HPLC梯度洗脱法同时测定小儿暑感宁糖浆中的香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚及厚朴酚

沈 健，张诚贤（.湖州市中心医院，浙江 湖州 33000；.湖州市食品药品检验研究院，浙江 湖州 33000）

HPLC梯度洗脱法同时测定小儿暑感宁糖浆中的香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚及厚朴酚

沈 健1，张诚贤2
（1.湖州市中心医院，浙江 湖州 313000；2.湖州市食品药品检验研究院，浙江 湖州 313000）

目的：建立用高效液相色谱法（HPLC）同时测定小儿暑感宁糖浆中的香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚及厚朴酚含量的分析方法。方法：采用HPLC法，色谱柱：Eclipse XDB-Cl8柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A）-0.05%冰醋酸溶液（B），梯度洗脱；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 μL；香荆芥酚、麝香草酚检测波长为λ1= 274 nm，和厚朴酚、厚朴酚检测波长为λ2= 294 nm。结果：香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚及厚朴酚线性范围分别在6.35 ～ 127.00 μg·mL-1（r = 0.999 3）、4.74 ～ 94.80 μg·mL-1（r = 0.999 1）、4.35 ～ 87.00 μg·mL-1（r = 0.999 7）、5.19 ～ 103.80 μg·mL-1（r = 0.999 4）范围内线性关系良好。精密度、重现性实验中各组分RSD值均小于2.0%；4种成分的平均加样回收率（n = 9）及RSD分别为98.18%（1.15%）、96.94% （1.44%）、99.03%（0.92%）、97.24%（0.79%）。结论：本文建立的HPLC法简便、准确、重复性好，可同时测定小儿暑感宁糖浆中的香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚及厚朴酚含量，为该制剂的质量控制提供理论参考。

高效液相色谱法；小儿暑感宁糖浆；香荆芥酚；麝香草酚；和厚朴酚；厚朴酚

小儿暑感宁糖浆是由香薷、厚朴、佩兰、扁豆花、黄芩、黄连、青蒿等十三种药材组成，为中药复方制剂，具有清暑解表、退热的功效，用于小儿暑季外感发烧、高热不退、头痛少汗、咽喉肿痛、食欲不振、二便不畅的治疗。该制剂收载于卫生部药品标准中药成方制剂第七册，原小儿暑感宁糖浆质量标准对性状、相对密度作了规定［1］，鉴别项仅对部分药材作了定性研究，仅以此指标已不能完全有效控制小儿暑感宁糖浆的质量。另外，对该制剂中的香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚和厚朴酚四种成分同时定量研究也未见相关报道，本文采用高效液相梯度洗脱法对该制剂中香薷药材中的香荆芥酚、麝香草酚，厚朴药材中的和厚朴酚、厚朴酚进行同时测定，为有效评价小儿暑感宁糖浆的质量控制提供理论参考。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），2487型紫外检测器；KQ-500DE型医用超声波清洗机（北京市医疗设备二厂）；ESJ182-4十万分之一电子天平（上海力衡仪器仪表有限公司）。

香荆芥酚对照品（含量以99.7%计，批号111691-201103），麝香草酚对照品（含量以99.9%计，批号100508-200902），厚朴酚（含量以98.8%计，批号110729-201513），和厚朴酚对照品（含量以100.0%计，批号110730-201313）均由中国食品药品检定研究院提供；小儿暑感宁糖浆（规格：100 mL，批号为2015001、2015007、2015022）均购于太极集团四川南充制药有限公司；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性实验

Eclipse XDB-Cl8色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A）-0.05%冰醋酸溶液（B），梯度洗脱（0 ～ 11 min，48.0%A；11 ～ 26 min，48.0%A→66.0%A；26 ～ 41 min，66.0%A→78.0%A；41 ～ 50 min，78.0%A→48.0%A）［2-8］；检测波长（0 ～26 min，λ1= 274 nm［9］，26 ～ 50 min，λ2= 294 nm［10-12］）；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 μL。在此系统条件下各组分分离效果良好，理论塔板数不低于3500，相邻峰之间分离度均大于1.5。

2.2溶液的配制

2.2.1混合对照品溶液的制备 分别精密称取香荆芥酚对照品12.70 mg、麝香草酚对照品9.48 mg、和厚朴酚对照品8.70 mg、厚朴酚对照品10.38 mg，分别加甲醇溶解并稀释，制成香荆芥酚浓度为0.635 mg·mL-1、麝香草酚浓度为0.474 mg·mL-1、和厚朴酚浓度为0.435 mg·mL-1、厚朴酚浓度为0.519 mg·mL-1的单一成分对照品储备液。分别吸取上述各对照品储备液1.0、2.5、4.0、5.0 mL，置于50 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，制成香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚、厚朴酚分别为0.012 7 mg·mL-1、0.023 7 mg·mL-1、0.034 8 mg·mL-1、0.051 9 mg·mL-1的对照品混合溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 精密量取小儿暑感宁糖浆4.0 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，密塞，超声处理5 min，取出，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备 按照卫生部药品标准中药成方制剂第七册WS3-B-1282-93小儿暑感宁糖浆质量标准中规定的处方工艺，分别制备香薷空白样品和厚朴空白样品。制备后的空白样品按照“2.2.2”项下方法，分别制备香薷空白溶液和厚朴空白溶液。

2.3专属性实验

精密量取所配制供试品溶液、混合对照品溶液、香薷空白溶液和厚朴空白溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图，出峰顺序依次为：香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚、厚朴酚，混合对照品溶液、供试品溶液测得各组分保留时间基本一致，而香薷空白溶液色谱图未见香荆芥酚和麝香草酚色谱吸收峰；厚朴空白溶液色谱图未见和厚朴酚及厚朴酚吸收峰，表明处方中其他成分对所测成分无干扰。详见图1。

图1　HPLC色谱图A -对照品，B -供试品，C -香薷空白溶液，D -厚朴空白溶液；1 -香荆芥酚，2 -麝香草酚，3 -和厚朴酚，4 -厚朴酚Fig 1 HPLC chromatogramsA - reference substance， B - sample， C - moslae herba negative control， D - magnoliae officinalis cortex negative control； 1 - carvacrol，2 - thymol， 3 - honokiol， 4 - magnolol

2.4线性关系的考察

分别精密量取对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度搅匀，制成对照品混合溶液。以峰面积值（y）为纵坐标，对照品质量浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线进行回归计算，回归方程分别为香荆芥酚：y = 4.995 7×105x + 326.83；麝香草酚：y = 9.041 2×105x + 217.5；和厚朴酚：y = 1.307 6×106x - 435.2；厚朴酚：y = 1.727 1×106x + 572.9。香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚及厚朴酚分别在6.35 ～ 127.00 μg·mL-1（r = 0.999 3）、4.74 ～ 94.80 μg·mL-1（r = 0.999 1）、4.35 ～ 87.00 μg·mL-1（r = 0.999 7）、5.19 ～ 103.80 μg·mL-1（r = 0.999 4）范围内，线性关系良好。

2.5精密度实验

精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液20 μL，按“2.1”项下色谱条件测定，重复进样6次，记录峰面积，香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚、厚朴酚峰面积的RSD值分别为0.78%、0.86%、1.02%、0.99%。

2.6重复性实验

分别精密量取同一批号样品6份，按供试品溶液制备方法进行测定，香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚、厚朴酚峰面积的RSD值分别为0.96%、0.83%、1.13%、0.75%，表明该方法重复性良好。

2.7稳定性实验

取同一批小儿暑感宁糖浆的供试品溶液，按供试品溶液制备方法进行测定，分别在0、2、4、8、12、24 h注入液相色谱仪进行测定，计算香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚、厚朴酚的RSD值，分别为0.88%、1.09%、0.97%、0.68%，结果表明供试品溶液24 h内稳定性较好。

2.8加样回收率实验

取适量已知含量的小儿暑感宁糖浆（香荆芥酚为0.173 mg·mL-1、麝香草酚为0.288 mg·mL-1、和厚朴酚为0.429 mg·mL-1、厚朴酚为0.641 mg·mL-1）样品6份，精密量取2.0 mL，置50 mL容量瓶中，精密加入混合对照品溶液20 mL、25 mL、30 mL各3份，用甲醇稀释至刻度，按“2.2.2”项下方法操作，摇匀，取续滤液，过滤，制得加样供试品溶液。按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算各组分回收率，详见表1。

2.9样品测定

按“2.2.2”项下方法，取3个批号的小儿暑感宁糖浆样品，制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚、厚朴酚含量，详见表2。

表2　样品含量测定结果. mg·mL-1，n = 3Tab 2 Content determination results of sample. mg·mL-1， n = 3

表1　香荆芥酚、麝香草酚、和厚朴酚及厚朴酚的加样回收率结果Tab 1 Recovery test results of carvacrol， thymol， honokiol and magnolol

3 讨论

3.1检测条件的选择及优化

笔者分别采用甲醇（A）-水（B）、甲醇（A）-0.05%冰醋酸（B）、乙腈（A）-0.05%冰醋酸（B）为流动相进行实验，对比分离效果，结果发现以甲醇（A）-0.05%冰醋酸（B）为流动相，在不同品牌的色谱柱上均获得较好的分离，最终确定甲醇（A）-0.05%冰醋酸（B）为流动相进行梯度洗脱。

3.2HPLC同时测定小儿暑感宁糖浆4种成分含量的方法

小儿暑感宁糖浆是由多种中药组成的复方制剂，原部颁标准卫生部药品标准中药成方制剂第七册的质量标准，只对部分药材作了定性研究，本实验通过对测定方法的考察，建立了高重复性、快速的小儿暑感宁糖浆4种成分含量的测定方法，且线性、精密度、重复性和回收率均良好，洗脱时间仅为50 min同时测定小儿暑感宁糖浆4种成分，提高了工作效率，也降低了测定成本。本研究采用HPLC波长切换联合梯度洗脱法，从而实现对4个成分的同时测定，为小儿暑感宁糖浆的质量控制填补了方法手段，为控制小儿暑感宁糖浆质量水平和药品标准的继续提高提供了理论和数据支持。

［1］ 国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第七册（WS3-B-1282-93）［S］.1993：13.

［2］ 刘颖新，刘利利，孔兴欣，等.HPLC法测定香薷散不同煎液中香荆芥酚和麝香草酚的含量及体外抗菌作用比较［J］.药物分析杂志，2014，34（6）：1006-1010.

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［4］ 刘存芳.反相高效液相色谱法测定厚朴树叶中的厚朴酚［J］.江苏农业科学，2015，43（8）：311-313.

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［7］ 谢婷.HPLC法测定复方香薷水中麝香草酚、香荆芥酚、木香烃内酯、去氢木香内酯和迷迭香酸［J］.中成药，2014，36（6）：1217-1222.

［8］ 孙丽娟，刘红兵，许汉林，等.湖北产牛至药材中香荆芥酚和麝香草酚的含量测定［J］.中药材，2005，28（7）：562-563.

［9］ 李鹏，陈根顺，徐丽芳，等.HPLC法测定香薷中4种成分的含量［J］.中药材，2009，32（8）：1236-1237.

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Simultaneous determination of carvacrol， thymol， honokiol and magnolol in Xiao'er shuganning syrup by HPLC with gradient elution

SHEN Jian1， ZHANG Cheng-xian2
（1. Huzhou Central Hospital， Huzhou 313000， China； 2. Huzhou Institute for Food and Drug Control， Huzhou 313000， China）

Objective: To establish the HPLC method for simultaneous determination of carvacrol， thymol， honokiol and magnolol in Xiao'er shuganning syrup. Methods: The Eclipse XDB-Cl8column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm） was used， with a mobile phase consisted of methanol （mobile phase A） and 0.05% glacial acetic acid solution （mobile phase B） for gradient elution. The column temperature was 30 ℃. The flow rate was 1.0 mL·min-1. The injection volume was 20 μL. Carvacrol and thymol were detected at 274 nm， honokiol and magnolol were detected at 294 nm. Results: Carvacrol， thymol， honokiol and magnolol had good linearities at 6.35 - 127.00 μg·mL-1（r = 0.999 3）， 4.74 - 94.80 μg·mL-1（r = 0.999 1）， 4.35 - 87.00 μg·mL-1（r = 0.999 7 ）， 5.19 - 103.80 μg·mL-1（r = 0.999 4）， respectively. In precision and reproducibility test， the RSD results of 4 components were less than 2.0%； the average recovery and their RSD results were 98.18% （1.15%）， 96.94% （1.44%）， 99.03% （0.92%）， 97.24% （0.79%）， respectively. Conclusion: The HPLC method is simple and reliable with a good repeatability， which can simultaneously determine the contents of carvacrol，thymol， honokiol and magnolol in Xiao'er shuganning syrup. This method can be used to evaluate the quality of this preparation.

HPLC； Xiao'er shuganning syrup； Carvacrol； Thymol； Honokiol； Magnolol

R917

A

1672 - 8157（2016）04 - 0217 - 04

沈健，男，主管药师，主要从事医院药学研究工作。E-mail：shenjian1929@163.com

2016-03-07

2016-05-25）