HPLC法测定糠酸莫米松乳膏中的有关物质

曹玉明

(安徽新和成皖南药业有限公司，安徽 宣城　242000)

HPLC法测定糠酸莫米松乳膏中的有关物质

曹玉明

(安徽新和成皖南药业有限公司，安徽 宣城242000)

摘要：目的建立糠酸莫米松乳膏(艾洛松)中有关物质的检测方法。方法采用HPLC法对艾洛松中的有关物质进行测定。以Amethyst C18-P(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱为固定相；乙腈-水(53∶47)为流动相；流速为1 mL·min-1；检测波长为254 nm；进样量为20 μL。结果各单个杂质不超过1.0%,总杂质不超过2.0%。该方法对5个批次糠酸莫米松乳膏中的有关物质进行了测定，其限度均为单个杂质不超过1.0%,总杂质不超过2.0%。结论该方法准确可靠，可作为糠酸莫米松乳膏(艾洛松)中有关物质的测定方法。

关键词：糠酸莫米松;色谱法,高压液相

糠酸莫米松(商品名：艾洛松 )是美国MERCK SHARP & DOHME公司开发的一种高效糖皮质激素药，该药于1987年5月6日获得美国FDA批准上市，剂型为乳膏剂，规格0.1%，用于湿疹、神经性皮炎、异位性皮炎及皮肤瘙痒症[1-7]。糠酸莫米松乳膏于2007年4月26日经国家食品药品监督管理局批准进口。目前在国内有7家药企仿制生产上市，其执行标准[8]为国家药品标准WS1-(X-025)-2004Z，该标准未规定有关物质检查项。欧洲药典7.0版收载的该药物原料药中含有结构类似丙酸倍氯米松的九种有关物质[9](主要是工艺杂质、氧化降解或水解杂质)，并规定了限度范围，美国药典34版Mometasone Furoate Cream中规定了上述六种有关物质限度范围[10]。因此，通过对糠酸莫米松乳膏中有关物质测定方法的研究[11-12],完善其质量标准，有效控制该仿制药生产工艺过程所引入的工艺杂质或降解产物，保证该仿制药与原研药的质量一致性，提高其临床疗效。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，UV检测器，Chemstation色谱工作站；METTLER TOLEDO电子天平。

1.2试药糠酸莫米松对照品(美国药典委，批号:H0E009)，丙酸倍氯米松对照品(中国食品药品检定研究院 批号∶100119-200603)；糠酸莫米松乳膏(共5批，批号：121101、121102、121103、11CNGFA046、11CNGFA042)；辅料：丙二醇(由南京威尔化工有限公司提供，批号：121002)单、双硬脂酸甘油酯(由湖南尔康制药有限公司提供，批号：120905)；乙腈为色谱纯；水由Milli-Q系统制备。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验采用Amethyst C18-P(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱；流动相：乙腈-水(53∶47)；流速：1 mL·min-1；柱温：25℃；检测波长为254 nm；进样量为20 μL。糠酸莫米松保留时间为(17±1.0)min、丙酸倍氯米松保留时间为(22±1.0)min，糠酸莫米松峰与丙酸倍氯米松峰之间分离度应不小于6；理论板数按糠酸莫米松对照品色谱峰计算不低于1 000。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液取糠酸莫米松对照品与丙酸倍氯米松对照品适量，精密称定，用乙腈溶解并定容，制成每1 mL中含0.2 mg的糠酸莫米松和0.6 mg的丙酸倍氯米松对照品储备液。再取上述储备液适量，加乙腈稀释成含糠酸莫米松0.05 mg和丙酸倍氯米松0.015 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液取艾洛松样品，精密称定，置10 mL量瓶中，加乙腈适量，置80 ℃水浴加热使融化，强力振摇2 min，放冷，加乙腈稀释至刻度，摇匀，置冰浴冷却1 h，离心，取上清液作为供试品溶液。

2.2.3对照溶液精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.2.4阴性对照溶液取其他辅料，按处方制备不含糠酸莫米松的阴性样品，依“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液，作阴性干扰性试验和专属性考察。

2.3测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液、对照溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液糠酸莫米松保留时间为(17±1.0)min、丙酸倍氯米松保留时间为(22±1.0)min，糠酸莫米松峰与丙酸倍氯米松峰之间分离度应不小于6，否则调整流动相乙腈浓度。供试品溶液、对照溶液色谱图至主峰保留时间2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，扣除辅料峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的2倍(2.0%)。低于对照峰面积0.1倍的峰忽略不计。供试品溶液、对照溶液图谱见图1。各杂质峰相对保留时间见表1。

2.4方法学考察

2.4.1专属性考察取供试品溶液、对照溶液以及阴性对照溶液，按下列条件进行破坏性试验后进样测定，记录峰面积，结果见表2。各条件适度破坏后，主峰与杂质峰分离度均达基线分离，各杂质峰在此条件下均有一定的响应值。各阴性按相同方式破坏后，各降解产物峰在主峰位置上无任何杂质峰。说明本法的专属性良好。

坏条件：干热:置200℃油浴锅放置5 min；强酸:加稀盐酸0.4 mL，置沸水浴放置4 h后，加氢氧化钠试液0.8 mL中和；强碱:加氢氧化钠试液0.4 mL，置沸水浴放置2 min后，加稀盐酸0.2 mL中和；氧化:加30%过氧化氢0.4 mL，置沸水浴放置2 h；金属:加新制0.1 mol·L-1氯化亚铁中性混悬液(氢氧化钠试液调pH值至7.0)0.4 mL，置116 ℃热压4 h；光照:贴于40 W冷光灯管(照度5万Lx)10 d；湿热:加水5 mL，置116 ℃热压4 h。

2.4.2检测限试验取供试品溶液，用乙腈定量稀释100倍，再逐级稀释制成不同浓度的溶液。取最低浓度的溶液，按照“2.1”项下色谱条件，进样分析，记录基线最大噪音峰面积与主峰面积。以信噪比3∶1的供试品溶液浓度作为仪器检测限，测定其检测限为0.36 ng。

2.4.3定量限试验取供试品溶液，用乙腈定量稀释100倍，再逐级稀释制成不同浓度的溶液，取最低浓度的溶液，按照“2.1”项下色谱条件，进样分析，记录基线最大噪音峰面积与主峰面积。以信噪比10∶1的供试品溶液浓度作为仪器定量限，测定其定量限为1.44 ng。

2.4.4重复性试验取艾洛松(批号：121101)，按照“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，精密量取供试品溶液适量，按照“2.2.3”项下方法制成对照溶液。按照“2.1”项下色谱条件，进样分析，计算RSD值，结果见表3。试验结果说明该方法重复性良好。

A对照品溶液

B供试品溶液

C对照溶液

图1　各溶液HPLC图

注：各杂质名称和结构参考欧洲药典7.0版糠酸莫米松原料药标准收载项以及各杂质对照品溶液、样品强制降解试验研究结果确定，目的进行本品的杂质定量分析，而不作定性考察。以样品中各杂质峰的相应响应值作对比研究。

表2　专属性试验结果

表3　重复性试验结果/%

注：单个杂质= 单个杂质峰面积÷对照峰面积×1%；总杂质=(总峰面积—主峰面积)÷对照峰面积×1%。

2.4.5溶液稳定性试验取同一份供试品溶液和对照溶液，室温自然光条件下放置，在0～24 h内，按照“2.1”项下色谱条件，分别于0、1、2、4、8、24 h进样测定，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。计算RSD值，结果见表4。结果表明，供试品溶液在24 h时内不稳定，最好临用新制。

表4　溶液稳定性试验结果

2.4.6耐用性试验取同一份供试品溶液和对照溶液，按照“2.1”项下色谱条件，分别在三根不同型号、品牌色谱柱上进样分析。色谱图见图2。结果表明，本法测定糠酸莫米松乳膏有关物质适合用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长250 mm，内径4.6 mm，填料粒径5 μm)。

2.4.7阴性干扰性试验取糠酸莫米松原料、供试品溶液、对照溶液以及阴性对照溶液，按照“2.1”项下色谱条件，进样分析，色谱图见图3。在阴性对照溶液色谱图中与糠酸莫米松原料及供试品溶液相应保留时间上无任何色谱峰，结果表明，该方法检测本处方样品阴性无干扰。

2.5样品测定取艾洛松样品，按“2.2.2和2.2.3”项下方法制备供试品液和对照液，照“2.1”项下的色谱条件检测，结果见表5。

Amethyst C18-P Agilent zorbax ODS Amethyst C18-H

图2不同型号、品牌HPLC色谱图

阴性对照溶液 原料 供试品溶液

图3　阴性干扰性试验HPLC图

3讨论

本文中所制的乳膏样品原料药均为国产原料(浙江仙琚制药公司生产)且国内仿制制剂生产厂家也大多采用此原料药。由于糠酸莫米松原料自身所含有的工艺杂质或氧化降解杂质较多以及在制剂生产工艺过程中不可避免地引入其他降解产物，如乳膏剂大多是W/O型，溶解度较小的原料大多采用二甲基亚砜、丙二醇水浴助溶，以提高原料在制剂中的分散均匀度。水溶一般在80～85℃之间，糠酸莫米松对热、湿均较不稳定，有降解产物H产生。同时药物强制降解破坏性试验结果也表明有降解产物，且在湿热条件下出现了相对主峰保留时间相同的水解产物H。因此，有必要对糠酸莫米松乳膏中九种有关物质的测定法进行研究，以控制制剂中相关物质限度，保证其安全有效。

欧洲药典7.0版收载的该原料药和美国药典34版糠酸莫米松乳膏中有关物质的限度测定均采用高效液相色谱法，色谱条件相似，均以乙腈-水(50∶50)为流动相，以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)为固定相，检测波长为254 nm，不同的是校正因子的内标物质不同，分别是丙酸倍氯米松与邻苯二甲酸二乙酯。本文结合制剂工艺采用乙腈-水(53∶47)为流动相，以丙酸倍氯米松为内标物，可以有效提高糠酸莫米松溶解性能，使有关物质与主峰有效分离，并进行柱效评价。

参考文献

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[3]徐德海,王继湖.0.1%糠酸莫米松乳膏治疗面部湿疹皮炎疗效观察[J].皮肤病与性病,2011,33(6):365-369.

[4]王小平,卢忠明.糠酸莫米松乳膏治疗湿疹皮炎类皮肤病的临床观察[J].中国基层医药杂志,2013,20(4):588-590.

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[9]EDQM.European Pharmacopoeia-7th Edition [S].2010: 2523.

[10] The United States Pharmacopeial Convention .USP34-NF29[S].2011: 2999.

[11] 国家药典委员会.中国药典(二部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010: 附录XIX A.

[12] 刘亭.一阶导数分光光度法测定自制糠酸莫米松微乳的含量[J].药学与临床研究,2010,18(1): 86-87.

Determination of the related substances in Mometasone Furoate Cream by HPLC

Cao Yu-ming

(AnhuiNHUPharmaceuticalCom.,Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China)

Abstract:ObjectiveTo develop a method for the related substances in mometasone furoate cream(Eloson).MethodsHPLC was adopted for the limits determination of the related substances.An Amethyst C18-P column(250 mm × 4.6 mm,5 μm)was used as the stationary phase,with a mobile phase of acetonitrile-water solution(53∶47),the flow rate was 1 mL·min-1,the detection wavelength was 254 nm and the injection volume was 20 μL.ResultsFor each impurity was not more than 1.0%,the total was not more than 2.0%.Five batches of Eloson were analyzed under the established method,all of results were that for each impurity was not more than 1.0% and the total was not more than 2.0%.ConclusionThe developed method is accurate and reliable,which could be used for the limit control of the related substances in Eloson.

Key words:Mometasone Furoate Cream;Chromatography,High Pressure Liquid

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.015

(收稿日期：2016-01-26，修回日期：2016-03-11)