HPLC同时测定辛芳鼻炎胶囊中的木兰脂素和欧前胡素

刘建霞 童翔

摘要：目的 采用高效液相色谱法测定辛芳鼻炎胶囊中的木兰脂素和欧前胡素中的含量。方法 HPLC条件为：CAPCELL PAK-C18 色谱柱（5μm，4.6mmI.D.×250mm）；流动相为乙腈—水（52：48）；柱温为30℃；流速为1.0mL/min；检测波长为230nm；结果 木兰脂素、欧前胡素8～80μg，0.02028～0.2028μg与峰面积线性关系良好；平均回收率分别为：123.11%、103.81%。结论 本法操作简单、准确、重复性好，为辛芳鼻炎胶囊质量标准的提高提供了依据。

关键词：木兰脂素；欧前胡素；辛芳鼻炎胶囊

中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2016）06-0077-02

辛芳鼻炎胶囊由辛夷、白芷等成分组成，具有发表散风、清热解毒、宣肺通窍的功效，临床广泛应用于慢性鼻炎、鼻窦炎等症的治疗。现收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，其质量检测仅有白芷药材的薄层色谱鉴别（TLC），且白芷药材的TLC鉴别易受其它药材的干扰，致使检测结果不明显。为了更好地控制产品质量，保证临床使用安全有效，本文用HPLC法同时测定该制剂中木兰脂素和欧前胡素的含量，以期为建立辛芳鼻炎胶囊新的质量标准奠定基础。

文献显示，木兰脂素和欧前胡素[1～3]分别是该中成药中辛夷和白芷的主要指标成分；本文采用HPLC同时对木兰脂素和欧前胡素2种成分定量检测，简化了操作程序，降低了工作量，实现了对该制剂中2种指标成分含量的同时测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪系统（安捷伦科技公司），电子天平（岛津AEL-200）；电子天平（赛多利斯BP2110-OCE），超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司KQ-500E），紫外分光光度计（TV：199011901）。

1.2 材料及试药 木兰脂素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110882-200605，供含量测定用，置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上使用）；欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110826-201013，含量以99.6%计，供含量测定用）；辛芳鼻炎胶囊（山西华康药业股份有限公司，产品批号：20111107，20130801，20130901，20131004）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为CAPCELL PAK-C18（5 μm，4.6 mmI.D.×250 mm）；流动相为乙腈-水（52：48）；柱温为30℃，流速为1.0 mL/min；检测波长为230 nm；进样量为10μL。木兰脂素在约8.3min出现色谱峰，欧前胡素在约15.3 min出现色谱峰，混合对照品分别在约8.3 min和15.3 min出现色谱峰，见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取木兰脂素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110882-200605，供含量测定用，置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上使用）适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含木兰脂素0.1 mg的溶液，即得。取欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110826-201013，含量以99.6%计，供含量测定用）适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含欧前胡素10 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品约1.0 g，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，称重，超声处理（功率240W，频率45kHz）30 min，放冷，补重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性供试品溶液的制备 按处方比例称取缺辛夷、白芷以外的其他药材，按制备工艺制成阴性制剂，再按2.2.2 项下的方法制备阴性供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性实验 分别精密吸取阴性供试品溶液、混合对照品溶液、供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，依法测定。木兰脂素和欧前胡素的保留时间分别约为8.3，15.3 min，与混合对照品溶液的色谱保留时间一致；阴性供试品溶液在该色谱条件下对测定无干扰。

2.3.2 线性关系 考察精密吸取上述混合对照品溶液2、4、6、8、10、15、20 μL分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，木兰脂素、欧前胡素分别在8～80 μg，0.02028～0.2028 μg范围内，进样量和峰面积呈良好的线性关系，且r值分别为0.9999、0.9999。

2.3.3 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶液，按2.1项下的方法连续进样6次，分别测定木兰脂素、欧前胡素的峰面积，峰面积RSD分别为0.2%、0.4%。

2.3.4 重复性试验 取同一批号辛芳鼻炎胶囊（20111107）6份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算，结果木兰脂素、欧前胡素的含量分别为3、5550、0、0851 mg/g，RSD分别为1%、1.2%。

2.3.5 中间精密度试验 用Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦科技公司），CAPCELL PAK-C18色谱柱（5 μm，4.6 mmI.D.×250 mm）；在不同人员操作下，精密吸取同一混合对照品溶液，按2.1项下的方法连续进样6次，分别测定木兰脂素、欧前胡素的峰面积，峰面积RSD分别为0.09%、0.6%。取同一批号辛芳鼻炎胶囊（20111107）6份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算，结果木兰脂素、欧前胡素的含量分别为3.52906、0.08617 mg/g，RSD分别为0.7%、1.2%。

2.3.6 稳定性考察 吸取按2.2.2项下的制备条件制备的供试品溶液，于室温放置0、2、6、9、10、12、24 h后按2.1项下的色谱条件进行，分别测定木兰脂素、欧前胡素的峰面积，RSD分别为0.7%、2.8%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.3.7 加样回收率实验 取同一批号辛芳鼻炎胶囊（20111107）9份，每份约0.5 g，精密称定，分别置于锥形瓶中，取木兰脂素对照品溶液（1.8 mg/mL），欧前胡素对照品溶液0.02028 mg/mL，分别于1，2，3号样中精密加入0.5和1 mL，4，5，6号样中精密加1和2 mL，7，8，9号样中精密加1.5和3 mL精密吸取1、2、3 mL，各3按2.2.2项下方法制备供试品溶液，并按2.1项下的色谱条件，依次测定，计算平均回收率，分别为113.1%，103.8%，RSD分别为1.5%，0.9%。

2.3.8 样品测定 取3批辛芳鼻炎胶囊，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪中，在上述相同色谱条件下记录2种成分的峰面积值，求得3批样品的每粒木兰脂素的含量分别为0.91，0.90，091（mg/粒）；欧前胡素含量分别为0.02，0.02，0.02（mg/粒）。

3 讨论

3.1 提取溶剂与提取时间的选择 本实验前期进行了样品中有效成分的提取方法的考察，分别是加甲醇超声1 h、加乙酸乙酯浸泡30 min超声30 min[4]、加乙酸乙酯热回流提取[3]、加60%甲醇浸泡过夜[5]，结果发现加甲醇超声1 h提取的样品含有量较其他溶剂高，且杂质影响较小。同时按2.1项下的方法考察了加甲醇超声20、30、40 min不同超声时间对样品的影响，实验表明，超声30 min时所测峰面积较大，超声时间较短，且所测成分稳定。

3.2 检测波长的选择 为确定木兰脂素和欧前胡素的检测波长，对木兰脂素、欧前胡素对照品（均为10 μg/mL）进行紫外全波段扫描，木兰脂素在210、222.5、230.5、254、278 nm处有较大吸收，欧前胡素在219、231、248.5、276、300.5nm处有较大吸收。取木兰脂素和欧前胡素的混合对照品，浓度均为0.02 mg/mL，按2.1项下的方法分别考察在210、215、219、230、278 nm波长下对混合对照品的影响，发现在230 nm波长时，2种对照品所测的峰面积较为理想，且无杂质峰，故选择在230 nm波长下测定。

3.3 柱温的设定 取木兰脂素和欧前胡素的混合对照品，按2.1项下的方法分别考察在20、25、30、35、40℃柱温下对混合对照品的影响，考察发现所测峰面积受温度影响较小，所以柱温设定为30℃。

3.4 流动相及洗脱方式的选择 参阅相关文献[6]，分别使用了乙腈-水不同比例的流动相进行实验。结果表明，各流动相中主峰之间的分离度均大于1.5，且乙腈：水（52：48）流动相能更好地分离木兰脂素与欧前胡素，且能使出峰时间提前，考察时间最短，阴性样品对测定无干扰。

参考文献：

[1]王春梅，崔新颖，李贺.白芷香豆素的抗炎作用研究[J].北华大学学报（自然科学版），2006，7（4）；318.

[2]王德才，李珂，徐晓燕，等.杭白芷香豆素组分解热镇痛抗炎作用的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2005，12（11）；36.

[3]李战，吴敏.辛夷和苍耳子的临床药理研究进展[J].上海第二医科大学学报，2004，5（24）；393.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：169.

[5]刘梅，刘新，王飞，等.RP-HPLC同时测定辛芷提取物中的木兰脂素和欧前胡素[J].光谱实验室，2012，3（2）.

[6]朱志峰.HPLC法测定鼻渊片中木兰脂素的含量[J].中成药，2012，10.

（收稿日期：2016-03-15）