云南省主栽核桃品种内种皮中多酚的检测分析*

耿树香，宁德鲁，李勇杰，陈海云，张艳丽，肖良俊

(1.云南省林业科学院，云南　昆明 650201；2.云南省木本油料工程技术研究中心，云南　昆明 650201)



云南省主栽核桃品种内种皮中多酚的检测分析*

耿树香1,2，宁德鲁1,2，李勇杰1,2，陈海云1,2，张艳丽1,2，肖良俊1,2

(1.云南省林业科学院，云南昆明 650201；2.云南省木本油料工程技术研究中心，云南昆明 650201)

以云南主栽核桃内种皮为材料，采用HPLC对核桃仁种皮中的多酚类物质进行分析研究。结果表明，检测到酚酸类物质含量较高的有两种(没食子酸与绿原酸)，其中没食子酸含量最低为4.06μg/g，最高含量为395.73μg/g，差异较显著；绿原酸含量最低为1.02μg/g，最高含量为464.09μg/g，差异较显著。黄酮类物质中的槲皮素含量最低为0.01μg/g，最高含量为10.13μg/g，差异也较显著。其他的多酚类物质较少或近没有。

核桃；内种皮；多酚；高压液相色谱

核桃(Juglansregia)除了含有丰富的不饱和脂肪酸、优质蛋白质和少量的碳水化合物外，还含有丰富的具生理活性的多酚类物质，可对人体起积极的抗氧化作用[1～4]。许多黄酮、多酚类化合物具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗动脉粥样硬化、抑菌、降血糖、降血脂、抗衰老、抗辐射、改善血液循环、提高免疫力、降血压、防止肥胖、改善记忆等多方面的功效[5～6]，是近年研发的热点。酚类化合物具有涩味，不同品种的核桃仁的色泽及苦涩味不同，表明其多酚和黄酮含量不同[7～8]。核桃仁多酚和黄酮主要集中在种皮[9]，多酚以没食子酸含量最高，黄酮则以芦丁含量最高[10]。

核桃内种皮(Walnut Kernel Pellicle)为包裹在核仁表面的一层薄膜，鲜核桃内种皮呈黄色或浅黄色，干制后发生一定程度的褐变。在核桃加工产业内种皮常被当作废弃物处理。如在核桃乳加工中，为了防止蛋白质沉淀，首要步骤便是去除内种皮。但许多研究已表明，核桃内种皮中含有丰富的多酚类物质。与熟知的茶多酚、葡萄籽多酚类似，内种皮多酚也具有众多的营养保健功能，包括清除人体自由基、抗衰老、抑制肿瘤增生等。核桃内种皮可以用来泡水喝，可以缓解身体疲劳，保护血管的健康，增强肠胃的蠕动能力，治疗便秘。微波萃取具有用时短的特点，能缩短提取时间。核桃多酚类物质主要集中于内种皮，是核桃仁产生收敛性的原因。本文研究云南主栽的核桃品种内种皮多酚单体成分的差异，为云南富含多酚核桃品种的研发提供理论依据。

1　材料与方法

1.1材料及试剂

材料核桃供试材料于2015年8月15日至9月30日采自云南23个核桃主栽区。具体采样点见表1。所采鲜样直接手工剥皮，剥好的内种皮自然晾干后备用。

试剂甲醇、甲酸及磷酸为分析纯试剂；没食子酸、绿原酸、槲皮素为国产色谱纯标准品。

表1　供试核桃样品Tab.1　Supplied walnut sample for test

1.2实验方法

1.2.1核桃内种皮多酚物质的提取

精确称取0.1g左右的烘干样品，0～4℃冰浴磨碎，加入10mL甲醇超声提取15min，然后摇床12h，提取液离心，残渣加入10mL甲醇重复提取2次合并上清液，过滤，吹氮，复溶至10mL取1mL高速离心，待液相色谱分析。

1.2.2核桃内种皮多酚物质的HPLC色谱分析条件

核桃仁包衣中多酚单体没食子酸、绿原酸、槲皮素分析采用高效液相色谱法。样品预处理：吸取1mL提取液于1 000r/min离心10min，用0.22μm滤膜超滤机上过滤后备用。标准溶液的配制：分别称取不同量的没食子酸、绿原酸、槲皮素用甲醇定容至5mL，得各单标溶液。

HPLC条件Water XBridgeTMAmide 色谱柱(46mm×150mm，3.5μm)；流动相为70%乙醇，等梯度洗脱20min；流速1mL/min，柱温25℃，检测波长280nm。

没食子酸、绿原酸液相条件Agilent zorbax SB-Aq(4.6mm×250mm，5um)；流动相为0.1%甲酸水(A)-甲醇(B)；梯度洗脱：0min(100%A)，20min(95%A+5%B)，40min(100%B)；流速0.8mL/min，温度30℃，进样量10μL，检测波长210nm。

槲皮素液相色谱条件Agilent zorbax SB-Aq(4.6mm×250mm，5um)；流动相：70%甲醇+30%水，用磷酸调pH值到3；流速0.8mL/min，温度30℃，进样量20μL，检测波长365nm。

2　结果与分析

2.1酚酸类物质的回归分析

高压液相色谱分析表明，在云南主产区的23个核桃样品内种皮中的酚酸类多酚为没食子酸及绿原酸，类黄酮物质为槲皮素。其中没食子酸的保留时间为2.45min，线性方程为y=428.26x+0.442 1，回归系数R2=0.997 9，没食子酸在质量浓度为0.1～2μg/mL，质量浓度与吸光度值呈良好的线性关系。绿原酸的保留时间为4.22min，线性方程为y=1 815.1x+66.396，回归系数R2=0.992 7，没食子酸在质量浓度为0.1～2μg/mL，质量浓度与吸光度值呈良好的线性关系。槲皮素的保留时间为7.15min，线性方程为y=2 711.6x+33.699，回归系数R2=0.994 4，没食子酸在质量浓度为0.02～0.2μg/mL，质量浓度与吸光度值呈良好的线性关系。见表2和图1。

表2　核桃内种皮酚酸类物质的回归分析参数Tab.2　Regression indexes of the polyphenols in the walnut kernel pellicle

2.2不同产地核桃内种皮中酚酸类物质的含量分析

所收集的23个核桃内种皮样测定结果见表3。其中没食子酸含量最低的为5号样(云新301，4.06μg/g)，含量最高为17号样(漾濞漾泡，395.73μg/g)；绿原酸含量最低的为10号样(保山细香，1.02μg/g)，含量最高为23号样(大麻二号，464.09μg/g)。类黄酮槲皮素含量最低的为12号样(临沧漾泡，0.01μg/g)，含量最高为15号样(石屏紫金，10.13μg/g)。

图1　没食子酸、绿原酸、槲皮素的曲线图Fig.1　Curve of gallic acid,chlorogenic acid and quercetin表3　不同核桃品种内种皮中没食子酸、绿原酸及槲皮素的含量Tab.3　Content of gallic acid,chlorogenic acid and quercetin in difference walnut varieties’ kernel pellicle

图2没食子酸、绿原酸、槲皮素的柱状图

Fig.2Bar graphs of gallic acid,chlorogenic

acid and quercetin

2.3柱状图分析

由没食子酸柱状图可看出，没食子酸含量稍高的核桃内种皮为13、16、17、22号样，含量分别为249.49μg/g、356.36μg/g、395.73μg/g、194.36μg/g。由绿原酸柱状图可看出，绿原酸含量稍高的核桃内种皮为14、19、22、23号样，含量分别为162.31μg/g、207.75μg/g、309.71μg/g、464.09μg/g。由槲皮素柱状图可看出，槲皮素含量稍高的核桃内种皮为15、16、17、22号样，含量分别为10.13μg/g、7.95μg/g、8.22μg/g、9.70μg/g。由此可知，多酚类物质含量高的品种集中于15、16、17及22号样中，即富多酚核桃品种为石屏紫金、大姚三台、漾濞漾泡及华宁大白壳。

3　结论

所收集的云南主栽区核桃试样中，其中没食子酸含量最低的为5号样(云新301)，为4.06μg/g，含量最高为17号样(漾濞漾泡)，为395.73μg/g，差异较显著。绿原酸含量最低的为10号样(保山细香)，为1.02μg/g，含量最高为23号样(大麻二号)，为464.09μg/g，差异也较显著。类黄酮槲皮素含量最低的为12号样(临沧漾泡)，为0.01μg/g，含量最高为15号样(石屏紫金)，为10.13μg/g，差异也较显著。其他的多酚类物质较少或近没有。核桃内种皮集中了核桃仁中大部分多酚类物质，是核桃产生涩味主因，但去种皮核桃加工虽口感较好，其生理活性反而降低，故在核桃加工中应考虑其营养保健价值。

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Detection of Walnut Kernel Pellicle from the Main Walnut Varieties in Yunnan Province

GENG Shu-xiang1,2,NING De-lu1,2,LI Yong-jie1,2,CHEN Hai-yun1,2,ZHANG Yan-li1,2,XIAO Liang-jun1,2

(1.Yunnan Academy of Forestry,Kunming Yunnan 650201,P.R.China；2.Woody Oil Engineering Technology Research Center of Yunnan Province,Kunming Yunnan 650201,P.R.China)

Taking 23 main producing areas of walnut seed coat as raw material in Yunnan,we analyzed the polyphenols in the walnut kernel pellicle by HPLC.The results showed that the content of gallic acid and chlorogenic acid was higher than others.The lowest gallic acid content was 4.06μg/g and the highest concentration was 395.73μg/g,the difference was significant.The lowest content of chlorogenic acid was 1.02μg/g and the highest content was 464.09μg/g,the difference was significant.The lowest content of quercetin was 0.01μg/g and the highest content was 10.13μg/g,the difference was significant also.Other polyphenols were less or nearly none.

walnut；walnut kernel pellicle；polyphenols；High Pressure Liquid Chromatography

10.16473/j.cnki.xblykx1972.2016.05.024

2016-04-20

云南省林业厅木本油料创新项目“云南主栽核桃品种品质评价”([2014]CX06)及“云南核桃遗传资源调查编目”([2014]CX01)。

耿树香(1978-)，女，副研究员，主要从事林产化工研究。E-mail：gsx05@126.com

简介:宁德鲁(1974-)，男，研究员，硕士生导师，主要从事经济林良种选育、丰产栽培等方面的研究推广工作。

E-mail：ningdelu@163.com

TS 255.7;S 664.1

A

1672-8246(2016)05-0124-04