山豆根中总黄酮的含量测定

邹玉龙 张颖 徐丹 李海燕

【摘要】目的：测定山豆根中总黄酮的含量。方法： 采用超声波提取法提取山豆根中的总黄酮，并以A1（ NO3） 3、NaNO2、及NaOH为显色剂，芦丁为对照品，分光光度法测定其含量。结果：山豆根中总黄酮含量为57mg/g 。结论：该方法可用于测定山豆根中的总黄酮。

【关键词】山豆根；总黄酮；超声波提取

【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）09-0013-01

山豆根为豆科植物越南槐（Vietnamese sophora Root）的干燥根及根茎。山豆根味极苦，微有豆腥气，具有清热解毒，消肿止痛的功效，常用于咽喉牙龈肿痛、肺热咳嗽烦渴、热解便秘等症。山豆根含有黄酮类、有机酸、植物色素、脂肪、水分及灰分等成分[1]，而黄酮类化合物具有心血管系统维护、抗菌及抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、镇痛、保肝等多种生物活性[2-4]。实验采用超声波提取法提取山豆根中的总黄酮，以芦丁为对照品，采用紫外可见分光光度法测定其总黄酮的含量。

1仪器与材料

1.1仪器RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；AS3120B超声波清洗仪（北京卓川电子科技有限公司）；722-型分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；BSA223S分析天平（上海赛多利斯仪器系统有限公司）。

1. 2材料乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；山豆根为市售。

2方法与结果

2. 1样品溶液的制备山豆根干燥后打粉过40目筛，精确称取5.0000g于锥形瓶中，加入80ml 60%乙醇溶液，超声提取60min，过滤，旋转蒸发浓缩，定容至250ml。

2.2标准溶液的配制精确称取芦丁标准品10mg，用60%的乙醇溶液定容至100ml容量瓶中，冷藏放置于冰箱。

2.3测定波长的选择取标准溶液1ml ，置于25ml容量瓶中，加入0. 6ml5% NaNO2，摇匀，放置6 min后加入 1 ml 10 % A1（NO3）3 ，放置6 min，再加入10ml 4% NaOH溶液，混匀，用60%乙醇稀释至刻度。同时作空白对照，15min后测定波长420～700nm区段的吸光度，得知最大吸收在510 nm，因此选定波长为510 nm 。

2.4标准曲线的建立分别取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml标准溶液于25ml容量瓶中，各加入0.6ml 5% NaNO2，摇匀，放置6min后加入1ml 10% A1（NO3）3，放置6min，再加入10ml 4 % NaOH溶液，混匀，用60%乙醇稀释至刻度，静置15min，以试剂空白为参比于510nm处测其吸光度，以吸光度A纵坐标，芦丁的浓度c为横坐标，得到回归方程： A=11.83c+0.0169（r=0.9994），表明样品在4～20μg范围内线性关系良好。

2.5精密度考察精密移取标准溶液5份1ml，按“2.4”测定其吸光度，RSD为0.82 %（n=5），说明精密度良好。

2. 6重现性考察精密移取样品溶液5份1ml，按“2.4”测定其吸光度， RSD为1.19%（n=5），说明重现性良好。

2.7回收率实验移取已知总黄酮含量的样品溶液1ml，加入标准溶液，按“2.4”测定吸光度，计算加样回收率。结果平均回收率为101.26%，RSD为2.71%（n=5）。

2.8总黄酮含量测定准确吸取样品溶液1ml，共5份，测定样品溶液中总黄酮的浓度为0.114 mg/ml，RSD为 0.15%（n=5），并通过计算得出山豆根中总黄酮含量为5.7mg/g 。

3讨论

天然产物有效成分含量较低，难于富集，分离难度大，不同的提取方法对不同药物有效成分的提取率存在差异。黄酮的主要提取方法有：溶剂法（水提法、碱性稀醇和碱性水提、有机溶剂提取法）、超声波提取法 、微波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法。实验采用超声波法提取总黄酮，利用分光光度计测定了总黄酮的含量，该工艺简单无污染、成本较低，是一条理想的提取黄酮的途径。

参考文献

[1] 王君明，崔瑛.山豆根化学成分、药理作用及毒性研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（4）：229-232.

[2] 严振宇，张秋菊.黄酮类化合物提取分离方法简介[J].微量元素与健康研究，2012，29（3）：55-57.

[3] 沈广志，郭强，何志鹏.分光光度法测定大枣中总黄酮含量[J].微量元素与健康研究，2011，28（4）：26-27.

[4] 李春华. 山豆根的研究进展[J].中国民族民间医药，2012（19）：26.

（收稿日期：2016.03.16）