母体高效价IgG类抗-D抗体致新生儿溶血病相关免疫指标检测及其临床意义

张业翠，武 文，吴 鹏，张志波

母体高效价IgG类抗-D抗体致新生儿溶血病相关免疫指标检测及其临床意义

张业翠，武 文，吴 鹏，张志波＊

目的 通过确定怀有畸形儿的孕妇血清中存在的不规则抗体的性质及效价，以评估其引起新生儿溶血病的风险。方法利用微柱凝胶检测法及试管法鉴定孕妇ABO及RH血型，使用试管法和抗人球法对患者血清中的不规则抗体进行筛查鉴定，并测定抗体效价。结果患者血型为“B”dccee，血清中存在IgG抗-D，效价为2048。结论高效价的抗-D免疫球蛋白可致Rh系统新生儿溶血病。

Rh血型；抗-D免疫球蛋白；新生儿溶血病

母婴血型不合引起的新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）是因为母体IgG类血型抗体通过胎盘进入胎儿体内，与相应红细胞结合，导致胎儿或者新生儿红细胞破坏，发生溶血反应。最容易引起溶血反应的两个血型系统为ABO血型和Rh血型系统，而RhD血型不合导致的HDN尤为严重。新生儿的主要表现有溶血性贫血、心力衰竭、黄疸和水肿等［1］。如果在孕期不能及早做出诊断，易导致胎儿畸形、胎死宫内、新生儿黄疸或死亡。所以，对围产期孕妇进行血清抗体效价检测（尤其是有妊娠史的RhD阴性的孕妇），并采取积极的预防及治疗措施，能有效地避免新生儿溶血病的发生或减轻临床症状。笔者在血清学检测过程中发现1例孕妇因存在高效价 IgG类抗-D抗体，引起胎儿发生Rh新生儿溶血病。为探讨其发生原因，进行了相关试验研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 病例资料 患者，女，26岁。妊娠37+4周，因“胎儿畸形”于2014-11-03入院。超声检查显示：羊水指数10.1，胎儿胸腔、心包内探及少量液性暗区，腹腔探及大量液性暗区，前后径约102 mm，并可见膜样回声漂浮。入院诊断：妊娠37+4周，胎儿畸形。孕妇生产史：2007年药物流产1次，2008年人工流产1次，2009年再次怀孕，2010年于当地镇卫生院剖宫产一女婴现健康存活。无输血史。孕妇前三次怀孕均未进行血型鉴定。

1.2 试剂与仪器 单克隆抗-A、抗-B（上海血液生物医药有限责任公司，批号：20140716）；抗D（IgM）试剂 （上海血液生物医药有限责任公司，批号：20140926）；ABO血型正/反定型和RhD血型微柱凝胶检测卡（Diamed公司，批号：50093.60.04）；抗-C、抗-c、抗-E、抗-e（上海血液生物医药有限责任公司，批号：20140716）；试剂ABO细胞为本室自制。Rh阴性确认试剂：（1）抗D（IgG/IgM）试剂（Sanquin公司，批号 8000194872）；（2）抗 D（IgM/IgG）试剂（Millipore公司，批号：BMH1305D）；（3）抗D（IgG）试剂 （上海血液生物医药有限责任公司，批号：20130930）。抗体筛选细胞 （Sanquin公司，批号8000210308）。低离子抗人球蛋白卡（Diamed公司，批号：50531.85.07）。抗体鉴定谱细胞 （Sanquin公司，批号8000209217）。KUBOTA KA-2200细胞洗涤离心机（日本久保田公司），水浴箱HH.W21.420（天津泰斯特公司），全自动血型配血分析仪IH-1000（BIO-RAD公司），DiaMed孵育器和离心机（Diamed公司）。

1.3 血型鉴定 使用微柱凝胶检测法对患者血型进行鉴定，取EDTA抗凝血2 ml，3000转离心3 min，使用全自动血型配血分析仪IH-1000进行血型鉴定。因微柱凝胶检测法结果显示ABO正反定型不符，为排除假阳性凝集，即用试管法复查ABO血型。Rh（D）血型使用微柱凝胶检测法检测结果显示为阴性，即用试管法进行Rh血型分型鉴定。Rh阴性确认试验：取低离子抗人球蛋白卡1张，每个微柱孔加入被检者0.8%的红细胞生理盐水悬液各5 μl，再分别加入3种不同厂家的Rh阴性确认试剂各25 μl，放入DiaMed专用孵育器孵育15 min，后放入DiaMed专用离心机，3000转离心10 min，判读结果。

1.4 不规则抗体筛选 应用筛选细胞进行抗体筛选，明确或排除不规则抗体的存在。（1）试管法。取小试管3只标明1、2、3，分别加入5%的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞1滴及患者血清各2滴，放入KUBOTA KA-2200细胞洗涤离心机，3500转离心15S，判读结果。（2）抗人球法。取低离子抗人球蛋白卡1张，标明1、2、3，分别加入0.8%的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞50 μl，患者血清各25 μL，放入DiaMed专用孵育器孵育15 min，后放入DiaMed专用离心机离心10 min，判读结果。

1.5 抗体鉴定 用谱细胞进行抗体鉴定，确定不规则抗体的特异性。操作步骤同不规则抗体筛选。

1.6 抗体效价测定 取小试管12只分别标注号码，各管均加入生理盐水200 μl，吸取患者血清200 μl加入第1管中，混匀，从第1管吸取200 μl加入第2管中，倍比稀释至第12管，从第12管吸取200 μl弃掉，从第1管血清的稀释倍数分别为：1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024，1∶2048，1∶4096。取低离子抗人球蛋白卡2张，每个微柱孔从1到12分别标注号码，并加入0.8%“O”型Dccee谱细胞各50 μl，分别加入对应号码试管中的稀释血清25 μl，放入DiaMed专用孵育器孵育15 min，后放入DiaMed专用离心机离心10 min，判读结果。

2 结果

2.1 血型鉴定结果 微柱凝集实验结果显示ABO正反定型不符，正定型血型为B型，反定型A、B细胞均凝集。盐水法鉴定ABO血型为B型，Rh血型为dccee（表1）。Rh（D）阴性确认试验为阴性。其配偶ABO血型为“B”型，Rh血型为dccee。

表1 患者血型鉴定反应结果

2.2 不规则抗体筛选结果 患者血清与抗筛Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号细胞盐水法均为阴性，抗人球蛋白卡结果为阳性（表2）。

表2 患者血清与抗体筛选细胞反应结果

2.3 抗体鉴定结果 患者血清与谱细胞反应结果显示患者血清中存在不规则抗体为IgG抗-D（表3）。

2.4 抗体效价测定结果 孕妇血清与“O”dccee谱细胞做抗体效价测定，IgG抗-D效价为2048。

3 讨论

Rh血型系统是人类血型系统中较为复杂的一种，其中D抗原具有很强的免疫原性，在胎儿红细胞上发育完善，故IgG类抗-D抗体是引起新生儿Rh血型不合溶血病的重要原因之一。一般认为，异型输血和妊娠免疫是血型为Rh（D）阴性孕妇产生抗-D抗体的重要原因，若Rh（D）阴性孕妇初次孕育的胎儿血型为Rh（D）阳性，胎儿红细胞经胎盘进入母体，刺激母体发生免疫致敏反应，当再次怀孕时抗D抗体不同程度的通过胎盘屏障进入胎儿循环导致流产、胎儿水肿、黄疸、贫血、胎儿死亡等很多新生儿溶血相关疾病的发生［2］。随怀孕次数增加，母体产生IgG抗-D抗体滴度升高，胎儿患新生儿溶血病概率增高，病情加重。该病例中患者在多次流产、妊娠过程中均未进行输血相容性检测，直至本次入院才发现因夫妇、母婴Rh血型不相合而刺激孕妇产生IgG抗-D抗体，抗体效价高达2048。患者终止妊娠，娩出死胎，胎儿严重畸形。通过试验可确诊为新生儿Rh血型溶血病。

表3 患者血清与谱细胞反应结果

Rh血型系统新生儿溶血病的发病率虽然不及ABO血型系统的发病率高，但病情严重。为了预防和减轻Rh新生儿溶血病的发生应采取以下预防措施：对初次妊娠的妇女产前检查时应常规检测Rh血型，对于Rh血型鉴定为Rh（D）阴性的妊娠期妇女，需同时鉴定其配偶的Rh血型，以便于判断Rh新生儿溶血病的发病概率。对有过妊娠史或流产史的Rh（D）阴性孕妇需做不规则抗体筛选及抗体鉴定。我国最新发布的《特殊情况紧急抢救输血推荐方案》推荐，无抗-D的Rh（D）阴性患者，特别是育龄期妇女和女童，输注Rh（D）阳性供者细胞成分后，有条件者应尽快注射抗-D免疫球蛋白以预防抗体产生［3］。已知血型为Rh（D）阴性的育龄妇女，还应避免多次流产或妊娠以减少免疫机会［4］。怀孕期间在可能致敏事件发生72 h内尽早注射抗-D免疫球蛋白，如果因故错过该时限，10 d内注射可能仍具有一定保护作用［5］。而本病例中患者在本次妊娠前的多次流产和妊娠中均未预防性注射抗-D免疫球蛋白，这也是胎儿发生新生儿溶血病的主要原因之一。对夫妇血型不相配合的Rh（D）阴性孕妇，应在孕18~20周做一次抗体效价测定作为基础水平，以后每隔4周重复测定一次，检测抗体上升速度。当抗D的效价达到16时，预示胎儿发生Rh新生儿溶血病的概率增加，如果抗体水平持续升高，表示病情可能严重，则需要在妊娠中期开始给予积极的治疗。目前临床多采用中西结合的方法治疗新生儿溶血病［6，7］。如果本患者在产前检查过程中能及时地进行抗体效价测定并对产生的抗体进行积极的治疗，可以有效预防或减轻Rh新生儿溶血病的发生。

该研究提示，对孕龄妇女做好孕检教育及孕前ABO血型和Rh血型检测，同时，对有过妊娠史或流产史的Rh（D）阴性孕妇定期做不规则抗体筛选及抗体鉴定，适时监测抗体效价并积极进行干预治疗，可以有效预防或减轻Rh新生儿溶血病的发生，对降低围产期死亡率，保证新生儿生命健康有着重要的临床意义。

［1］刘开良，李碧娟，彭金艳．母亲Rh缺失型-D-致重度新生儿溶血病抢救成功1例［J］．中华儿科杂志，2006，44（6）：473-474.

［2］周 红，王 青，刘道伟．妊娠妇女产前不规则抗体检测分析［J］．检验医学与临床，2011，8（12）：1504-1505．

［3］中国医师协会输血科医师分会，中华医学会临床输血学分会．特殊情况紧急抢救输血推荐方案［J］．中国输血杂志，2014，27（1）：1-3．

［4］王立萍，阎东河，赵月凯．多次输血、妊娠产生Rh血型抗体16例［J］．中国输血杂志，2005，18（3）：249-250．

［5］任少敏，刘献成，王同显．英国预防新生儿溶血病抗-D免疫球蛋白应用指南解读［J］．中国输血杂志，2014，27（6）：673-678．

［6］马印图，刘 芳．母婴Rh血型不合新生儿溶血病的治疗进展［J］．医学研究杂志，2011，40（1）：151-153．

［7］徐文皓，李志强．血浆置换术治疗高效价抗-D孕妇效果评价［J］．中国输血杂志，2011，24（9）：752-753．

［2016－03－12收稿，2016－04－10修回］ ［本文编辑：吴 蓉］

Detection of relevant immuno-indexes and their clinical significance of the newborn babie's hemolytic disease caused by the mother's high titer IgG anti-D antibody

ZHANG Ye-cui，WU Wen，WU Peng，et al.Department of Blood Transfusion，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveThrough determining the titre of the irregular antibodies in serum of pregnant women with the malformation to assess risk of the newborn's hemolytic disease caused by the antibody.MethodsThe ABO and Rh blood typing with microcolumn gel test and test tube methord were taken，and the titter of the irregular antibodies were detected with anti-human globulin test.ResultsThe blood group of the pregnant women was"B"dccee，and the titer of anti-D IgG was 2048.ConclusionOf newborn babie's hemolytic disease of caused by the pregnant women's high titer anti-D IgG.

Rh blood group；Anti-D IgG；Hemolytic disease of the newborn

R457.1+1

A

10.14172/j.issn1671-4008.2016.09.006

250031山东济南，济南军区总医院输血科（张业翠，武文，吴鹏，张志波）

张志波，Email：zzb9063@sina.com