人参皂甙Rg1对大鼠坐骨神经损伤后修复的剂量效应

索胧胧， 蔡志平， 杨占君， 霍东升

(1.包头医学院2015级研究生，内蒙古包头 014060；2.包头医学院人体解剖学教研室)



人参皂甙Rg1对大鼠坐骨神经损伤后修复的剂量效应

索胧胧1， 蔡志平2， 杨占君2， 霍东升2

(1.包头医学院2015级研究生，内蒙古包头 014060；2.包头医学院人体解剖学教研室)

目的：观察人参皂甙Rg1对大鼠坐骨神经损伤后的修复作用，寻求最佳剂量。方法：健康成年SD大鼠90只，采用离断左侧坐骨神经的方法建立周围神经损伤模型，建模后随机分为6组(实验组2 mg组、4 mg组、8 mg组、12 mg组，甲钴胺组和空白对照组)，每组15只。实验组大鼠腹腔注射人参皂甙Rg1 2 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg和12 mg/kg，甲钴胺组大鼠给予甲钴胺(100 μg/kg)，空白对照组给予等量生理盐水。给药8周后行坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)和神经传导速度检测。结果：8周后各实验组和甲钴胺组大鼠SFI、神经传导速度均优于空白对照组(P<0.05)；实验各组之间比较，8 mg组优于其他各剂量组(P<0.05)。结论：人参皂甙Rg1接近8 mg/kg剂量治疗大鼠坐骨神经损伤的作用较好。

人参皂甙；坐骨神经；神经损伤；修复

周围神经损伤在临床上时有发生且预后较差。有研究显示人参皂甙Rg1对神经损伤有一定的保护作用[1]。我们在前期研究中也发现人参皂甙Rg1对大鼠坐骨神经离断损伤后的神经肌肉恢复作用效果显著[2]。本实验在前期研究的基础上，设计给予动物模型不同剂量人参皂甙Rg1，观察其对神经再生和功能修复的影响，以便寻求治疗最佳有效剂量。为人参皂甙单体Rg1开发用于临床治疗神经损伤的药物提供实验研究资料。

1 对象与方法

1.1 实验试剂及动物 选用两月龄成年SD大鼠(购自内蒙古大学，批号：XKSC蒙2002-0001)，体重(200±10)g，共90只，建立模型之前先适应性饲养1周。实验过程中对动物的处置符合实验动物使用规定。

1.2 实验方法

1.2.1 坐骨神经离断损伤模型建立 使用10 %水合氯醛(3 mL/kg)经腹腔注射麻醉，鼠板俯卧固定，脱毛、碘伏消毒，无菌条件下左下肢股后部纵行切口1.5 cm，沿肌间隙分离肌层充分显露，在放大8倍的手术显微镜下游离坐骨神经，在距离梨状肌下缘0.8 cm处将坐骨神经完全离断，随即用10-0的无损伤缝合线以神经外膜表面的血管走行为标记缝合神经外膜4～6针(以无神经乳头外露为标准)，然后3-0缝合线逐层缝合切口。术后观察至动物清醒后，分笼饲养，定时鼠笼消毒，勤换垫料以防止足底溃疡发生。

1.2.2 术后分组与处理 用生理盐水将人参皂甙Rg1配制成药液，浓度为0.5 mg/mL，放入4℃的冰箱内备用。将术后大鼠随机分成6组，每组15只。分组情况：Rg1剂量分别为2 mg组、4 mg组、8 mg组和12 mg组为实验组，分别经腹腔注射已配制的人参皂甙Rg1 2 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg、12 mg/kg。甲钴胺组和空白对照组，分别以同样的的方式注射甲钴胺(100 μg/kg)和生理盐水。术后24 h开始，1次/d，连续8周，各组均以左侧为损伤侧，右侧为正常对照。

1.2.3 坐骨神经功能指数(sciatic functional index，SFI)的检测 术后8周进行SFI测定。参考文献报道方法[3]，制做大鼠足印走行记录箱，记录箱为避光暗箱，由行走箱和收集箱组成。实验时，将各足趾蘸过墨水的大鼠放入行走箱入口，大鼠经过行走箱进入收集箱，在底部铺设的白纸上留下足印。收集大鼠足印后，选实验侧足(E)和正常侧足(N)测量3个变量：从足跟到足尖的距离作为足印长度(podogram length，PL)、从第1～5趾的距离作为大鼠足趾宽度(width between the first and fifth toes,TW)、从第2～4趾的距离作为中间足趾距离(distance between intermediate toes or intermediary toe spread,ITS)，精确测量到毫米。计算SFI时把以上各变量带入Bain公式。SFI=-38.3(EPL-NPL)/NPL+109.5(ETS-NTS)/NTS+13.3(EITS-NITS)/NITS-8.8。SFI以-100代表神经完全离断，-11～-100表示部分神经功能恢复，0～-11表示神经功能完全正常。

1.2.4 神经传导速度的检测 记录足印后经10 %水合氯醛3 mL/kg腹腔注射重新麻醉，按原切口切开暴露坐骨神经缝合口及近端。采用成都泰盟科技有限公司BL-420F电生理仪检测。刺激电极置于缝合处的近端,记录电极置于缝合处的远端，两电极间距离固定。方波、恒压3.0 V刺激，波宽0.1 ms，10 Hz，记录运动神经传导速度(the motor nerve conduction velocities，MNCV)。

1.2.5 数据处理 所有实验数据运用SPSS 17.0统计软件包进行处理，结果以平均数±标准差表示，组间比较采用t检验方法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SFI的变化 术后8周进行踪足分析和SFI计算，结果显示人参皂甙2 mg组、4 mg组、8 mg组、12 mg组，甲钴胺组绝对值小于空白对照组(P<0.05)，8 mg组绝对值小于2 mg组、4 mg组、12 mg组和甲钴胺组(P<0.05)。2 mg组、4 mg组、12 mg组和甲钴胺组组间比较无差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2 MNCV的变化 术后8周测定坐骨神经动作电位波幅并计算MNCV，单位是m/s，结果显示2 mg组、4 mg组、8 mg组、12 mg组，甲钴胺组均高于空白对照组(P<0.05)，8 mg组高于2 mg组、4 mg组、12 mg组、甲钴胺组(P<0.05)，而2 mg组、4 mg组、12 mg组、甲钴胺组之间差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 术后8周各组大鼠SFI比较

3 讨论

周围神经损伤是临床上一种较为常见的损伤，修复困难，致残率高。人参皂甙Rg1是人参皂甙中最为重要的单体之一，具有广泛的药理学活性。笔者前期研究也发现人参皂甙Rg1对坐骨神经损伤后再生与功能恢复具有促进作用。在此研究基础上本实验设计不同剂量人参皂甙Rg1对坐骨神经损伤的治疗效果，并设立甲钴胺组，以期找出人参皂甙Rg1治疗坐骨神经损伤的最佳剂量。陈大庆等[4]也发现人参皂甙Rg1对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡有保护作用，且呈剂量依赖性。本实验结果显示术后8周人参皂甙Rg1各剂量组的SFI和MNCV均优于生理盐水组，与前期结果一致，证实了人参皂甙Rg1确实能够促进坐骨神经损伤后的再生和功能修复。

本实验发现人参皂甙8 mg/kg组与其它人参皂甙各组比较，SFI和MNCV均有显著性差异，说明8 mg/kg的人参皂甙Rg1对促进坐骨神经损伤后再生与修复的效果最好，可能提示8 mg/kg剂量已接近人参皂甙Rg1治疗坐骨神经损伤的最佳剂量。

[1] 董峰，杨占君，蔡志平.人参皂甙对常见神经作用机制的研究现状[J].包头医学院学报,2013,29(5):116-118.

[2] 方欣，周朋，闫旭升，等.人参皂甙Rg1促进大鼠坐骨神经损伤后再生的作用[J].解剖学杂志，2013，36(1):70-73.

[3] 刘鑫，藏金月，辛娟娟，等.坐骨神经损伤后雏菊叶龙胆的修复作用实验研究[J].局解手术学杂志，2014，23(2)：115-117.

[4] 陈大庆,朱烈烈,李永领,等.人参皂甙Rg1对颅脑损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响[J]. 实用医学杂志,2010,26(1):30-31.

Study on the dose of ginsenoside Rg1 in the repairing of sciatic nerve injury in rats

SUO Longlong1, CAI Zhiping2, YANG Zhanjun2, HUO Dongsheng2

(1.PostgraduatestudentofBaotouMedicalCollege,Baotou014060,China;2.DepartmentofAnatomy,BaotouMedicalCollege,Baotou014060,China)

Objective:To study the repairing effects of ginsenoside Rg1 on rat sciatic nerve after injury and to seek the optimal dose. Methods:90 healthy adult SD rats, with left sciatic nerve apocoped as model for treatment of peripheral nerve injury, were randomly divided into 6 groups (experiment group 2 mg、4 mg、8 mg、12 mg, mecobalamine group and blank control group), 15 rats in each group. Ginsenoside Rg1 2 mg/kg,4 mg/kg, 8 mg/kg and 12 mg/kg were injected into abdominal cavity in the experiment groups. Mecobalamine (100 μg/kg) was given in the mecobalamine group and the rats in the blank control group were injected Sodium Chloride at the same dosage. The sciatic function index (SFI) and nerve conduction velocity were detected after 8 weeks administration.Results:SFI and nerve conduction velocity in the experiment groups and the mecobalamine group were better than those in the blank control group (P<0.05); SFI and nerve conduction velocity in the 8 mg group were significantly better than those in the other experiment groups (P<0.05). Conclusion:Ginsenoside Rg1 8 mg/kg is close to the optimal dose in the treatment of sciatic nerve injury.

Ginsenosides; Sciatic nerve; Nerve injury; Repair

包头医学院秦文斌基金(byjj201501)；包头市医药卫生基金(Wsjj2015019)

霍东升

2015-07-15)