意义（＞0.05）。见表1。

2.2 sFas、血清VEGF与乳酸脱氢酶（LDH）的关系LDH中位值设为188U/L，将患者分为A组（LDH≤188 U/L）和B组（LDH＞188 U/L），A组sFas、VEGF/ PLT低于B组（均＜0.01）。见表2。

2.3 sFas与血清VEGF的相关性VEGF与sFas呈正相关（=0.662，＜0.01）。

3 讨论

尽管化疗方案和新化疗药物的日益增多，但诸多患者依然存有不同程度的细胞耐药状况，究其原因多为白血病细胞对化疗药物诱导抵抗的细胞凋亡。

VEGF作为正性血管生成调节因子，具较强的调节功能，其除了与白血病相应发生、发展有关外，还与肿瘤细胞耐药有关。在凝血过程中，血小板可释放VEGF，将其融入至血清中，所以对于血小板数目而言，其对血清VEGF水平具有明显影响。本研究把VEGF/PLT作标化值显示，难治/复发组血清VEGF水平高于正常对照组和缓解组（＜0.05），而缓解组与对照组差异无统计学意义（＞0.05）。提示VEGF可能与肿瘤细胞耐药有关。有研究报道，将化疗药物及VEGF加入至CMK86细胞系中孵育，结果在整个未做处理的VEGF对照组中，经VEGF处理的CMK86细胞凋亡分数，所占比重为75%～80%，表明VEGF可抑制化疗药物诱导机制下的CMK86细胞凋亡[4]。有研究报道，在人早幼粒白血病细胞（HL-60）中转染入VEGF165 cDNA后，HL-60细胞在集落及增殖所形成的活力显著增加[5-6]。通过抑制VEGF，可提升白血病细胞针对所使用化疗药物的敏感性。

表14 组sFas及血清VEGF水平比较

Fas是一种跨膜糖蛋白，为肿瘤坏死因子的一部分。若Fas与抗Fas相结合，可将死亡信号传递给靶细胞内，激活Caspase酶原，造成敏感Fas阳性细胞，出现一定程度的凋亡状况。如若Fas存有基因转录异常，可造成跨膜区出现缺乏Fas蛋白状况，脱落于细胞膜中，形成sFas，其通过竞争性方式结合于膜Fas，最终便构成了FasL，对Fas介导相应细胞凋亡具有阻断作用[7]。本研究显示，难治/复发组与初发组sFas水平均高于对照组（均＜0.05），难治/复发组高于初发组（＜0.05），缓解组与对照组差异无统计学意义（＞0.05）。至此，可将sFas作为凋亡抑制因子，作用于白血病细胞MDR中，当出现持续升高的sFas，提示对化疗不敏感，或细胞凋亡机制处于不利启动状态，造成细胞耐药[8-9]。sFas、VEGF与白血病MDR间均存在不同程度的相关性。本研究显示，白血病患者sFas的表达与VEGF呈正相关（＜0.05），表明二者抗凋亡机制存在一定关系，但仍然具有不清晰的相关机制，需要对其开展深入的研究工作。

表2 两组sFas、血清VEGF间比较

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.12.009

R733.7

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1671-0800(2016)12-1565-02

2016-05-20

（本文编辑：孙海儿）

315040宁波，宁波大学附属鄞州医院

杜小红，Email: 1724321190@qq.com