程序性细胞死亡因子5与AT丰富结构域1A在结直肠癌中的表达*

何胜悦, 何　常*

(贵州医科大学附院 病理科， 贵州 贵阳　550004)

程序性细胞死亡因子5与AT丰富结构域1A在结直肠癌中的表达*

何胜悦**, 何常***

(贵州医科大学附院 病理科， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 研究程序性细胞死亡因子5(PDCD5)与AT丰富结构域1A(ARID1A)在结直肠癌(CRC)中的表达。方法： 应用免疫组织化学法检测结直肠癌(55例)、结直肠腺瘤(18例)和结直肠黏膜慢性炎症(18例)组织中PDCD5与ARID 1A的表达，同时，分析PDCD5及ARID1A蛋白的表达与CRC患者淋巴结转移、生存期及TNM分期的关系，采用spearman′s方法分析结直肠癌组织中PDCD5及ARID1A蛋白表达的相关性；随访CRC患者1～60个月，分析PDCD5及ARIDIA 蛋白表达阳性或阴性CRC患者的生存曲线图。结果： 在结直肠癌、结直肠腺瘤、结直肠黏膜慢性炎症组织中，PDCD5的阳性表达率分别为45.5%(25/55)、83.3%(15/18)和94.4%(17/18)，差异有统计学意义(P<0.05)；ARID1A阳性表达率分别为52.5%(29/55)、80%(14/18)和100%(18/18)， 差异有统计学意义(P<0.05)；CRC患者组织中PDCD5与ARID 1A 呈正相关(r=0.279，P=0.039)； ARID 1A的表达与TNM分期、淋巴结转移及5年生存期有关(P<0.05)；结直肠癌中PDCD5、ARID1A阳性表达病例的生存状况较阴性病例好。结论： PDCD5、ARID1A的表达对结直肠癌的发生发展有一定的影响。

[关键词]结直肠肿瘤； 程序性细胞死亡因子5； 免疫组织化学； AT丰富结构域1A

结直肠癌(colorectal cancer CRC)是一种常见的消化道恶性肿瘤，全世界每年约60万人死于结直肠癌[1]，结直肠癌的形成与进展和细胞凋亡密切相关。程序性细胞死亡因子5(progra-mmed cell death fator 5,PDCD5)作为凋亡相关调控因子，影响着细胞周期及凋亡[3-5]；而作为抑癌基因的AT丰富结构域1A(AT rich interactive domain 1A,ARID1A)，亦影响了细胞周期，促进了细胞凋亡[6-8]，本研究采用免疫组织化学方法检测PDCD5及ARID1A在结直肠癌中的表达，并探讨其意义。

1材料与方法

1.1临床资料

选取2004年1月～2006年11月行CRC手术，术前未进行化(放)疗的同一组织学类型(管状腺癌Ⅱ级)病例55例， 30～80 岁，平均55 岁；男 26 例，女 29 例。选取18例CRC患者远癌处结直肠黏膜慢性炎症组织作为黏膜慢性炎症标本，25岁～51岁，平均39岁；男12例，女6例。结直肠腺瘤病例18例，23岁～45岁，平均34岁；男10例，女8例。所取CRC、结直肠腺瘤及黏膜慢性炎症标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4 μm。PDCD5 兔抗人多克隆抗体购自北京博奥森，ARID1A 兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德，DAB 显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。显微镜使用 OLYMPUS BX53 型。

1.2方法

采用免疫组织化学法，严格按说明书进行操作，检测了3组标本中PDCD5及ARID1A蛋白表达，PBS 代替一抗作阴性对照。PDCD5以细胞质有棕黄色显色为阳性，ARID1A以细胞核呈清晰棕黄色颗粒为阳性。观察100倍显微镜下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定[2]。记录PDCD5及ARID1A蛋白的表达阳性率。

1.3观察指标

分析CRC患者PDCD5及ARID1A蛋白表达的相关性；同时分析PDCD5及ARID1A蛋白表达与CRC患者年龄、性别、淋巴转移、生存期及TNM分期的关系；对55例CRC患者随访1～60个月，比较PDCD5蛋白及ARID1A蛋白的阳性表达或阴性表达CRC患者的生存曲线图。

1.4统计学分析

数据采用软件 SPSS 19.0 处理，计数资料用率(%)表示，数据采用χ2检验；使用Spearman等级相关法分析结肠癌组织中PDCD5、ARIDIA蛋白表达的相关性，PDCD5、ARIDIA蛋白的表达分别与患者预后的关系均采用Kaplan-Meier法(Log-Rank检验) 进行生存分析，检验水准取α= 0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1PDCD5和ARID1A蛋白阳性表达率

PDCD5 及ARID1A蛋白在CRC、结直肠腺瘤、结直肠黏膜慢性炎症组织中均有表达，两两比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　PDCD5 及ARID1A蛋白在3组结直肠组织中的表达(n ,%)

(1)与CRC比较，P<0.05；(2)与结直肠腺瘤比较，P<0.05

2.2PDCD5与ARID1A相关性

spearman′s相关分析显示，在结直肠癌组织中PDCD5与ARID1A的表达呈正相关(r=0.279，P<0.05)。

2.3PDCD5及ARID1A蛋白表达与CRC患者淋巴结转移、生存期及TNM分期的关系

ARID1A在CRC组织中的表达与患者的年龄、性别无关(P>0.05)，与TNM分期、淋巴结转移及5年生存期有关(P<0.05)；PDCD5与患者的年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期及5年生存期均无关(P>0.05)。见表2。

表2　PDCD5及ARID1A蛋白的表达与CRC患者淋巴结转移、生存期及TNM分期的关系(n ,%)

(1)与同一指标其他分组比较，P<0.05

2.4PDCD5及ARID1A蛋白表达与CRC患者生存状况的关系

分析PDCD5及ARID1A蛋白表达阳性组和阴性组生存曲线，发现PDCD5及ARID1A蛋白阳性表达病例的生存状况较阴性组好(P<0.05)。见图1。

注：A为PDCD5,B为ARID1A图1　PDCD5及ARID1A蛋白阳性或阴性表达的结直肠癌患者的生存曲线Fig.1　Survival curve of colorectal cancer patients with ARID1A and PDCD5 protein positive or negative expression

3讨论

大肠腺瘤为大肠癌的主要癌前病变， 80%以上的大肠癌是由于腺瘤的癌变。就结直肠癌而言，目前治疗方法仍以手术为主，但总体治疗效果并不能令人满意，而腺瘤的治疗方法相对简单，效果明显，且治愈率高，肠镜下摘除腺瘤便可降低大肠癌发病率。因此研究大肠癌的早期诊断和治疗就显得尤为重要。

PDCD5在肿瘤的进程中起了强大的抗肿瘤作用，可能是其与组蛋白乙酰转移酶Tip60 作用，导致了 DNA 损害并促进细胞凋亡，但具体机制尚未明确[3]。也有资料显示，Tracy 等[4]认为其可能通过抑制β- 微管蛋白折叠而促进了凋亡的发生。PDCD5的表达异常与肿瘤的发生发展有着密切的关系，在正常细胞的表达明显高于肿瘤细胞的表达[5]。这也与本实验结果一致。本研究显示，结直肠癌组织中的阳性表达要明显低于腺瘤组与慢性炎症组，并且在结直肠癌中PDCD5阳性表达的患者较阴性患者生存状况好。相关资料表明，PDCD5在细胞凋亡过程的早期出现高表达并能快速发生核转位，从而有效的促进细胞凋亡并抑制细胞生长。因此，PDCD5的表达对结直肠癌的早期诊断及预后具有一定的指导意义。

ARID1A位于染色体1p36.11。ARID1A在早期胚层的分化和发育过程中发挥重要作用， ARID1A能通过调节靶基因 BCL-2和cyclin D1诱导细胞凋亡的发生[6-7]。Guan等[8]研究发现诱导突变 ARID1A 的正常表达能够明显抑制细胞增殖，减少S期细胞数。这些证实了该基因与细胞增殖密切相关，并不同程度影响了细胞凋亡。Wang等[9]通过观察分析胃癌组织切片，发现 ARID1A表达低的预后较差。在膀胱移形细胞癌病人生存分析中发现，ARID1A低表达与癌症复发、恶性肿瘤进展显著相关[10]。Lichner等[11]通过相关实验发现肾透明细胞癌中ARID1A表达高的病人生存时间也要长于表达低的，与本研究结果一致。实验的生存分析也显示，ARID1A在结直肠癌中阳性表达的患者较阴性患者的预后好，这也提示ARID1A是一个较好的生存指标。ARID1A 作为一个潜在的肿瘤抑制基因，在致瘤性转化过程中起着重要作用。随着研究的深入，将更有利于了解肿瘤的形成，开拓新的肿瘤治疗途径，以更好更完善的方法诊断及治疗肿瘤性疾病。同时相关性研究结果显示， PDCD5、ARID1A的阳性表达在结直肠癌中呈正相关。综上，PDCD5、ARID1A的表达对结直肠癌的发生发展存在有一定的影响。

4参考文献

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[4] Tracy CM, Gray AJ, Jorge C, et al. Programmed cell death protein 5 interacts with the cytosolic chaperonin containing tailless complex polypeptide 1 (CCT) to regulate β-tubulin folding[J]. J Bio Chem, 2013(7):4490-4502.

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(2016-03-28收稿，2016-05-25修回)

中文编辑： 文箐颍； 英文编辑： 周凌

The Significance of PDCD5 and ARID 1A Expression in Colorectal Carcinoma

HE Shengyue, HE Chang

(DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To study the clinical significance of programmed cell death factor (PDCD5) and AT rich interactive domain 1A (ARID 1A) expression in colorectal carcinoma (CRC). Methods: PDCD5 and ARID 1A expression in 55 cases of CRC, 18 cases of colorectal adenoma, 18 cases colorectal inflammation were determined by immunohistochemistry. At the same time, the correlation of PDCD5 and ARID1A expression in CRC patients with lymph node metastasis , survival period and TNM staging was studied, and the correlation between PDCD5 and ARID1A protein expression in colorectal cancer tissues was analyzed by spearman's method ; CRC patients were followed up for 1 to 60 months to study survival curve of CRC patients with ARID1A and PDCD5 protein positive or negative expression.Results: In CRC, colorectal adenoma and colorectal inflammation , the positive expression rate of PDCD5 was 45.5%(25/55), 83.3%(15/18), 94.4%(17/18)respectively with significant differences among them (P<0.05); the ARID 1A positive expression rate was 52.5%(29/55), 80%(14/18), 100%(18/18) respectively with significant differences among them (P<0.05); ARID 1A was positively correlated with PDCD5(r=0.279，P=0.039)in CRC patients; ARID 1A expression in colorectal cancer tissues was associated with TNM staging, lymph node metastasis and 5 years survival (P<0.05); living condition of the ARID1A and PDCD5 positive expression CRC cases were better than the negative cases. Conclusion: ARID1A and PDCD5 expression has a certain effect on the occurrence and development of colorectal cancer.

[Key words]colorectal neoplasm; programmed cell death factor 5; immunohistochemistry; AT rich interactive domain1A

*[基金项目]贵州省科技厅基金(E2010-4)

[中图分类号]R735.3

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)06-0696-04

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.017

**贵州医科大学病理科2013级硕士研究生

***通信作者 E-mail:2077166911@qq.com

网络出版时间：2016-06-16网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1657.026.html