奥拉西坦对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响

杨宏艳　韩云峰

(齐齐哈尔医学院，黑龙江　齐齐哈尔　161006)



奥拉西坦对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响

杨宏艳韩云峰

(齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔161006)

目的观察奥拉西坦对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆的改善作用。方法双侧颈总动脉结扎制作大鼠VD模型，采用奥拉西坦连续治疗4 w，通过Morris水迷宫实验和避暗实验，观察奥拉西坦对VD的治疗作用。结果奥拉西坦可显著减少水迷宫实验中大鼠到达平台的潜伏期(P<0.01)，缩短游泳路程(P<0.05)，延长避暗实验中大鼠进入暗室的潜伏期，减少错误次数。结论奥拉西坦对VD大鼠的认知功能损害具有明显改善作用。

奥拉西坦；血管性痴呆；学习记忆

迄今为止，人类还未找到治疗血管性痴呆(VD)行之有效的方法，防治手段十分有限。慢性脑缺血是研究VD发病机制的重要组成部分，被认为是VD、阿尔茨海默病(AD)等神经系统变性疾病中的一个共同病理过程，可导致持久性进展性认知损伤。奥拉西坦(OX)是一种合成的羟基氨基丁酸(GABOB)环状衍生物，属促智药〔1〕。临床研究显示OX对VD有较好的疗效〔2～5〕。目前国内外学者对OX抗VD作用的研究多限于临床研究。本实验旨在探讨OX对双侧颈总动脉永久性结扎所致VD大鼠的保护作用。

1　材料与方法

1.1材料①实验动物：雄性Wistar大鼠，体重220～240 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。②药品：OX纯度>99%，由重庆东泽医药科技发展有限公司提供。临用前用生理盐水配制。③仪器:Morris水迷宫，避暗箱(中国医学科学院药物研究所研制)。

1.2动物分组与给药大鼠随机分为四组：对照组、双侧颈总动脉结扎模型组(BCCAO)，OX 30 mg/kg给药组(OX30)和OX 100 mg/kg给药组(OX100)，除模型组剩余10只大鼠(3只在实验过程中死亡)外，其余各组均为13只。除对照组外，其余组均给予手术结扎双侧颈总动脉。OX给药组自大鼠术后第二天连续口服给药，4 w后进行水迷宫和避暗实验。

1.3Morris水迷宫实验水迷宫实验连续6 d，前5 d每只大鼠每天接受2次训练，分别从两个不同入水点开始，两次训练间隔1 min，记录潜伏期(找到平台的时间)、游泳路程和游泳速度。如果大鼠在60 s内未找到平台，则潜伏期以60 s计算。无论在60 s内找到平台与否，都让大鼠在平台上停留30 s。最后1 d训练结束后进行探索实验，移去平台，大鼠自由游泳60 s寻找平台，记录大鼠第一次穿过平台所在位置的时间和穿越次数。

1.4避暗实验实验分为3 d，第一天将大鼠放入反应箱中自由活动，第二天训练时暗室底部铜栅通以36 V、50 Hz交流电，将大鼠背对洞口放入明室，大鼠进入暗室即受电击。训练时潜伏期大于180 s者弃去不用。第三天即24 h后再次将大鼠放入明室，记录第1次进入暗室的时间(潜伏期)和5 min内进入次数(错误次数)。如果5 min大鼠仍未进入暗室，错误次数记为0次，潜伏期记为300 s。

1.5统计学方法采用SPSS13.0统计软件One-way、Two-way ANOVA分析及最小显著差异(LSD)检验，不齐用Welch检验。

2　结　果

2.1Morris水迷宫实验如表1、表2所示，与对照组相比较，双侧颈总动脉结扎大鼠找到平台的潜伏期和游泳路程均显著延长(P<0.001)，提示大鼠学习记忆功能明显损伤。与模型组相比较，OX在100 mg/kg剂量时显著缩短大鼠找到平台的潜伏期和游泳路程(P<0.05)，各组间大鼠游泳速度没有明显差异。提示奥拉西坦具有改善低灌注大鼠学习记忆缺失的作用。

表1　奥拉西坦对VD大鼠到达平台时间的影响±s,s)

与对照组比较：1)P<0.001；与模型组比较：2)P<0.01

2.2避暗实验电击后第2天，与对照组相比，模型组大鼠进入暗盒所用潜伏期有所缩短(P<0.05)，错误次数增加(P<0.05)。OX可以延长潜伏期，减少错误次数，但因个体差异较大，没有达到统计学差异(P>0.05)。见表3。

表2　奥拉西坦对VD大鼠到达平台游泳路程的影响±s,cm)

与对照组比较：1)P<0.001;与模型组比较：2)P<0.05

表3　奥拉西坦对双侧颈总动脉结扎大鼠的学习记忆的影响(避暗实验)±s)

与对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01

3　讨　论

学习记忆障碍是人类VD早发症状之一，慢性脑灌注不足是VD的常见病因之一。双侧颈总动脉永久性结扎是常用的脑部血流低灌注模型。双侧颈总动脉结扎后，由于椎基底动脉系统代偿颈内动脉供血的能力有限，导致脑部供血低于正常水平，从而形成低灌注状态，引起学习记忆功能明显损伤，是现在公认的拟“血管性痴呆”的动物模型。Morris水迷宫是检测实验动物学习记忆能力的重要指标。本实验结果表明模型组动物，找到平台的潜伏期和游泳路程明显延长，出现明显的空间学习记忆障碍，提示模型制备成功。本研究显示OX在较大剂量100 mg/kg可显著改善低灌注大鼠的学习记忆功能。文献报道OX促进磷酯酰胆碱和磷酯酰乙醇胺的合成，提高大脑中ATP/ADP的比值，使大脑中蛋白质和核酸的合成增加〔6〕，从而改善VD患者的学习记忆功能。OX还可以增加小鼠海马部位K+介导的乙酰胆碱的释放〔7〕，升高细胞膜上的PKC〔8〕，提高小鼠的空间认知能力。OX增加大鼠下丘脑神经元钠钾电流，从而通过增加神经元动作电位(AP)的幅值及传导速度而改善脑功能〔9〕。奥拉西坦通过上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白〔10〕，降低Caspcase-3蛋白的表达〔11〕，抑制细胞凋亡，减轻神经元的缺血损伤，减少脑梗死老年患者血清中S100β蛋白和肿瘤坏死因子-α含量〔12〕，起到脑保护的作用。但OX改善VD大鼠学习记忆功能的其他机制有待于进一步探讨。

1刘治军，胡欣.促智药奥拉西坦的临床和基础研究〔J〕.中华神经外科疾病研究杂志，2005；4(3)：286-8.

2Malykh AG，Sadaie MR.Piracetam and piracetam-like drugs：from basic science to novel clinical applications to CNS disorders〔J〕.Drugs，2010；70(3)：287-312.

3董昕.奥拉西坦联合尼莫地平治疗血管性痴呆120例〔J〕.中国老年学杂志，2013；33(19)：4853-4.

4海力比努尔，王荫华，赵发国.奥拉西坦与吡拉西坦治疗血管性痴呆的随机双盲对照研究〔J〕.中国新药与临床杂志，2003；22(17)：647-50.

5王红梅，张渊.奥拉西坦治疗血管性痴呆的疗效与安全性的系统评价〔J〕.中国药房，2013；48(24)：4581-5.

6Gabryel B，Trzeciak HI，Pudelko A，etal.Influence of piracetam and oxiracetam on the content of high-energy phosphates and morphometry of astrocytes in vitro〔J〕.Pol J Pharmacol，1999；51(6)：485-95.

7Hlinak Z，Krejci I.Oxiracetam prevented the scopolamine but not the diazepam induced memory deficits in mice〔J〕.Behav Brain Res，2002；133(2)：395-9.

8Fordyce DE，Clark VJ，Paylor R，etal.Enhancement of hippocampally-mediated learning and protein kinase C activity by oxiracetam in learning impaired DBA/2 mice〔J〕.Brain Res，1995；672(1)：170-6.

9穆海川，刘松青，叶亚平.奥拉西坦对大鼠下丘脑神经元钠钾通道电流的作用〔J〕.中国药业，2007；16(1)：10-1.

10赵玉娇，马风杰，李芳，等.奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2及Bax表达的影响〔J〕.辽宁医学院学报，2014；35(2)：1-2，26，105.

11丁绪平，马风杰，张学敏，等.奥拉西坦对脑出血大鼠的脑保护作用及对Caspase-3表达的影响〔J〕.现代中西医结合杂志，2013；22(4)：363-4，374.

12柳青.奥拉西坦对脑梗死老年患者血清中S100β蛋白和肿瘤坏死因子-α含量的影响〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(6)：1676-7.

〔2014-11-03修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

齐齐哈尔医学院科研基金资助项目(QY2013B-01)

韩云峰(1977-)，男，讲师，硕士，主要从事神经药理研究。

杨宏艳(1979-)，女，讲师，博士，主要从事神经药理研究。

R743.33

A

1005-9202(2016)16-3923-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.16.024