牛结核病实验室诊断方法研究

胡元春，王　岩，邴　睿

（1.河南省新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453000；2.中国动物卫生与流行病学中心，山东 青岛 266000；3.甘肃省陇南市畜牧兽医局，甘肃 陇南 746000）

牛结核病实验室诊断方法研究

胡元春1，王岩2，邴睿3

（1.河南省新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453000；2.中国动物卫生与流行病学中心，山东 青岛 266000；3.甘肃省陇南市畜牧兽医局，甘肃 陇南 746000）

牛结核病是一种重要的人兽共患病，可感染多种动物。OIE将其定义为必须通报的动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。近年来，随着我国养牛业的迅速扩张，此病已严重阻碍了养牛业的健康发展，并严重威胁了公共卫生安全。防控牛结核病是当务之急，本文从细菌学、分子生物学和免疫学三方面对该病实验室诊断方法进行了阐述。

牛结核病；诊断

牛结核病由牛分枝杆菌引起，呈世界性分布，一年四季均可发生。此病潜伏期较长，偶见急性感染，通常无临床症状，晚期临床症状显著，包括渐进性消瘦、食欲不振、虚弱、波动热等。常见气溶胶感染，也有牛因摄入受污染的饲料感染此病。《国家动物疫病防治中长期规划（2012-2020）》将奶牛结核病列为优先防治的国内动物疫病（16种）之一，并制定了奶牛结核病的综合防治措施。我国控制牛结核病的基本策略是“检疫—扑杀”。因此病早期几乎无临床症状，所以实验室诊断在牛结核病防控中占有重要位置。目前，国际上通用的牛结核病诊断方法有三种：细菌学方法、免疫学方法及分子生物学方法。

1　细菌学方法

目前，细菌学方法主要有涂片检查和细菌培养。

涂片镜检应用广泛，主要采用萋尼氏（Niehl-Neelson）染色法。染色呈阳性的细菌，可初步判定为分枝杆菌。但此法敏感性和特异性较差，只能检测大于10000CFU/mL的细菌，且不能鉴定其种属。分离培养常用的培养基有小川培养基、丙酮酸钠培养基、罗氏培养基等。此菌生长期为2～8周，之后还需2～4周的生化试验以鉴定菌种，若进行药敏试验还需2～4周。传统的菌种鉴定方法繁琐、时间和经济成本较高，但检出率低，且易受客观因素影响造成鉴定结果不准确，并非特别理想的牛分枝杆菌检测方法。

2　分子生物学方法

PCR方法特异性和敏感性均高于传统方法，且在排除假阳性和假阴性方面效果显著。常见方法有间隔区寡核苷酸基因分型（Spoligotyping）、可变数量的串联重复序列分析（VNTR）和限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）。

RFLP方法耗时耗力、不易成功，且需进行大量细菌培养，对DNA纯度要求很高，实验结果不能数字化。VNTR方法与之比较，操作更简单迅速，需菌量少、分析结果可数字化，实用性更强。

3　免疫学方法

免疫学方法包括皮内变态反应、比较皮内变态反应、γ-干扰素试验及胶体金方法等。目前我国通用的方法为皮内变态反应。

许多国家利用皮内变态方法根除了牛结核病。但此法操作繁琐，结果不稳定，可重复性差，敏感性和特异性差，易出现假阳性结果。γ-干扰素实验被澳大利亚、爱尔兰和新西兰等国家正式认可为可行性试验。与皮内变态反应相比，该法操作快速简单，敏感性更高，且可排除部分禽分枝杆菌或其他NTM引起的假阳性。但由于该试剂盒价格高，我国只有部分地区采用此法。

4　小　结

牛结核病早期并无明显临床症状，所以实验室检测方法尤其重要。建议临床上采用皮内变态反应和γ-干扰素实验相结合的方法进行初筛，并对阳性牛进行细菌学检测和PCR技术检测。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.037