蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2与接头蛋白Gab2在子宫内膜癌中的表达及意义

李美艳，卢静，韩新彦，王菊荣

(邯郸市中心医院妇一科1、生殖医学科2，河北邯郸056008)

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2与接头蛋白Gab2在子宫内膜癌中的表达及意义

李美艳1，卢静2，韩新彦1，王菊荣1

(邯郸市中心医院妇一科1、生殖医学科2，河北邯郸056008)

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2与接头蛋白Gab2在子宫内膜癌中的表达、两者的相关性及其与预后的关系。方法采用免疫组化SP法，检测50例子宫内膜癌（癌组）、50例子宫内膜不典型增生（癌前病变组）及30例正常增殖期子宫内膜(正常组)中Shp2蛋白和Gab2蛋白的表达水平，分析其表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系，及二者的相关性。结果正常组、癌前病变组和癌组的子宫内膜组织中，Shp2蛋白的阳性表达率分别为0、12.00%、64.00%，Gab2蛋白的阳性表达率分别为3.33%、38.00%、58.00%，且组间比较均有统计学意义(P＜0.05)；Shp2蛋白及Gab2蛋白的阳性表达率在肌层浸润深度及有无淋巴结转移组中比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)；多因素生存分析显示：Shp2蛋白阳性表达者的总生存率明显下降，Gab2蛋白阳性表达者总生存率也明显下降；子宫内膜癌中Shp2蛋白的表达与Gab2蛋白的表达呈正相关(r=0.368，P＜0.05)。结论Shp2蛋白及Gab2蛋白的表达可能参与了子宫内膜癌的发生、发展、浸润等过程，有可能作为判断子宫内膜癌预后的新指标。

子宫内膜癌；Shp2蛋白；Gab2蛋白；免疫组织化学

细胞的生物学活动中，蛋白质磷酸化与去磷酸化在信号转导机制中发挥着重要作用，肿瘤的发生、发展与磷酸化水平异常相关。Shp2(Protein tyrosine phosphatase 2)蛋白是第1个被确定的具有磷酸酶活性的促肿瘤蛋白，研究发现，Shp2蛋白在肺癌、结肠癌和乳腺癌等多种实体瘤的发生、发展中起着重要作用[1-2]。Gab2蛋白可介导多种细胞外刺激引起的信号传递，在细胞增殖、分化、凋亡及迁移等生理过程中发挥重要作用，而Shp2蛋白和Gab2蛋白在子宫内膜癌中的表达情况，国内外鲜见报道。本文采用免疫组化技术探讨子宫内膜癌中Shp2蛋白和Gab2蛋白的表达及与子宫内膜癌临床病理特征的关系，旨在为子宫内膜癌临床治疗指导及预后评估提供有价值的预测指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2004年6月至2014年6月在邯郸市中心医院住院治疗的患者130例，年龄30～75岁，平均49.56岁，中位年龄49.00岁，95%CI(44.50，54.20)岁。其中Ⅰ型子宫内膜癌50例(癌组)，不典型增生的子宫内膜50例(癌前病变组)，正常增殖期子宫内膜30例(正常组)，正常增殖期子宫内膜及不典型增生的子宫内膜均来自于诊刮及手术切除子宫的内膜标本。子宫内膜癌手术病理分期按2009年FIGO标准进行分类，Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例；高分化(G1)22例，中分化(G2)18例，低分化(G3)10例；肌层浸润深度＜1/2肌层31例，≥1/2肌层19例；伴有淋巴转移的10例，无淋巴转移的40例。所有患者术前均未接受放疗、化疗或激素治疗，无手术禁忌，进行书信、电话、腾讯QQ和微信随访，随访时间截止到2014年6月，临床资料完整。由两位病理医生复习病理切片，并选取包含肿瘤组织的石蜡标本备用。

1.2 实验方法采用免疫组织化学SP法，染色步骤按试剂盒说明书严格操作。

1.3 试剂Shp2蛋白为兔抗人多克隆抗体与Gab2蛋白为兔抗人单克隆抗体(英国Abcam公司)，SP广谱超敏试剂盒、PBS缓冲液、DAB酶底物显色剂均购自福州迈新生物技术公司。

1.4 结果判定标准双盲状态下对免疫组化染色结果进行评价，每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，阳性判断参照文献[3]。

1.5 统计学方法应用IBM SPSS19.0统计软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验和Fisher精确概率法；两者相关性用非参数Spearman等级相关分析，应用Cox比例风险模型进行多因素生存分析，并绘制生存曲线，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Shp2蛋白、Gab2蛋白在子宫内膜组织中的表达Shp2蛋白和Gab2蛋白均定于细胞质，阳性以细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒(见图1、图2)，阴性对照为无着色(见图3)。由Shp2蛋白和Gab2蛋白的组织表达(见表1)可见，在子宫内膜癌中Shp2蛋白、Gab2蛋白的阳性表达率均显著高于正常组和癌前病变组，且组间比较均有统计学意义(Shp2：χ2=47.482，P=0.00＜0.05；Gab2：χ2=14.268，P=0.00＜0.05)。

表1 Shp2蛋白和Gab2蛋白在不同内膜组织中的表达(例)

图1 Shp2蛋白在子宫内膜癌中的表达(×200)；图2Gab2蛋白在子宫内膜癌中的表达(×400)；图3Shp2蛋白、Gab2蛋白在子宫内膜癌中阴性表达(×200)

2.2 Shp2蛋白、Gab2蛋白与子宫内膜癌临床参数的关系Shp2蛋白的表达与手术病理分期、肌层浸润深度、淋巴结转移情况有关(χ2值分别为8.315、6.376、 6.272，P＜0.05)，Gab2蛋白的表达与肌层浸润深度、淋巴结转移有关(χ2值分别为8.642、5.255，P＜0.05)，二者均与年龄无关(χ2值分别为0.643、0.384，P＞0.05)，见表2。

表2 Shp2蛋白和Gab2蛋白与子宫内膜癌临床参数的关系

2.3 Shp2蛋白和Gab2蛋白在子宫内膜癌中表达的关系Shp2蛋白和Gab2蛋白的表达呈正相关(r= 0.368，P=0.009＜0.05)，见表3。

2.4 Shp2蛋白及Gab2蛋白与子宫内膜癌预后的关系

表3 Shp2蛋白和Gab2蛋白表达的关系(例)

2.4.1 Shp2蛋白表达与子宫内膜癌预后的关系采用逐步回归法对Shp2蛋白表达进行多因素Cox模型分析，配合模型时，进入模型和从模型中剔除变量的水准分别定为0.05和0.06，回归分析后建立回归方程，筛选出变量为X5(有无淋巴结转移)：偏回归系数B为1.793；偏回归系数的标准误SE为0.812；Wald值为4.874；P值为0.027；相对危险度估计Exp（B）为6.006；95%置信区间下限为1.223、上限为29.499；生存曲线见图4。

2.4.2 Gab2蛋白表达与子宫内膜癌预后的关系采用逐步回归法对Gab2蛋白表达进行多因素Cox模型分析，配合模型时，进入模型和从模型中剔除变量的水准分别定为0.05和0.06，回归分析后建立回归方程中的变量如表4；生存曲线见图5。

表4 Gab2蛋白Cox模型分析

图4 Shp2蛋白阳性和阴性患者生存率

图5 Gab2蛋白阳性和阴性患者生存率

3 讨论

Shp2蛋白由PTPN11基因编码，属于非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶家族的成员之一，是目前磷酸化酶中唯一已被证实的原癌基因，它通过调节多条信号转导通路(如Ras/ERK通路，PI3K/Akt/mTOR等)，参与细胞的存活、迁移、粘附、细胞骨架形成等从而促进肿瘤的发生。研究发现，在乳腺癌、口腔鳞状细胞癌、宫颈癌等恶性肿瘤中均表现为高表达[4]。本实验结果显示：Shp2蛋白在正常子宫内膜，不典型增生子宫内膜，子宫内膜癌组中阳性表达率分别为：0、12.00%、64.00%，表现为逐渐增高趋势，且组间比较差异有统计学意义。通过分析Shp2蛋白的表达与临床参数的关系发现，Shp2蛋白和子宫内膜癌的FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移均密切相关，多因素Cox模型生存分析显示，Shp2蛋白的阳性表达与淋巴结转移密切相关。从生存曲线中看出，Shp2蛋白阳性者总生存率降低，可见与预后相关的因素主要为淋巴结转移情况，提示Shp2蛋白可能参与了子宫内膜癌的转移、浸润等过程，也进一步证实了PTPN11/Shp2可能为一癌基因有关，这和王化淳等[5]在口腔鳞状细胞癌中的研究报道一致。这为临床检测Shp2蛋白表达水平预测子宫内膜癌患者的转移情况进而判断患者的预后情况提供理论依据。

Gab2蛋白属于Gabs家族蛋白，基因定位于11q14.1，蛋白分子量97～100 kD，Gab2蛋白结构中缺少催化区域，不能直接引起磷酸化反应，但pH结构域结合的位点使其能招募多种接头蛋白及酶类分子，完成信号传递，在细胞增殖、分化、凋亡及迁移等生理过程中发挥重要作用。Gab2蛋白通过与ErbB2/Neu等原癌基因共同协作参与原位肿瘤到侵袭性肿瘤的转化过程，促进了肿瘤的转移[6]。研究表明，Gab2是一种锚定蛋白，能够介导Shp2蛋白在细胞中的定位，调控Shp2蛋白酪氨酸磷酸酶活性的发挥[7]。Brummer等[8]在乳腺癌相关研究中证实，Shp2蛋白通过与Gab2蛋白结合，参与PI3K/Akt途径使人类表皮生长因子受体-2(HER-2)过表达，促进癌细胞凋亡抑制、上皮间质转化等恶性生物学行为进展。研究发现Gab2蛋白在人类白血病和卵巢癌中高表达[9-10]。本研究结果显示，Gab2蛋白的阳性表达率亦是逐渐递增的趋势(3.33%、38.00%、58.00%)，表达情况与肌层浸润深度、淋巴结转移有关，从生存曲线中可见Gab2蛋白阳性的患者生存率也逐渐下降，且对二者相关性分析显示存在正相关(r=0.368，P=0.009＜0.05)，本实验与Brummer等[8]研究结果一致，可以推测Gab2蛋白与Shp2蛋白共同参与了子宫内膜癌的发展、浸润、转移的过程，有助于临床医师通过Shp2蛋白和Gab2蛋白的表达来判断患者的预后情况。

总之，Shp2蛋白阳性和Gab2蛋白阳性者，患者的生存率降低，因此Shp2蛋白和Gab2蛋白可能为子宫内膜癌的临床诊断、预后判断、监测和基因治疗提供新的靶点。

[1]Yu SJ,Yu JK,Ge WT,et al.SPARCL1,Shp2,MSH2,E-cadherin, p53,ADCY-2 and MAPK are prognosis-related in colorectal cancer [J].World J Gastroenterol,2011,17(15):2028-2036.

[2]Zhou X,Coad J,Ducatman B,et al.SHP2 is up-regulated in breast cancer cells and in infiltration ductal carcinoma of the breast,implying its involvement in breast oncogenesis[J].Histopathology,2008, 53(4):389-402.

[3]Bocanegra M,Bergamaschi A,Kim YH,et al.Focal amplification and oncologene dependency of Gab2 in breast cancer[J].Oncogene, 2010,29(5):774-779.

[4]Muenst S,Obermann EC,Cao F,et al.Src homology phosphotyrosyl phosphatase-2 expression is an independent negative prognostic factor in human breast cancer[J].Histopathology,2013,63(1):74-82.

[5]王化淳,黄圣运,谢红军.蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义[J].山东大学学报,2014,52(2):82-89.

[6]Fleuren ED,O'Toolle S,Millar EK,et al.Overexpression of the oncogenic signal transducer Gab2 occurs early in breast cancer development[J].Int J Cancer,2010,127(6):1486-1492.

[7]王磊,秦锡虎,王旭芬,等.Shp2蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义[J].吉林医学,2011,32(36):7692-7694.

[8]Brummer T,Schramek D,Hayes VM,et al.Increased proliferation and altered growth factor dependence of human mammary epithelial cells overexpressing the Gab2 docking protein[J].J Biol Chem, 2006,281(1):626-637.

[9]Lassmann S,Werner M,Waller CF,et al.Gab2 signaling in chronic mueloid leukemia cells confers resistance to multiple Brc-Abl inhibitors[J].Leukemia,2013,27(1):118-129.

[10]Wang Y,Sheng Q,Spillman MA.Gab2 regulates the migratory behaviors and E-cadherin expression via activation of the PI3K pathway in ovarian cancer cells[J].Oncogene,2012,31(20):2512-2520.

Expression and significance of protein tyrosine phosphatase Shp2 and adapter protein Gab2 in endometrialcarcinoma.

LI Mei-yan1,LU Jing2,HAN Xin-yan1,WANG Ju-rong1.The First Department of Gynaecology1,Department of Reproductive Medicine2,Handan Central Hospital,Handan 056008,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of protein tyrosine phosphatase 2(Shp2)and the adapter protein Gab2 in endometrial carcinoma,and to analyze the correlation between the two proteins as well as that between their expression and prognosis.MethodsThe expression levels of Shp2 protein and Gab2 protein were detected by immunohistochemical SP method in 50 patients of endometrial carcinoma(cancer group),50 patients of endometrial atypical hyperplasia(precancerous lesion group)and 30 subjects of normal proliferative phase endometrium(normal group). The correlation between the expression and the clinicopathological parameters of endometrial carcinoma were analyzed, as well as the correlation between the two proteins.ResultsThe positive expression rate of Shp2 protein was 0.00%, 12.00%,64.00%in normal group,precancerous lesion group,cancer group,respectively,and the positive expression of Gab2 protein was 3.33%,38.00%,58.00%,respectively,with statistically significant difference between the three groups (P＜0.05).The positive expression rate of Shp2 protein and Gab2 protein showed no statistically significant difference between groups of different muscle layer infiltration depth and the groups with or without lymph node metastasis(P＜0.05). Multivariate survival analysis showed that the total survival rate of patients with positive expression of Shp2 protein was decreased significantly,and the total survival rate of patients with positive expression of Gab2 protein was also significantly decreased.The expression of Shp2 protein was positively correlated with the expression of Gab2 protein in endometrial carcinoma(r=0.368,P＜0.05).ConclusionThe expression of Shp2 protein and Gab2 protein may be involved in the occurrence,development and infiltration process of endometrial carcinoma,what can be used as new prognostic indicators for evaluating the prognosis of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma;Shp2 protein;Gab2 protein;Immunohistochemistry

R737.33

A

1003—6350（2016）01—0010—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.01.004

2015-03-13)

李美艳。E-mail：lmy-200602744@163.com