水体中代森锰锌高效液相色谱分析方法

林 琎，孙 欣，杨 松，慕 卫

（1.山东农业大学植物保护学院，山东泰安 271018；2.山东农业大学农药环境毒理研究中心，山东泰安 271018；3.山东农业大学食品科学与工程学院，山东泰安 271018）

◆农药分析◆

水体中代森锰锌高效液相色谱分析方法

林 琎1，2，孙 欣3，杨 松2，慕 卫1，2

（1.山东农业大学植物保护学院，山东泰安 271018；2.山东农业大学农药环境毒理研究中心，山东泰安 271018；3.山东农业大学食品科学与工程学院，山东泰安 271018）

采用高效液相色谱法，分析水样中代森锰锌。代森锰锌在L-半胱氨酸盐酸盐和EDTA-2Na溶液中先转化为代森钠，再与碘甲烷发生甲基化反应，然后以乙腈-磷酸水为流动相，选用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱，在272 nm波长下进行液相色谱分析。结果表明，在0.09～45 mg/L范围内，方法具有良好的线性关系，相关系数为0.999 8。方法平均回收率为90.88%～93.44%，相对标准偏差为2.22%～3.58%。该方法操作便捷、准确，适用于水体中常量和微量代森锰锌含量分析。

代森锰锌；检测；衍生；高效液相色谱；改进方法

代森锰锌为乙撑二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂，广谱、低毒，对蚕豆赤斑病、马铃薯和番茄早疫病等多种病害具有较好的防治效果[1-3]。目前乙撑二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂的检测方法有气质联用法[4]、液质联用法[5]等。此外，也可采用间接方法测定，即其先与无机酸反应得到二硫化碳，再采用气相色谱顶空法定量[6]。由于代森锰锌难溶于水，不溶于大多数有机溶剂，且在液相色谱上无响应，需衍生处理后再进行高效液相色谱检测。本研究建立了水体中微量代森锰锌经衍生化后，再进行高效液相色谱检测的改进方法，检测量低，方法简便稳定。

1 材料和方法

1.1 试剂和仪器

代森锰锌（98.0%），由山东农业大学农药环境毒理研究中心提供；甲醇、乙腈（色谱纯），天津科密欧化学试剂有限公司；L-半胱氨酸盐酸盐（分析纯），天津市巴斯夫化工有限公司；氢氧化钠、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）（分析纯），上海广诺化学科技有限公司；碘甲烷（分析纯），山东西亚化学工业有限公司；试验用水为去离子水。

高效液相色谱仪:Agilent 1220，配紫外检测器；色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；数控超声波清洗器；电子天平；超纯水仪。

1.2 试验方法

1.2.1 反应溶液配制

溶液Ⅰ:称取1.000 0 g L-半胱氨酸盐酸盐、5.000 0 g EDTA-2Na和2.000 0 g氢氧化钠于容量瓶中，用蒸馏水定容至250 mL；溶液Ⅱ:量取1 mL碘甲烷到25 mL容量瓶，用甲醇定容。

1.2.2 标样溶液配制

称取代森锰锌0.027 78 g，用溶液Ⅰ溶解，30℃持续超声30 min，冷却至室温，定容至50 mL，得到代森锰锌标样溶液。取代森锰锌标样溶液与等体积溶液Ⅱ室温黑暗条件下衍生反应30 min后，离心5 min，取上清液进样检测。

1.2.3 液相色谱条件

流动相:乙腈＋0.5%磷酸水（体积比45∶55）；检测波长:272 nm；柱温:30℃；流速:1.0 mL/min；进样量:20 μL。

2 结果与讨论

2.1 反应试剂的选择

陈鹭平等[5]采用LC-MS/MS分析二硫代氨基甲酸酯类农药时，曾对缓冲液进行筛选，发现以EDTA和半胱氨酸为缓冲液时，目标物才有响应。EDTA-2Na在水中有很好的溶解性，属强效螯合剂，与金属离子形成的络合物有很高的稳定常数。故本研究选用L-半胱氨酸盐酸盐和EDTA-2Na作为缓冲液，碱性条件下代森锰锌转化为代森钠。并以碘甲烷的甲醇溶液作为反应液，甲基化反应后进行液相色谱检测。

2.2 衍生反应条件的选择

分别选用25℃、30℃和40℃作为反应温度，分别设反应时间为20 min、30 min和40 min，进行液相色谱检测。结果发现，30℃条件下反应30 min，目标峰信号值最大，且目标峰与杂质峰分离效果较好，标样线性关系良好，说明在该条件下进行的衍生化反应最完全。

2.3 标准曲线制作

用溶液Ⅰ将500 mg/L代森锰锌标样溶液稀释成质量浓度分别为0.1,0.5,1,2,5,10,50 mg/L的系列标样溶液。再分别取9 mL各浓度梯度代森锰锌标样溶液与1 mL溶液Ⅱ混合，30℃持续超声30 min。在1.2.3色谱条件下进行检测，以甲基化衍生物的质量浓度为横坐标，以对应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。线性回归方程为y=313 621.7 x-16 268.3，线性相关系数为0.999 8。结果表明，该方法在0.09～45 mg/L范围内具有良好的线性关系。液相色谱图见图1。

图1 代森锰锌甲基化衍生物液相色谱图（4.5 mg/L）

2.4 准确度和精密度

以空白水体为基质，加入代森锰锌标样，使其质量浓度分别为0.1,1,10mg/L，分别取上述溶液9mL与1 mL溶液Ⅱ混合，30℃持续超声30 min。重复5次，计算准确度和精密度。结果表明，方法平均回收率为90.88%～93.44%，相对标准偏差为2.22%～3.58%（见表1）。

表1 分析方法准确度和精密度

3 结论

本研究建立了代森锰锌衍生化反应-高效液相色谱分析的改进方法，该方法操作便捷、准确，既适用于水体中微量代森锰锌的检测，也适用于相关产品的质量分析。

[1]肖春芳,田恒林,沈艳芬,等.代森锰锌和戊唑醇对马铃薯早疫病菌不同菌株的毒力 [J].安徽农业科学,2015,43(18)：123-124; 155.

[2]顾春燕,葛红,陈满峰,等.80%代森锰锌可湿性粉剂防治蚕豆赤斑病示范试验研究[J].现代农业科技,2015(12)：123;132.

[3]廖翔.50%代森锰锌可溶性粉剂防治番茄早疫病效果研究[J].现代农业科技,2013(17)：164;166.

[4]张文红,张慧,邵辉.代森联在葡萄和土壤中的残留和消解规律[J].天津农业科学,2016,22(1)：13-17.

[5]陈鹭平,李久兴,吴敏,等.非衍生化/液相色谱-串联质谱法测定食品中的二硫代氨基甲酸酯类农药残留[J].分析测试学报,2013, 32(3)：287-292.

[6]谭头云,蔡磊明,王立冬,等.气相色谱法测定苹果、土壤中代森铵及其代谢物的残留量[J].农药,2009,48(8)：591-592;597.

（责任编辑：柏亚罗）

Analysis Method of Mancozeb in Water by HPLC

LIN Jin1,2,SUN Xin3,YANG Song2,MU Wei1,2
(1.College of Plant Protection,Shandong Agricultural University,Shandong Tai'an 271018,China;2.Research Center of Pesticide Environmental Toxicology,Shandong Agricultural University,Shandong Tai'an 271018,China;3.College of Food Science and Engineering,Shandong Agricultural University,Shandong Tai'an 271018,China)

A method for determination of mancozeb in water was developed by HPLC.Mancozeb converted into nabam in L-cysteine hydrochloride and EDTA-2Na under basic conditions,then reacted with methyl iodide.The determination was carried out on the Agilent ZORBAX SB-C18column,the mobile phase was acetonitrile+phosphoric acid solution,the detection wavelength was 272 nm.The results showed that at the concentration of 0.09-45 mg/L,the correlation coefficient was 0.999 8.The average recoveries of the method were 90.88%-93.44%,with the relative standard deviations of 2.22%-3.58%.The method was fast,simple.

mancozeb;analysis;derivatization;HPLC;improved method

TQ 450.6

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2016.06.014

2016-06-08；

2016-06-27

林琎（1978—），女，四川省三台县人，博士，实验师。研究方向:农药毒理。E-mail:linjin@sdau.edu.cn