微生物管碟法和浊度法测定硫酸链霉素的对比试验

赵化芳

（新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆 乌鲁木齐 830063）

微生物管碟法和浊度法测定硫酸链霉素的对比试验

赵化芳

（新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆 乌鲁木齐 830063）

对比管碟法和浊度法的试验原理、仪器设备、菌种、培养基、缓冲液、培养条件、实验结果等，找出他们的异同点和优缺点，更好地应用于实验室检测。

管碟法；浊度法；硫酸链霉素；对比试验

目前在国际上，抗生素效价测定以管铁法和浊度法共行，各国药典均有采用[1]。《中华人民共和国兽药典》2010年一部，收载的91个抗生素品种中，有44个品种采用了微生物检定法（其中有18个采用了浊度法），53个品种采用了高效液相色谱法。

1 原理不同

管碟法是将高低浓度的标准品和样品溶液加入到牛津杯中，通过溶液的渗透与摊布在平板中的枯草芽孢杆菌相互作用形成抑菌圈，通过测量标准品和样品形成的抑菌圈直径来计算供试品含量。浊度法是在比色皿中按拉丁方排列，加入高低含量的标准品和样品溶液1 mL，再加入含葡萄球菌的液体培养基9 mL，通过测定标准品和样品的吸光度，来计算样品含量。

2 试剂和材料的选择不同

管碟法采用生素鉴定Ⅰ号固体培养基，浊度法采用抗生素检定培养基Ⅲ号液体培养基，磷酸盐缓冲液均为pH为7.8的磷酸盐缓冲液，抗生素溶液的配置不同，管碟法配置标准品样品的最终浓度为1.2 U/mL和0.6 U/mL的溶液，浊度法为含6 U/mL和9 U/mL的溶液。

3 菌种和菌悬液的制备不同

管碟法是取金黄色葡萄球菌的第三代培养菌，接种到营养琼脂斜面培养基上，36 ℃培养24 h，用7 mL灭菌水将菌苔洗下制成菌悬液，当天使用。浊度法是取枯草芽孢杆菌的第三代培养菌，接种到营养琼脂斜面培养基上，36 ℃培养7 d，用灭菌水7 mL将芽孢洗下，制成芽孢悬液，在65 ℃水浴内加热30 min将繁殖菌体杀死，待冷后放冰箱4 ℃贮藏为浓菌液。

4 试验方法不同

4.1 微生物管碟法

底层加20 mL灭菌的抗生素检定Ⅰ号培养基，上层加入0.5%枯草芽孢杆菌菌悬液的抗生素检定Ⅰ号培养基5 mL，凝固后每个平板中对角放入4个牛津杯，将每个平板的4个牛津杯中分别对角加入高低浓度的标准品和样品各300 μ L，小心放入37 ℃培养箱培养16 h，在ZY-300Ⅳ多功能微生物自动测量仪，测量抑菌圈直径，出具检验报告。

4.2 微生物浊度法

按拉丁方排列从某一标记处，沿壁精密加入1.0 mL抗生素溶液，再在标记稍上处精密加入9.0 mL带菌培养基，将沾在试管壁上的抗生素充分冲入培养基内。同时制备含菌阳性对照管和无菌培养基空白对照管。将比色皿放入WBS-100微生物比浊法测定仪中，恒温振摇培养，增加氧的供应，可促进生长，缩短培养时间，实时监控，智能判断终点，在线快速读数。

5 试验结果的对比与分析

在上述试验条件下，通过两种不同的试验方法，对注射用硫酸链霉素的测定效价、偏离平行、可信限率的实验结果进行统计分析，结果如表1。两种方法的效价测定结果相近，偏离平行均大于0.05，可信限率均低于5，精密度等均满足实验需要。但浊度法的测定效价的精密度较好于管碟法，可信限率低于3。并且管碟法需要较多的平行样品，才能达到需要的可信限率，增加了工作量。

管碟法应用范围广，培养条件要求较宽，但实验过程长，试验结果易受琼脂扩散性的影响。比浊法快速，试验过程3～4 h，可当天获得结果，无扩散因素的影响，试验的灵敏度高，结果的精密度与准确度均较琼脂扩散法好，但采用手工加样时，过程较为繁琐，对温度控制精度和温度均一性要求较高。

R927

A

1006-799X(2016)18-0106-01

赵化芳（1987-），女，新疆乌鲁木齐人，助理兽医师，主要从事畜牧兽医和实验室相关检测工作。