两种烟草根结线虫生防菌对土壤中微生物数量的影响

谭 萍，王仁刚，田 红，林世锋，贾蒙骜，杨志晓，李 莉

（1.贵州市农业试验中心，贵州 贵阳 550007；2.贵州省烟草科学研究院，贵州 贵阳550081；3.贵州师范大学，贵州 贵阳 550001）



两种烟草根结线虫生防菌对土壤中微生物数量的影响

谭 萍1，王仁刚2，田 红1，林世锋2，贾蒙骜2，杨志晓2，李 莉3

（1.贵州市农业试验中心，贵州 贵阳 550007；2.贵州省烟草科学研究院，贵州 贵阳550081；3.贵州师范大学，贵州 贵阳 550001）

摘 要：以前期筛选出的对烟草根结线虫防治效果较好的两种担子菌进行田间试验，研究不同处理下烟草根际土壤中可培养真菌、细菌及放线菌的变化。结果表明：两种生防担子菌有效抑制了烟草根际中烟草根结线虫二龄幼虫的数量，还能显著增加土壤中可培养真菌、细菌及放线菌数量；其中，毛头鬼伞菌对土壤中可培养放线菌数量的影响最为显著。

关键词：烟草根结线虫；生防菌；土壤微生物

烟草根结线虫病是我国烟草生产的主要病害之一，分布范围十分广泛，对烟草品质影响较大[1]。长期以来，对该病的防治主要以化学药剂为主，导致了一系列的副作用，如产生抗药性、破坏生态平衡和污染环境等。近年来，符合现代环保和健康理念的生物防治方法受到各国的重视。因此，研究选用两种防治烟草根结线虫的生防菌进行田间试验，观测生防菌对烟草根围土壤中可培养真菌、细菌和放线菌数量的影响，以期为烟草根结线虫病的生物防治提供依据。

1　材料与方法

1.1试验材料

供试菌株为毛头鬼伞菌（Coprinus comatus）和P.ox1（P. ostreatus的驯化型）；供试药剂为阿维菌素；供试烤烟品种为NC82，是烟草根结线虫病感病品种。

1.2试验方法

1.2.1试验设计 试验在贵州省福泉市烟草科学研究院实验基地进行，选择往年根结线虫病发病较重的地块为试验田。田间试验共设6个处理，分别为：毛头鬼伞菌（500 g/株）、P.ox1（500 g/株）、C1（阿维菌素）、C2（灭菌玉米芯；500 g/株）、C3（阿维菌素+玉米芯）、CK（不作任何处理）。处理15～20 d后移栽壮苗，CK不作任何处理。小区为单行区，种烟50株/区。每个处理设3次重复，随机区组排列，共18个小区。小区四周设保护行，按优质烟栽培规范化管理。

1.2.2考察指标及方法 （1）土样的采集。6～9月，每隔20 d左右取土样1次。采用多点取样法每点用土钻采集0～30 cm土层，每个处理取3个点，土样带回实验室做进一步处理。（2）线虫的分离。将土样混合均匀后从中取出100 g土样，采用贝漫漏斗法分离线虫，48 h后收集线虫悬浮液，将虫杀死后用TAF固定液固定，参照方中达[2]的方法进行鉴定。（3）土壤中真菌、细菌及放线菌的分离 采用震荡稀释分离法，称取发病地区的根系和土壤10 g，加入盛放了90 mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，震荡20 min，使土样与水充分混合，静置5 min，制成稀释10倍的土壤悬液。将其作为原液进行梯度稀释，吸取1 mL原液放入装有9 mL灭菌水的试管中充分混匀，制成了稀释100倍的土壤悬液，以此类推制成稀释103、104、105、106倍的土壤悬液，采用马丁氏、牛肉膏蛋白胨和改良高氏1号3种培养基分别进行真菌、细菌和放线菌的分离，培养条件见表1。

表1　3类微生物的分离和培养

2　结果与分析

2.1不同处理土壤中烟草根结线虫二龄幼虫密度变化

根结线虫是固着性内寄生线虫，在烟草根围土壤中广泛存在。烟草根结线虫二龄幼虫是其唯一的侵染虫态[3]。从图1中可以看出，毛头鬼伞菌和P.ox1菌处理以及C1处理的后期对烟草根结线虫二龄幼虫的数量抑制效果明显优于其他处理；这表明在大田中施用生防菌毛头鬼伞菌和P.ox1菌能显著降低烟草根际土壤中根结线虫的数量。C2和C3处理的前期烟草根结线虫二龄幼虫的数量持续缓慢增加，而后期烟草根结线虫二龄幼虫数量陡增，这种现象可能与处理中玉米芯的施用有关。

图1　不同处理烟草根结线虫二龄幼虫的数量变化

2.2不同处理对烟草根围土壤中可培养真菌数量的影响

土壤微生物系统中的第三大类群真菌直接参与土壤中有机质的分解、腐殖质和团聚体的形成以及土壤中的氨化作用[4]。由图2可知，两个生防菌及C2处理的可培养真菌数量呈现出持续上升的趋势，且P.ox1处理后期土壤中可培养真菌数量显著多余其他处理；C3处理前期的真菌数量几乎没有变化，可能是前期阿维菌素的作用抑制了真菌的生长，到后期药效减弱，玉米芯给烟草根结线虫二龄幼虫及土壤中真菌提供了更多的生存条件所致。

图2　不同处理烟草根围土壤中可培养真菌数量的变化

2.3不同处理对烟草根围土壤中可培养细菌数量的影响

从图3中可以看出，毛头鬼伞菌P.ox1及C2处理在初始期土壤中可培养细菌数量显著多于其他处理，这可能与添加的外源物质为细菌生长提供了良好的生存环境及营养物质有关。随着时间的推移，细菌不断繁殖，生存空间逐渐缩小，可利用的基质也逐渐减少，不同处理土壤中的细菌数量均呈现下降趋势。不同的是C2处理后期土壤中细菌数量呈缓慢持续上升趋势，而毛头鬼伞菌和P.ox1处理土壤中细菌数量呈现出先升后降的趋势，出现第二个高峰，且毛头鬼伞菌处理土壤中可培养细菌数量显著高于其他处理，这可能是因为土壤中的有机质渐渐腐解，为微生物活动提供了持续碳源和能源。而 C1、C3处理前期土壤中细菌的数量变化不显著，可能与阿维菌素作用有关。

图3　不同处理烟草根围土壤中可培养细菌数量的变化

2.4不同处理对烟草根围土壤中可培养放线菌数量的影响

土壤中放线菌的数量仅次于细菌，不但对土壤中有机化合物的分解及腐殖质的合成有重要作用[5]，一些放线菌的代谢产物对根结线虫还有抑制或毒杀作用[6-8]。由图4可知，除C1处理7月土壤中放线菌数量低于CK外，其他时期各处理土壤中的放线菌数量均高于CK。随着时间的变化，不同处理对烟草周围土壤中可培养的放线菌数量的影响呈现先升后降的趋势。7～8月，由于气温上升，受土壤生态因子的影响，各处理土壤中可培养的放线菌数量均显著增加，其中增幅最大的是毛头鬼伞菌处理。

图4　不同处理烟草根围土壤中可培养放线菌的变化

3　讨 论

生物防治是植物病害综合治理的重要措施之一，也是现代农业可持续发展的重要内容。对烟草根结线虫病的生物防治是烟草生产及现代农业发展的需要。施用毛头鬼伞菌与P.ox1可以改善土壤微生态环境，为烟草生长创造更好的营养条件，使烟草更加健壮，并且对烟草根结线虫病有较好的防治效果。试验采用的传统分离培养方法虽然具有一定局限性，但可以简单、直观地反应出烟草根围土壤中可培养真菌、细菌和放线菌的变化情况。土壤中栖居着大量的微生物，影响着烟草根系组织对养分的吸收，同时这些微生物之间也存在着微妙的关系[9]，因此还需进一步研究生防菌的施用对烟草周围土壤中真菌、细菌及放线菌的群落结构的影响。

参考文献：

[1] 邱雪柏. 烟草根结线虫生物防治研究进展[J]. 贵州农业科学，2010，38（7）：121-124.

[2] 方中达. 植病研究方法[M]. 北京：中国农业出版社，1998. 22-125.

[3] 姜治清. 杀线虫担子菌的筛选及毛头鬼伞对烟草根结线虫防治的研究[D]. 贵阳：贵州大学，2008.

[4] 何志刚，王秀娟，董 环，等. 日光温室辣椒连作不同年限土壤微生物种群变化及酶活性研究[J]. 中国土壤与肥料，2013，（1）：38-42.

[5] 蔡 倩，杜国栋，吕德国，等. 科尔沁沙地南部果-草（粮）间作模式对土壤微生物和酶的影响[J]. 干旱地区农业研究，2014，（4）：217-222.

[6] 祝明亮，李天飞，夏振远，等. 云南烟草根结线虫发病土壤生态因子分析[J]. 中国烟草学报，2003，9（4）：30-34.

[7] 祝明亮，李天飞，张克勤，等. 根结线虫生防资源概况及进展[J].微生物学通报，2004，31（1）：100-104.

[8] 祝明亮，张克勤，李天飞，等. 三种生物制剂对烟草根结线虫病防效研究[J]. 云南大学学报（自然科学版），2000，（5）：369-372.

[9] 李 苪. 解淀粉芽孢杆菌41B-1、铜绿假单胞菌841P-3对棉花根围土壤微生物群落结构的影响[D]. 南京：南京农业大学，2010.

（责任编辑：成 平）

共同第一作者：王仁刚

Effects of Two Kinds of Tobacco Root Knot Nematode Biocontrol Bacteria on Microorganism in soil

TAN Ping1，WANG Ren-gang2，TIAN Hong1，LIN Shi-feng2，JIA Meng-ao2，YANG Zhi-xiao2，LI Li3.
（1. Guiyang Agricultural Experiment Center， Guiyong 550025， PRC； 2. Guizhou Academy of Tobacco Science， Guiyong 550081， PRC；3. Guizhou Normal University， Guiyong 550001， PRC）

Abstract：Selected two kinds of basidiomycete which has better control effect of tobacco root knot nematode to take the field test, research the change of fungi, bacteria and actinomycetes in the rhizosphere soil of tobacco under different treatments. The results showed that two kinds of biocontrol fungi can effectively inhibit the quantity of second instar larvae of tobacco root knot nematode in tobacco rhizosphere, also increase the quantity of culturable fungi, bacteria and actinomycetes. Among them, Coprinus comatus has most significant effect on culturable actinomycetes in soil.

Key words：tobacco root knot nematode; biocontrol; soil microorganism

通讯作者：李 莉

作者简介：谭 萍（1986-），女，辽宁宽甸县人，助理农艺师，主要从事植物病害研究。

基金项目：贵州省农业攻关项目（黔科合NY［2013］3041号）

收稿日期：2016-03-01

DOI:10.16498/j.cnki.hnnykx.2016.04.021

中图分类号：S154.3

文献标识码：A

文章编号：1006-060X（2016）04-0069-030