脑梗死患者CD36抗原缺失的基因检测及临床意义

刘　莉

中国人民解放军第161中心医院检验科　武汉　430010

脑梗死患者CD36抗原缺失的基因检测及临床意义

刘莉

中国人民解放军第161中心医院检验科武汉430010

【摘要】目的研究脑梗死患者中CD36基因缺陷及其与脑血管病危险因素之间的关系。方法选择脑梗死患者行CD36基因缺陷筛查，观察CD36基因缺陷比例及缺陷类型，并对比CD36缺陷患者与CD36正常患者的一般临床资料及血糖、血脂水平。结果脑梗死患者中CD36缺陷率高于正常人群，以1228-1239del型、949ins型基因突变为主。且CD36基因缺陷患者伴随有血糖、TC、LDC-C、LP(a)、ApoA1显著升高。结论CD36基因缺陷在脑梗死的发病机制中起重要作用，其原因可能与其导致的血糖、血脂调节障碍有关。CD36基因可作为脑血管病防治的分子生物学靶点。

【关键词】脑梗死；CD36；血糖；血脂

脑梗死(cerebralinfarction)是目前严重威胁人类身体健康的一种常见病、多发病。动脉粥样硬化是脑梗死发生发展过程中的重要环节，而血糖和血脂异常又是动脉粥样硬化形成的危险因素。近年来遗传因素在脑梗死发病机制中的地位越来越引起人们的重视[1]。清道夫受体CD36是一种膜糖蛋白，广泛存在于单核巨噬细胞、脂肪细胞、血小板、肝细胞、心肌细胞和一些上皮细胞。CD36介导的主要功能涉及到脂质利用、胰岛素抵抗、血栓形成和炎症反应，因此在动脉粥样硬化形成中起重要作用[2]。有研究显示，日本人群中CD36缺陷患者呈现了严重的动脉硬化病变。原因可能与CD36缺陷患者吞噬细胞吞噬OX-LDL能力下降，伴胰岛素抵抗、高血压，加重了动脉粥样硬化的形成有关[3]。上述研究多集中于心血管系统，而CD36基因缺陷与脑血管病变，特别是脑梗死及其相关危险因素的关系却未见有文献报道。为了解决这些问题，我们对脑梗死患者进行CD36基因缺陷筛查，并观察相应的血糖、血脂改变，为脑血管病的早期诊断、危险人群的筛选和基因治疗提供依据。

1材料与方法

1.1研究对象2015-09-2015-12在161中心医院就诊的动脉粥样硬化性脑梗死患者121例，男90例，女31例，入选者均为发病72h内；经头颅CT或MRI诊断为脑梗死，经颈部彩超证实存在颈部动脉粥样硬化斑块。排除标准：病人年龄<18岁或>80岁；心源性栓塞、动脉炎、外伤、血液病、药物、肿瘤等其他原因引起的脑梗死患者；感染、炎症性疾病，肝肾功能不全、血液病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、甲状腺疾病和使用免疫抑制剂者。所有入选者在入组前1个月均未服用他汀类药物。

1.2临床资料及生化指标采集对所有患者进行身高、体质量、血压、体质量指数等一般指标测量与计算，记录患者高血压史、冠心病史和糖尿病史等脑血管病危险因素。采集清晨空腹血进行血细胞分析和空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等生化指标测定。(1)性别；(2)年龄；(3)发病时间；(4)生命体征(体温、血压)；(5)血管危险因素(有无高血压、糖尿病、血脂异常、吸烟史、饮酒史)；(6)前期治疗(有无使用降压药物、降糖药物)；(7)神经功能缺损评分(NIHSS评分)；(8)实验室检查指标(血糖、血脂、血小板计数、白血球计数)。

1.3基因检测及分组收取所有符合研究条件的脑出血患者清晨空腹外周血5mL，并分装、编号。用于PCR-SSP法测定有无CD36缺陷基因型。按既往报道设计CD36突变引物(见表1)，这些突变位点是亚洲人群中导致CD36表达缺失的常见位点[4-5]。共筛选出19例CD36缺陷患者，我们以筛查出CD36缺陷患者为基准，从102例CD36正常患者中挑选出19例相同部位、相同神经功能缺损评分的患者作为正常对照组。见表1。

表1　检测CD36基因缺陷的探针

C268T：在268位点碱基C替代碱基T；329-330del：在329-330位点删除GC碱基；619-624ins：在619-624位点删除ACTGCA碱基并且插入AAAC碱基；949ins：在949位点插入A；1 228-1 239del：在1 228-1 239位点删除ATTGTGCCTATT碱基。

2结果

2.1CD36缺陷患者的筛查与分型将入组脑梗死患者126例，首先利用PCR-SSP技术进行CD36缺陷的筛查，典型的PCR电泳图见图1。共筛选出CD36缺陷患者21例，占脑梗死患者人数14.88%。其中有一种基因缺陷型15例，包括C268T型2例，329-330del型1例，1228-1239del型8例，949ins型2例，619-624ins型2例；合并有两种基因缺陷型4例，分别为C268T+1228-1239del型1例，949ins+1228-1239del型3例；合并有三种基因缺陷型2例，均为619-624ins+949ins+1228-1239del型。

图1　典型的CD36缺陷患者PCR电泳图

2.2CD36缺陷与CD36正常脑梗死患者入院时临床资料我们以筛查出CD36缺陷患者为基准，从105例CD36正常患者中挑选出18例相同部位、相同神经功能缺损评分的患者作为正常对照组。并分析2组入院时一般临床资料(见表2)。结果显示，2组入院时临床基本资料无显著差异。

2.3CD36缺陷与CD36正常脑梗死患者血糖血脂水平糖尿病和高脂血症是动脉粥样硬化形成的重要危险因素。CD36主要功能涉及到脂质利用、糖代谢等，通过对比CD36缺陷与CD36正常脑梗死患者血糖、血脂水平，以进一步了解CD36基因在动脉粥样硬化过程中的作用。见表3。

表2　CD36缺陷/CD36正常患者的一般临床资料

表3　CD36缺陷与CD36正常脑梗死血糖血脂水平比较

注：*P<0.05；**P<0.01

3讨论

随着人们生活饮食方式的改变、老龄化社会的来临，脑血管病已成为影响人类健康的首要疾病。近年来，对于脑血管病发生相关基因的研究已越来越受到人们的重视，并发现了大量与脑血管疾病发生相关的基因位点，有望为脑血管病诊断提供方便可行的分子标记，以早期预测高风险人群并指导其一级预防[1]。

CD36是一种细胞表面的单链糖蛋白，属B类清道夫受体，CD36广泛存在于单核巨噬细胞、血小板、血管内皮细胞中，CD36通过与多种配体结合，参与机体复杂的生理病理过程。目前，CD36的清道夫受体功能已被人们广泛研究。如CD36促进巨噬细胞识别和内化氧化低密度脂蛋白，导致脂质超载形成“泡沫细胞”和动脉粥样硬化斑块。在机体代谢方面，CD36结合长链脂肪酸，促进它们进入细胞，从而参与了肌肉脂肪利用率、脂肪能量存储和肠道吸收脂肪过程，并在代谢疾病如糖尿病和肥胖症的发病机制中起作用[2]。

在人群存在着CD36缺陷。在欧美白人中极少有CD36缺陷，但在亚非人种中CD36缺陷比例超过2%[6]，而日本CD36缺陷患者高达3～11%[7]。据报道，国内深圳和广西地区人群CD36抗原缺失型频率分别为3.19%和4.80%[8-9]。有研究显示，脑出血病人中CD36缺陷比例高于正常人中CD36缺陷比例[10]，所以我们筛查的CD36缺陷率达14.88%，其原因也可能与选取的都是脑梗死患者有关。有研究显示CAD病人中CD36缺陷比例高于正常人中CD36缺陷比例[11]，与之类似，我们研究发现在脑梗死患者中CD36缺陷率也远高于正常人群，其原因可能与CD36缺陷导致血脂异常、血糖升高，这些均为脑血管病的独立危险因素，从而导致发病率的提高。有研究显示，CD36基因可能与心肌梗死发病年龄提前有关[12]，我们研究显示，与CD36正常患者相比，CD36缺陷患者脑梗死的发病年龄也有所提前，虽然没有统计学意义，但仍提示CD36基因缺陷可能与脑梗死发病有关，需要进一步大样本研究。此外，我们发现与脑出血患者CD36缺陷以C268T型、329-330del型、1228-1239del型基因突变为主不同[10]。我们的研究结果显示脑梗死患者以1228-1239del型、949ins型基因突变为主，且有多个患者同时存在多个位点的基因突变型，这提示CD36基因的不同突变类型可能产生不同的发病机制，导致不同的疾病谱。以上研究说明，CD36基因在脑血管病发病中起保护作用，CD36基因缺陷可能导致较高的的脑血管发病率。

动脉粥样硬化是脑梗死发生发展过程中的重要环节，而血糖和血脂异常又是动脉粥样硬化形成的危险因素。有研究显示CD36缺陷患者呈现了严重的动脉硬化病变，原因可能与CD36缺陷患者吞噬细胞吞噬OX-LDL能力下降，伴有高血压，加重了动脉粥样硬化的形成有关。但也有研究提示CD36基因突变没有增加动脉硬化及其并发症(缺血性心脏病等)的风险。这些研究结果不一致，可能与地域差异、种族、研究样本量等因素有关。我们研究结果显示，与CD36正常患者相比，CD36缺陷患者出现血糖、TC、LDL-C、LPa、ApoA显著升高，而HDL-C、ApoB显著降低，这与Yuasa-KawaseM等人结果一致，其原因与CD36缺陷人群存在糖代谢异常、血脂代谢紊乱有关。而糖尿病、高脂血症是脑血管病的重要危险因素，CD36缺陷的人群存在较高的糖尿病、高脂血症发病率，可能会导致脑血管病发病率升高。

总之，我们的研究提示CD36基因缺陷在脑梗死的发病机制中起重要作用，其原因可能与其导致的血糖、血脂调节障碍有关。对CD36基因深入了解有助于研究脑血管病变的发生机制和防治措施，CD36基因可作为治疗脑梗死的潜在靶点以进行药物筛选、基因治疗等，为新药的研究发明提供新的思路。

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(收稿2015-09-12)

GenetictestingandclinicalsignificanceofCD36antigengenedeletionincerebralinfarctionpatients

Liu Li

Department ofLaboratory，the 161 Central Hospital of PLA，Wuhan 430010，China

【Abstract】Objective To explore the CD36 gene defect in cerebral infarction patients，and its relationship with the risk factors for cerebrovascular disease.Methods Patients with cerebral infarction were screened for CD36 gene defect to observe the ratio and type of CD36 gene defect.Clinical data，blood glucose and lipid levels of CD36-deficient patients and normal patients were Compared.Results CD36 defects rate in cerebral infarction patients was higher than the normal population.The defects were predominantly 1228-1239del type and 949ins gene mutation.The glucose，TC，LDC-C，LP(a)，ApoA of CD36-deficient patients were significantly increased.Conclusion CD36 gene defect plays an important role in the pathogenesis of cerebral infarction，which might relate to the blood sugar and blood lipid regulating disorders caused by CD36.CD36 gene can be used as biological target molecule for cerebrovascular disease prevention and treatment.

【Key Words】Cerebral infarction； CD36； Blood glucose； Blood lipid

【中图分类号】R743.33

【文献标识码】A

【文章编号】1673-5110(2016)10-0019-03