子宫内膜异位症中OPN、VEGF的表达及意义

陈曼诗 王冰 陈灿 陈衡 陈春莹

子宫内膜异位症中OPN、VEGF的表达及意义

陈曼诗 王冰 陈灿 陈衡 陈春莹

目的研究子宫内膜异位症患者血清中骨桥蛋白(OPN)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,及在子宫内膜异位症中的作用。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测30例子宫内膜异位症患者(研究组)、30例因子宫平滑肌瘤、卵巢良性肿瘤手术患者(对照组)血清中OPN、VEGF的表达情况,观察其表达的意义及两者之间的关系。结果研究组血清OPN、VEGF表达高于对照组(P＜0.05)。子宫内膜异位症患者血清OPN与VEGF呈正相关(r=0.411,P＜0.05)。结论OPN、VEGF的改变与子宫内膜异位症的发生、发展紧密相连,OPN可上调VEGF使其表达增强,而VEGF也可通过某种机制促进OPN酶切,两者共同诱发新生血管的形成,这表明OPN与VEGF在血管生成方面或许存在相关的协同作用。

子宫内膜异位症；骨桥蛋白；血管内皮生长因子

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在粘附、侵袭和恶性肿瘤转移等方面中起着非常重要的作用［1］。OPN在肿瘤方面研究较多,其与结直肠癌、乳腺癌［2］等肿瘤中均存在异常,但与子宫内膜异位症的相关性的研究却较少,故OPN成为近来子宫内膜异位症探索的热点之一。血管的生成不但在正常子宫内膜的生长修复中起重要的作用,而且在子宫内膜异位症的发展过程中也起着至关重要的角色［3］。血管的生成与促进血管生成的因子有着紧密的联系,是在多种细胞因子的协调控制下完成的,这些细胞因子中又以血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)为主。已有大量实验报道,OPN与VEGF的关联性在胃癌、肺腺癌等探索较密［2］,可用于辅助治疗,并且两者在恶性肿瘤中也呈现着高表达,而子宫内膜异位症在临床上具有类似恶性肿瘤的种植、扩散及远处转移等能力。故本实验通过应用ELASE方法测定子宫内膜异位症患者血清中OPN、VEGF含量,来探索这两种因子在子宫内膜异位症中演进发展的过程,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年7月～2014年1月在福田区人民医院予手术治疗并术后病理确诊：子宫内膜异位症患者30例为研究组,平均年龄(29.8±7.1)岁；选取同期子宫平滑肌瘤、卵巢良性肿瘤(卵巢成熟畸胎瘤、浆液性囊腺瘤)手术患者30例为对照组,平均年龄(31.7±7.6)岁。两组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。两组患者术后均由病理证实,各组患者肝肾功能均正常,同时排除自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎等)患者、近期服用激素类药物及恶性肿瘤者。

1.2 标本采集与制备及检测 术前清晨空腹抽取肘静脉血5ml,室温静置,离心机3000r/min,离心10min,取血清,-70℃冻存备用。同时取腹腔镜/开腹直视下抽取直肠子宫陷凹腹腔液3ml,处理同肘静脉血,所有标本污染者弃之。采用 OPN酶联免疫吸附测定试剂盒,VEGF酶联免疫吸附测定试剂盒(上海研辉生物科技有限公司)分别测定 OPN和VEGF含量,严格按照试剂盒说明书步骤进行实验,测定 450nm吸光度(A)值。根据 ELISA实验所得的标准品的OD值,相应浓度,应用Excel软件绘制标准曲线,再根据血清样本的 OD值分别求出OPN、VEGF浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验；相关性分析采用Pearson分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清OPN、VEGF水平比较 研究组血清OPN、VEGF表达高于对照组(t=21.013、12.771,P＜0.05)。见表1。

表1 两组血清OPN、VEGF水平比较(±s)

表1 两组血清OPN、VEGF水平比较(±s)

注：与对照组比较,aP＜0.05

组别例数OPN(ng/ml) VEGF(pg/ml)研究组 3058.73±7.78a84.86±19.81a对照组 3018.27±7.1236.44±6.23P <0.05<0.05

2.2 子宫内膜异位症患者血清OPN与VEGF关系 子宫内膜异位症患者血清OPN与VEGF呈正相关(r=0.411,P＜0.05)。

3 讨论

Cho等［4］用聚合酶链反应(PCR)和ELISA方法检测79例病理为子宫内膜异位症者为研究组和43例正常子宫内膜者为对照组,在子宫内膜异位症患者中OPN mRNA的水平高比正常内膜者(P=0.010＜0.05)；且OPN的平均血浆表达在子宫内膜异位症者和正常内膜者中分别为(407.31±37.80)ng /mL和(165.84±19.29)ng/mL。D'Amico等［5］通过测定OPN与CD133两者的mRNA和蛋白表达,发现子宫内膜异位症患者中的血清OPN mRNA蛋白的高表达,OPN可通过促进细胞间的黏附和细胞游走,从而提高异位子宫内膜的侵袭、增殖及生存能力,这与本研究结果相一致。本研究结果表明,研究组子宫内膜异位症患者血清中VEGF的表达高于对照组,OPN与子宫内膜异位症的发病有一定的相关,其可通过某种机制促进血管内皮细胞的趋化、粘附和迁移,参与其免疫反应,诱发新生血管的生成,产生抗凋亡信号,使异位的子宫内膜细胞更易于存活,有利于其持续侵袭。故OPN为子宫内膜异位症的诊断提供了一个可靠的检测指标,其可作为子宫内膜异位症的一个有用的诊断标记。研究显示VEGF在肿瘤靶向药物的开发及肿瘤辅助诊断等方面有重要意义［6］,如VEGF的多态性的具体机制在神经胶质瘤及胃肠道肿瘤,乳腺癌中的重要作用［7,8］,而VEGF是血管生成的一个重要因子,VEGF将激发和维持子宫内膜异位中的新生血管,促进其生成和增殖。VEGF水平在可能起到两方面的作用：①可能是一个有利于有活性的内膜组织植入其他部位的重要的病原学病因,高浓度的VEGF可导致腹膜的血管化；②VEGF可进行血管重塑,其是一种肝素结合蛋白的家族成员,VEGF通过增加血管的通透性,影响内皮细胞的生理功能,使凋亡细胞的数目明显下降,使大量的纤维素和纤维蛋白等溢出,形成胶样物质沉积于细胞间质内,为血管生成提供基质,诱发血管内皮细胞的增殖,更易于异位内膜的存活。

本研究结果表明,子宫内膜异位症患者血清OPN与VEGF呈正相关(r=0.411,P＜0.05)。OPN和VEGF能共同促进内皮细胞的活性,诱发血管生成。这表明OPN与VEGF之间或许存在某种必然的协同作用,其共同刺激内皮细胞的迁移,诱发血管的活性,使异位内膜更易于侵袭、种植与发展。有研究认为OPN可通过活化的转录因子上调VEGF使其表达增强,诱导内皮细胞粘附和迁移,诱发新生血管的生成,共同促进侵袭、转移的发生［9］；同时,VEGF也可刺激新生血管的形成,增加血管的通透性,易于激活外源性凝血途径,产生凝血酶,促进OPN酶切,同时刺激内皮细胞有丝分裂,诱发新生血管的生成,协同促进异位内膜的侵袭与生长。

内异症的病理机制需要三个步骤：粘附、侵袭和血管形成。血管形成是其重要的一个种植和生长的环节。腹腔镜虽可作为子宫内膜异位症诊断的金标准,但因其价格和有创性,临床应用存在局限性［10］,而血清OPN、VEGF可作为非侵入性诊断标志,且两者在血管生成等方面具有许多类似的生物学效应,在子宫内膜异位症中起到一定的作用,但具体机制有待于进一步研究。

［1］Agrawal D,Chen T,Irby R,et al.Osteopontin identified as lead marker of colon cancer progression,using pooled sample expression profiling.Journal of the National Cancer Institute,2002,94(7):513-521.

［2］Tang H,Wang J,Bai F,et al.Positive correlation of osteopontin,cyclooxygenase-2and vascular endothelial growth factor in gastric cancer.Cancer Investigation,2008,26(1):60-67.

［3］Fujimoto J,Sakaguchi H,Hirose R,et al.Angiogenesis in endometriosis and angiogenic factors.Gynecologic & Obstetric Investigation,1999,48(Suppl 1):14-20.

［4］Cho SH,Ahn YS,Choi YS,et al.ORIGINAL ARTICLE: Endometrial Osteopontin mRNA Expression and Plasma Osteopontin Levels are Increased in Patients with Endometriosis.American Journal of Reproductive Immunology,2009,61(4):286-293.

［5］D'Amico F,Skarmoutsou E,Quaderno G,et al.Expression and localisation of osteopontin and prominin-1(CD133) in patients with endometriosis.International Journal of Molecular Medicine,2013,31(5):1011-1016.

［6］贾志凌,杨永昌,张淑艳,等.血管内皮生长因子诊断多种恶性肿瘤临床价值.中华实用诊断与治疗杂志,2015,29(7):701-702.

［7］Bao G,Wang M,Guo S,et al.Vascular endothelial growth factor +936C/T gene polymorphism and glioma risk in a Chinese Han population.Genetic Testing & Molecular Biomarkers,2011,15(1-2):103-106.

［8］Wu X,Li D,Liu Z,et al.Vascular endothelial growth factor 1498C/T,936C/T polymorphisms associated with increased risk of colorectal adenoma: a Chinese case-control study.Molecular Biology Reports,2011,38(3):1949-1955.

［9］隋志甫,刘静杰,谷廷敏,等.创面修复中骨桥蛋白和表皮生长因子受体表达变化的实验研究.中国医药导报,2011,8(17): 22-23.

［10］邹华兰,洛若愚,熊霞鹂.血清CA125联合子宫内膜芳香化酶检测诊断子宫内膜异位症.中华实用诊断与治疗杂志,2011,25(4):364-365.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.18.016

2016-08-10］

广东省深圳市福田区公益性科研项目(项目编号：FTWS201361)

518000深圳福田区人民医院妇产科