糖脉康干预Ⅱ型糖尿病气阴两虚夹瘀证大鼠对肾脏功能的影响

陈　群　苏傲蕾　马加贵



糖脉康干预Ⅱ型糖尿病气阴两虚夹瘀证大鼠对肾脏功能的影响

陈群1苏傲蕾2马加贵3△

目的使用中药糖脉康颗粒对Ⅱ型糖尿病气阴两虚夹瘀证大鼠进行干预，研究糖脉康颗粒对模型大鼠肾脏功能的影响。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成两组，空白组10只，造模组20只，模型组通过高脂喂养配合低剂量链脲佐菌素复制Ⅱ型糖尿病大鼠模型，随后利用证候演变规律和低温诱导的方法，筛选出具有气阴两虚夹瘀证特征的Ⅱ型糖尿病大鼠18只，将其中9只模型大鼠使用中药糖脉康进行干预，检测大鼠血清肌酐、尿素氮、尿蛋白等指标，判断糖脉康对大鼠肾脏功能的影响。结果糖脉康干预模型大鼠后，大鼠肾功能指标肌酐、尿素氮、尿蛋白均有不同程度下降，且糖脉康组尿蛋白较模型组下降明显，有统计学差异(P<0.01)。结论糖脉康颗粒对Ⅱ型糖尿病气阴两虚夹瘀证大鼠肾功能有改善，其中尿蛋白改善明显。

Ⅱ型糖尿病；糖脉康；气阴两虚证；肾功能

Ⅱ型糖尿病又称非胰岛素依赖糖尿病(noninsulin-dependent diabetes mellitus，NIDDM)，约占糖尿病患者总人数的90%以上。文献回顾发现气阴两虚证型处于Ⅱ型糖尿病中所有证型的首要位置[1～4]，同时血瘀证贯穿糖尿病整个病程在中医界也已达成共识。因此在推进中医药现代化研究进程中，构建一种符合临床实际的病证结合动物模型，对于中医药防治糖尿病具有十分重要的意义。本研究通过高脂喂养合并小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法成功复制Ⅱ型糖尿病大鼠后，依据糖尿病大鼠证候演变规律[5, 6]，利用低温调控手段，提前诱导出大鼠血瘀证候，筛选出具有气阴两虚夹瘀证的Ⅱ型糖尿病大鼠动物模型。使用临床常用经典方药糖脉康颗粒，从气阴两虚夹瘀证角度对模型大鼠进行药物干预。判断中药干预对于模型大鼠早期肾脏功能的影响，为中医药防治糖尿病微血管并发症提供理论支持和实践基础。

1　材料与仪器

1.1实验动物健康雄性SPF级SD大鼠30只，体质量160～180g，由湖南史莱克实验动物公司提供。高脂饲料由广西中医研究院代加工(猪油10%，白糖20%，蛋黄粉7%，奶粉3%，胆固醇1%，猪胆盐0.25%)，普通饲料由上海史莱克实验动物公司提供。大鼠由广西中医药大学实验动物中心饲养，室温16℃～25℃，湿度50%～60%。

1.2试剂及药物链脲佐菌素(Streptozotocin， STZ)(美国sigma公司,101003791) ；血清胰岛素ELISA试剂盒(瑞典Mercodia公司,22218)；总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(长春汇力生物制品有限公司，2013012，2013008，2013009，2013044)；糖脉康颗粒(四川升和药业股份有限公司，130107)。

1.3主要仪器电子血糖分析仪，美国罗氏仪器公司；全自动生化仪；全波长酶标仪；紫外分光光度计；精密恒温水浴锅等。

1.4方法

1.4.1动物分组及处理适应性喂养1周后，按体重随机分为空白组和造模组。其中空白组10只，造模组20只，空白组基础饲料喂养，造模组高脂饲料喂养，均连续6周。6周后，禁食、不禁水12 h。造模组参照35 mg/kg腹腔注射1% STZ溶液(冰浴配置，现配现用)；空白组腹腔注射同体积0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(PH 4.2)。72 h后大鼠尾静脉取血，测随机血糖高于16.7 mmol/L即认为糖尿病造模成功，如未达到标准，隔日再参照30 mg/kg标准腹腔注射1% STZ溶液。随后将饲养温度调低到16℃，稳定4周。饲养第11周后，参考《中医诊断学》和自制气阴两虚夹瘀证Ⅱ型糖尿病积分表，剔除不符合条件的模型老鼠，共筛选得到18只符合气阴两虚夹瘀证的Ⅱ型糖尿病大鼠，将造模成功的大鼠随机分成2组，其中模型组9只、糖脉康组9只。糖脉康组参照人体正常给药5倍剂量灌胃给药，空白组和模型组给予换算的同体积生理盐水，连续给药3周。

1.4.2组织取材所有动物饲养14周后，处死，腹主动脉取血，分离血清。

1.4.3指标检测血糖、血清胰岛素浓度(FINS)、血清肌酐、尿素氮、尿蛋白(24h内尿液中蛋白含量)、病理切片等。

1.4.4统计学处理采用SPSS 19.0统计软件进行统计学处理，数据采用方差分析和多重比较，P<0.05认为有统计学意义。

2　结果

2.1血糖及血清胰岛素比较药物干预后，糖脉康组大鼠血糖与模型组比较有下降，但无显著性差异；糖脉康组胰岛素含量、胰岛素抵抗指数低于模型组，均有显著性差异(P<0.01)。见表1。

表1　药物干预后各组大鼠血糖、胰岛素含量　±s)

注： 与空白组比较1)P<0.01;与模型组比较2)P<0.01

2.2血脂四项比较喂养14 W后，模型组大鼠血脂四项指标TC、TG、HDL-C、LDL-C均高于空白组，具有统计学差异(P<0.01)。糖脉康组TC、HDL-C、LDL-C含量高于空白组，具有统计学差异(P<0.01)。糖脉康组TC、HDL-C、LDL-C含量均低于模型组，具有统计学差异(P<0.01)。见表2。

表2　中药干预后各组大鼠血脂四项变化情况　±s)

注：与空白组比较1)P<0.01；与模型组比较2)P<0.01

2.3肌酐、尿素氮、尿蛋白比较药物干预后模型组大鼠肌酐、尿素氮、尿蛋白与空白组比较均有统计学差异(P<0.01)。糖脉康组尿蛋白与模型组比较有下降，具有统计学差异(P<0.01)，肌酐、尿素氮无统计学差异。见表3。

表3　药物干预后大鼠肌酐、尿素氮、尿蛋白含量变化情况　±s)

注：与空白组比较1)P<0.01；与模型组比较2)P<0.01

3　讨论

“消渴”一词首见于隋末唐初甄立言所著《古今录验方》，作为糖尿病的中医病名为现代医者熟知。近年研究认为，消渴病所表现出“三多一少”症状与糖尿病极其相似，唐代孙思邈《备急千金要方·消渴第》载论6篇、方53首，以滋阴泄热、益气养阴法用之。本实验在药物选择上使用糖脉康颗粒，其主要成分为黄芪、地黄、赤芍、丹参、葛根、桑叶、淫羊藿等，可以养阴清热，活血化瘀，益气固肾，临床主要用于治疗气阴两虚血瘀所致的Ⅱ型糖尿病症及并发症。

糖尿病肾病(DN)是糖尿病微血管并发症之一，已成为终末期肾脏疾病(ESRD)的首位病因，成为糖尿病的严重并发症和主要死亡原因[7]，糖尿病慢性并发症资料显示，糖尿病肾病位居第二，仅次于糖尿病眼病[8, 9]。中医证候学研究发现，糖尿病肾病以气虚、阳虚、阴虚为主要临床表现，虚实杂证为主，后期又以阳虚证为主要表现，标实证候的痰湿和血瘀贯穿整个疾病发展过程[10, 11]。而另外一些学者研究则认为，DN发展的三期阶段虚证都主要以气阴两虚为主，实证以血瘀为主[3]，气阴两虚夹瘀证在糖尿病肾病早、中期证型分布具有广泛性[8, 12]。因此利用不同中药对病证结合动物模型进行干预来判断中药对模型的影响，无论是从对病证的影响还是从药物的作用机制都具有前瞻性的探索意义 。

临床研究表明血清肌酐、尿素氮、尿蛋白可从一定程度上反应肾小球滤过功能的损害，能早期的发现肾功能的损害[13]。实验显示糖脉康组肌酐、尿素氮有不同程度下降、尿蛋白下降明显并具有统计学意义(P<0.01)。糖脉康对Ⅱ型糖尿病气阴两虚夹瘀证大鼠所导致的肾功能损伤有改善作用。实验结果还显示短期内使用中药并不能使大鼠血糖有明显的下降。中医理论指导下，使用中药对糖尿病大鼠模型的胰岛素、胰岛抵抗指数及肾脏功能有改善作用，从侧面反应了模型的可靠性及在中医理论指导下使用中药的合理性。

当然实验本身还存在的一些不足和问题，如给药时间持续的长短，肾脏指标是否会继续改变，模型的稳定时间和给药时间之间的平衡等，这些都需要我们去进一步克服和解决，仅以此为契机对中医病证结合动物模型的研究进行尝试和探讨。

[1]沈秀辉.62例2型糖尿病患者的中医辨证分型及相关分析[J].中国中医药现代远程教育，2011，9(4)：166-168.

[2]徐成兴，叶伟成，胡蕴刚.120例2型糖尿病患者的中医辨证分型及相关分析[J].上海中医药杂志，2007，41(6)： 34-36.

[3]王亚林，严惠芳，张雪然.351例糖尿病肾病中医临床证型调查分析[A].福州：中国中西医结合学会诊断专业委员会会，2009.

[4]谭倩.1565例2型糖尿病患者中医病证分布规律研究[D].北京：北京中医药大学， 2010.

[5]吴晏，韩静，黄黎明，等.2型糖尿病病证结合大鼠模型的证候演变与实验室指标变化的相关性[J].中华中医药杂志，2013，28(9)：2726-2729.

[6]唐年亚，姚斌.实验性2型糖尿病大鼠病证结合模型的建立[J]. 医学理论与实践，2012，25(13)：1539-1540.

[7]Ritz E， Keller C K， Bergis K H，etal. Renal involvement in type II diabetes[J]. Current opinion in nephrology and hypertension，1994，3(2)：137-144.

[8]曲晓璐，陈大舜，姚欣艳，等.1718例2型糖尿病患者糖尿病肾病发病率及其中医证型分布特点[J].中国中西医结合肾病杂志，2003，4(12)：713-715.

[9]刘宝恩.糖尿病阴阳两虚证、气阴两虚证与其慢性并发症的关系[J].河南中医，2014，34(6)：1129-1130.

[10]牟新，周旦阳，赵进喜. 265例糖尿病肾病肾功能不全患者中医证候学研究[J].新中医，2007，39(5)：84-85，88.

[11]曲波.中医辨治糖尿病肾病[J].中医学报，2012，27(8)：1002-1003.

[12]彭国平，胡锡元，张鹏，等. 糖尿病肾病生化指标与中医辨证分型的相关性研究[J].辽宁中医杂志，2013，40(3)： 406-408.

[13]王福党，张宇，张弢.四项生化指标在2型糖尿病肾病早期诊断中的应用价值[J].中国误诊学杂志，2008，8(18)： 4352-4353.

Effect of Tangmaikang on the Kidney Function in TypeⅡDiabetic Rats of the Deficiency of both Qi and Yin with Blood Stasis Syndrome

CHEN Qun1SU Aolei2MA Jiagui1△

(1. Department of Pharmacy, Beijing Aviation General Hospital, Beijing 100012, China；2. Basic Medical School, Guangxi Medical College, Guangxi, Nanning 530021, China；3. ICU, Beijing Aviation General Hospital, Beijing 100012, China)

ObjectiveTo investigate the changes in the characteristics of the renal function in type Ⅱ diabetic rats with the deficiency of both qi and yin with blood stasis syndrome based on taking the Tangmaikang. Methods30 male SD rats were randomly divided into two blank control group of 10 rats and model group of 20 rats. The rates in the model group were fed with high fat diet and intraperitoneal injected of low-dose streptozotocin. 18 rats with type Ⅱ diabetic rats model with the deficiency of both qi and yin and with blood stasis syndrome were selected, and Tangmaikang was used to treat the 9 rats to find out whether the syndrome has improved, in order to determine the changes in the characteristics (including creatinine, urea nitrogen, urinary protein) of the renal function in type Ⅱ diabetic rats with the deficiency of both qi and yin with blood stasis syndrome. ResultsAfter drug intervention, renal function indexes including creatinine, urea nitrogen and urinary protein had been improved in model group. There was statistically difference between the two groups on urinary protein (P<0.01). ConclusionTangmaikang can improve the renal function in type Ⅱ diabetic rats with the deficiency of both qi and yin with blood stasis syndrome, and urinary protein was significantly improved

Type Ⅱ diabetes; Tangmaikang; Deficiency of both qi and yin; Renal function

1.航空总医院药学部(北京100012)；2.广西卫生职业技术学院医学基础部实训中心(南宁530023)；3.航空总医院重症监护室(ICU)(北京100012)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.20.020

1003-8914(2016)-20-2951-03

�艳婷

2016-07-05)