GP73在不同类型肝病中的应用价值

薛 冰 景博琼 徐 笛



GP73在不同类型肝病中的应用价值

薛 冰 景博琼 徐 笛

【摘要】目的 探讨高尔基体蛋白73（GP73）在慢性乙肝、肝硬化、肝细胞癌患者的表达水平。方法 采用酶联免疫定量测定法和电化学发光法检测63例原发性肝癌、77例肝硬化、83例慢性乙肝患者和75例健康人的血清中GP73、AFP含量。非正态分布数据多组间比较采用KW单因素方差分析，组间比较采用曼-惠特尼U检验。率的比较用卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。结果 GP73的含量在PHC组、肝硬化组、慢性乙肝组和健康对照组的总体分布不同（H=186.57，P＜0.01），进一步两两比较，PHC组含量均高于其它各组（P＜0.01）。以肝硬化组为参照，绘制GP73诊断PHC的ROC曲线，其AUC为0.867，敏感度90.48%、特异度66.23%。结论 GP73对原发性肝癌的诊断有较高的灵敏度，是一种有价值的肿瘤标志物，做为AFP诊断PHC的有效补充，可以提高PHC的早期诊断率。

【关键词】高尔基体蛋白73；甲胎蛋白；原发性肝癌

Objective To explor golgi protein 73（GP73）in patients with chronic hepatitis B，liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma（HCC）of expression level. Methods The levels of GP73 and AFP in serum of 63 cases of primary liver cancer，77 cases of cirrhosis，83 cases of chronic hepatitis B and 75 healthy persons were detected by enzyme linked immunosorbent assay and electrochemical luminescence assay. Comparison of non-normally distributed data was made by Kruskal-Wallis single factor ANOVA test，and multiple comparisons were made by Mann-Whitney U tset.Comparison of rates was made by chi-square test. P＜0.05 was considered significantly different. Results GP73 content in the PHC group，cirrhosis group，chronic hepatitis B group and healthy control group of the overall distribution of different（H=186.57，P＜0.01），further paired comparisonn，PHC group content was higher than other groups（P＜0.01）. In the cirrhosis group，the ROC curve of GP73 was drawn，and the AUC was 0.867，the sensitivity was 90.48% and the specificity was 66.23%. Conclusion GP73 has high sensitivity to the diagnosis of primary liver cancer. It is a valuable tumor marker，and it can be an effective complement to AFP diagnosis PHC. It can improve the early diagnosis rate of PHC.

【Key words】Golgi protein 73，Alpha-fetoprotein，Primary hepatocellular carcinoma

统计至2012年底，恶性肿瘤为我国城镇人口死亡率第二高疾病，死亡率第二高的恶性肿瘤即肝癌［1］。我国肝癌多由乙肝病毒感染逐渐演变为慢性乙肝、肝硬化、肝细胞癌。原发性肝癌（PHC）早期无典型临床表现，诊断后多为晚期，错失宝贵的治疗时间，早期准确诊断PHC对挽救患者生命具重要意义。甲胎蛋白（AFP）是PHC诊断的经典肿瘤标志物，但是仍有相当一部分AFP阴性PHC漏诊，有研究发现高尔基体蛋白73（GP73）具有作为PHC诊断肿瘤标志物的价值［2］。本文通过测定GP73在不同临床类型肝病中的浓度，分析GP73对肝癌早期诊断的临床价值。

1　对象与方法

1.1对象

纳入标准：肝细胞癌组：符合2010年NCCN指南，未行手术、介入、化疗、分子靶向治疗。肝硬化组和慢性乙肝组：符合2010年中华医学会肝病学分会、感染学分会《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准，HBsAg阳性。健康对照组排除甲肝、乙肝、丙肝、戊肝等肝炎病毒感染及自身免疫性肝炎，血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定在正常范围内。选择2013年12月～2015年7月在我院住院及门诊符合纳入标准患者298例，具体分组见表1。

表1　分组情况

1.2方法

1.2.1标本收集 抽取受检者清晨空腹静脉血3 ml，置于红头试管中，低速离心机3 000 r/min离心10 min，4 h内完AFP测定成，用于GP73测定的血清分装至EP管于-80℃低温冰箱中保存。

1.2.2GP73的测定 试剂盒（北京热景生物技术有限公司），检测仪器：MK3全自动多功能型酶标仪。采用酶联免疫吸附试验，比色波长450/630nm，按照GP73标准品曲线制定的浓度曲线，计算样本中GP73含量。

1.2.3AFP的测定 电化学发光法进行检测，使用德国罗氏COBAS E601电化学发光免疫分析仪及其配套试剂进行检测。所有测试均在该项目室内质控在控情况下完成。

1.3统计学处理

采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，正态分布数据用（±s）表示，非正态分布数据用M（P25-P75）表示，使用KW单因素方差分析、曼-惠特尼U检验、χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。MEDCALC绘制AFP和GP73的受试者工作特征（ROC）曲线，计算ROC曲线下面积，分析AFP和GP73检测的诊断价值。

2　结果

测定AFP和GP73在原发性肝癌组、乙肝后肝硬化组、慢性乙肝组、健康对照组中的含量，经比较P＜0.01，差异有统计学意义，见表2。

表2　AFP和GP73在不同类型肝病组的比较

统计PHC患者中AFP+、AFP-、GP73+、GP73-人数，比较两种测试在PHC的诊断中阳性率，χ2=6.776，P＜0.05，差异有统计学意义，在PHC诊断中GP73的阳性率高于AFP的阳性率。见表3。

表3　AFP和GP73结果在PHC中比较

以PHC组为阳性组，肝硬化为阴性对照组，绘制GP73与AFP诊断PHC的ROC曲线。GP73的AUC为0.867，95%CI为0.799 ～0.918；AFP的AUC为0.692，95%CI为0.609 ～0.767。根据约登指数确定GP73用于诊断PHC的临界值为92.3 ng/ml，在此临界值下的敏感度和特异性分别为90.48%、66.23%；AFP用于诊断PHC的临界值为204.3 ng/ml，其在此临界值下的敏感度和特异性分别为55.56%、90.7%（见图1）。

3　讨论

肝细胞癌（HCC）发病率位居全球恶性肿瘤的第五位，其死亡率却位居第二位，全球每年55%的患者来自中国，并且90%以上HCC患者具有病毒性肝炎基础。肝癌患者早期无明显症状，一旦确诊，多为中晚期，失去治疗时机，因此早期诊断尤为重要。HCC的早期诊断主要依靠影像学及血清甲胎蛋白（AFP）的检测，但是小肿瘤不易通过影像学发现，并且AFP的敏感性（39%～64%）较差。

图1　以肝硬化组为对照，GP73和AFP诊断PHC的ROC曲线

在我国多数原发性肝癌是由乙肝病毒感染后引起不同临床病理类型，如慢性乙肝等。肝癌早期确诊对提高患者的生存率有重要意义，临床上早期诊断肝癌主要以影像学和肿瘤标志物AFP为主，但PHC有不少病例表现为AFP阴性，且早期肝癌影像学缺乏典型表现，使PHC早期确诊愈加困难。

GP73 由美国学者Kladney［3］在2000年发现的位于高尔基体顺面膜囊上的跨膜糖蛋白，Ⅱ型高尔基体膜蛋白。GP73在多种人类组织的上皮细胞表达，在正常肝脏中，其存在于胆管上皮细胞，而肝细胞显示很少或没有信号正常表达或表达很少，在乙肝病毒（HBV）或腺病毒感染后，胆管细胞的表达无明显变化，而肝细胞呈高表达［4］。2005年有研究显示GP73在肝细胞癌患者中高水平表达在非肝癌患者中表达水平低，且对肝癌的诊断优于AFP［5］。贾红莲、冯志刚等［6-7］发现肝癌组织和癌旁组织中的GP73表达阳性率高于肝硬化肝组织和正常肝组织，GP73在肝癌组织中表达升高，可作为肝癌组标志物。高尔基体糖蛋白73（Golgi prolein 73，GP73）是一种与原发性肝癌相关的糖蛋白，并以良好的敏感性和特异性被认为是最有潜力的HCC标志物之一。由于HCC的发生是一个经过慢性乙型肝炎（CHB），肝硬化，HCC多阶段长期病毒感染的过程，并且以HBV相关HCC多阶段为研究对象的研究并不多见，所以本研究的目的是通过检测HBV相关的CHB、肝硬化、HCC患者血浆中的GP73水平和AFP含量，试图了解二者在上述疾病发生发展中的变化规律，从而探讨GP73和AFP对于HCC早期诊断和预后判断的价值［8］。

本研究结果显示肝癌组和肝硬化组AFP比较，P＞0.05，肝硬化患者因肝细胞变性坏死，肝内结缔组织再生，纤维组织弥漫性增生，导致AFP中重度增高，并有部分肝癌患者AFP轻度升高或不升高，AFP＜400 ng/ml的PHC患者易误、漏诊；肝癌组和肝硬化组GP73比较，P＜0.01，提示GP73能更好的区分这两类患者，GP73表达水平的变化可能与肝功能减退有关。肝硬化与慢性乙肝组，慢性乙肝组与健康对照组两两比较，P＜0.01，说明GP73在不同的肝病类型中表达不同，随着肝脏疾病的进展，GP73呈明显增加趋势，可以作为区分乙肝病毒感染肝脏后肝病不同阶段的参考标准。将PHC组GP73和AFP的阳性和阴性人数进行统计，经χ2检验，P＜0.05，说明这在针对肝癌诊断时GP73的诊断效果优于AFP。根据ROC曲线AUC判断，AFP的诊断价值低于GP73，因为GP73较高的灵敏性，可将其作为早期筛查肝细胞癌的肝脏肿瘤标志物，尽早发现疑似肝癌患者［9-10］。

综上所述，GP73作为一种诊断肝细胞癌的肿瘤标志物，灵敏度高，特异性不及AFP，可作为PHC阴性标记物，即GP73含量低可做为PHC排除依据；同时在AFP阴性或低水平表达而GP73升高的可疑患者，可加强对疑似患者的随访，进一步做影像学、病理学等相关方面的检查，以提高PHC早期诊断的准确性，为挽救患者生命赢得时间。

参考文献

［1］国家卫生和计划生育委员会统计信息中心. 中国卫生和计划生育统计年鉴［Z］. 2003.

［2］Marrero JA，Romano PR，Nikolaeva O，et al. GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma［J］. J Hepatol，2005，43（6）:1007-1012.

［3］Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al. GP73，a novel Golgilocalized protein upregulated by viral infection［J］. Gene，2000，249（1-2）:53-65.

［4］Kim HJ，Lv D，Zhang Y，et al. Golgi phosphoprotein 2 in physiology and in diseases［J］. Cell Biosci，2012，2（1）:31.

［5］叶佩灵，何欣欣，吴晓蔓. 原发性肝癌组织中GP73蛋白的表达［J］.广东医学，2014，35（2）: 234-236.

［6］贾红莲，黄彩云，宋君利，等. 血清AFP-L3、GP73检测联合CT扫描在肝细胞癌诊断中的价值［J］. 现代肿瘤医学，2015，23（1）:101-103.

［7］冯志刚，岑晓红，云俊木，等. GP73在酒精性肝病中的临床意义［J］.国际检验医学杂志，2015，36（15）:2214-2215，2217.

［8］刘秀红，赵一鸣，李宁，等. 血浆高尔基体糖蛋白73和血小板计数在不同阶段HBV相关肝病中的表达及意义［J］. 临床肝胆病杂志，2015，31（9）:1469-1472.

［9］张克钊. 血清GP73、AFP、Fer、CA199四种肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌诊断价值探讨［J］. 实验与检验医学，2015，33 （6）:776-777.

［10］江均昌，周林福. 高尔基体驻膜糖蛋白73的研究进展及其与肝癌等疾病的联系［J］. 浙江大学学报（医学版），2012，41（2）: 215-221.

【中图分类号】R575

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）08-0161-03

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2016.08.111

基金项目:新疆医科大学第五附属医院2014年院级课题项目，项目编号（WYF2014010）

作者单位:新疆医科大学第五附属医院检验科，新疆 乌鲁木齐 830011

The Value of GP73 in Different Types of Liver Disease

XUE Bing JING Boqiong XU Di Department of Clinical Laboratory，Fifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi Xinjiang 830011，China

【Abstract】