血管生成拟态与大肠癌肝转移相关性探究

张文忠，凌 杰，徐 斌，邱 伟，王永兵

上海市浦东新区人民医院普通外科，上海 201200

血管生成拟态与大肠癌肝转移相关性探究

张文忠，凌 杰，徐 斌，邱 伟，王永兵

上海市浦东新区人民医院普通外科，上海 201200

目的 探讨血管生成拟态（vasculogenicmimicry，VM）与大肠癌肝转移相关性。方法 应用免疫组织化学方法检测115例大肠癌（其中伴肝转移25例，无肝转移90例）组织中的VM；并随访观察这些患者术后2年有无癌复发和肝转移。结果 伴肝转移大肠癌患者癌组织中有64.0%VM阳性，无肝转移组仅26.7%VM阳性。无肝转移组患者术后2年内癌复发（P=0.0003）和肝转移（P＜0.0003）发生与VM生成相关。结论 VM与大肠癌复发和肝转移呈正相关。

大肠癌；血管生成拟态；肝转移

美国Iowas大学Maniotis等[1]于1999年发现人眼葡萄膜黑色素瘤细胞可以通过自身变形，模拟血管内皮细胞，形成类似血管的可运输血液的管道体系，并通过与宿主血管相连，为肿瘤提供血液。这种不依赖机体内皮细胞的全新肿瘤血管生成模式，定义为“血管生成拟态（vasculogenicmimicry，VM）”。VM具有微循环功能，与血管相比其最大生理特征为不含内皮细胞衬覆。VM经PAS染色呈阳性。VM可与肿瘤边缘的静脉相连。VM主要存在于高侵袭性肿瘤组织中[2-6]，如随着研究的深入陆续被发现存在于大肠癌、肺癌、卵巢癌、炎性乳癌、恶性胶质瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肉瘤、胆囊癌[6-17]。

大肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，在我国发病率和死亡率居第5位[18-19]。远处转移是导致大肠癌患者死亡的最重要原因，其中肝脏是远处转移的主要靶器官。肝转移是晚期大肠癌及经手术切除原发灶后大肠癌患者的最主要死因[20]。大肠癌肝转移主要通过癌细胞沿门静脉系统回流，经血流转移至肝脏[21-22]。现有报道表明，VM不仅与肿瘤的生长、侵袭、转移等相关，而且与疾病预后呈负相关[23-24]。但VM与大肠癌肝转移关系目前尚不明确。本研究通过检测大肠癌癌组织中VM，分析与肝转移及术后2年复发及肝转移情况，以探讨大肠癌组织VM与其肝转移的关系。

1 材料与方法

1.1 患者与标本

本研究收集115例经手术病理确诊的大肠癌患者。其中，伴肝转移25例，男13例，女12例，平均年龄（54.24±15.04）岁；无肝转移90例，男42例，女48例，平均年龄（55.80±12.72）岁。两组年龄、性别差异无统计学意义。分别收集这些患者的癌组织样本，用于VM检测。跟踪记录这些患者2年中的疾病进展、临床症状和病理状态。

1.2 方法

1.2.1 组织芯片制作

将标本组织填入蜡块中，于56℃烤箱中反复熔凝使组织与蜡块成为一体。之后将组织蜡块固定在切片机上，以4μm厚度连续切片，选取组织完整的切片备用。

1.2.2 CD31/PAS免疫组织化学染色

将组织切片置于60℃烤箱中烘烤1 h。利用二甲苯和梯度酒精脱蜡和水化。以3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶。用柠檬酸盐溶液（pH值6.0）于98℃修复抗原15m in。以适当浓度兔抗人CD31抗体（Abcam）于4℃孵育过夜，之后用适当浓度山羊抗兔二抗（Abcam）于室温孵育25m in。DAB显色至显微镜下血管内皮细胞着色后，用水冲洗1～2m in以终止反应。利用0.5%过碘酸溶液还原10m in，之后用Shiff碱液中染色30m in。苏木素复染3m in后用氨水返蓝，并流水冲洗以及如HE染色中所示进行脱水、透明、封固。

VM染色判定：VM特征结构为肿瘤细胞围成的血管样结构，CD31染色阴性，PAS染色阳性。当整个组织PAS不显色或显色不清或＜5%细胞为PAS染色阳性记为VM阴性，否则为VM阳性。

1.2.3 统计分析

2 结果

2.1 癌组织VM

VM阳性表现为CD31染色阴性而PAS染色阳性的管网状结构，见图1。25例大肠癌肝转移组中16例（64.0%）VM阳性，而90例大肠癌非肝转移组24例（26.7%）VM阳性，大肠癌肝转移组癌组织VM阳性率明显高于无肝转移组（P=0.000 5）[1]，见表1。

表1 大肠癌肝转移和无肝转移患者癌组织的VM Tab.1 VM of colorectal cancers with and without liver metastases

2.2 无肝转移大肠癌患者复发与VM相关性

对90例无肝转移的大肠癌患者进行2年跟踪随访发现，其中24例VM阳性者有18例（75.0%）肿瘤复发，66例VM阴性患者复发仅21例（31.8%）。无肝转移大肠癌VM阳性患者复发率显著高于VM阴性患者（P=0.000 3）。表明，无肝转移大肠癌患者肿瘤复发与VM相关，见表2。

图1 大肠癌组织VM检测CD31/PAS免疫组化染色（×400）Fig.1 Immunohistochemical staining of CD31/PAS in colorectal cancer tissues（×400）

表2 无肝转移大肠癌患者肿瘤复发与VM相关性Tab.2 Correlation of recurrence with VM formation in colorectal cancers without liver metastases

2.3 无肝转移大肠癌患者肝转移与VM相关性

同时对90例无肝转移的大肠癌患者进行2年跟踪随访发现，其中24例VM阳性者有18例（75.0%）发生肝转移，66例VM阴性患者肝转移仅18例（27.3%）。无肝转移大肠癌VM阳性患者术后肝转移率显著高于VM阴性患者（P=0.000 1）。表明，无肝转移大肠癌患者术后发生肝转移与VM相关（χ2=16.70，P＜0.000 1），见表3。

表3 大肠癌患者术后肝转移与VM相关性Tab.3 Correlation of liver metastases with VM formation after operation for colorectal cancers

3 讨论

癌细胞的浸润和转移是肿瘤恶性程度的重要表现，包括黏附、基质降解与迁移多个步骤[20]。随着肿瘤的进展，约80%大肠癌患者最终发展为肝转移并导致死亡[20]。大量研究表明，VM阳性的多种癌细胞可明显上调细胞黏附、基质降解和信号传递相关分子的表达，如血管上皮钙黏附素（VE-cadherin）、促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶A2 （EphA2）、金属蛋白酶等，并显著降低金属蛋白组织抑制剂（TIMP）尤其是TIMP2表达[2-5，21]。然而，VM与大肠癌肝转移的相关性尚不清楚。

为探究VM与大肠癌肝转移的相关性，本研究通过免疫组化分析115例大肠癌癌组织中VM，并调查随访2年中患者复发和肝转移情况。结果术前肝转移患者癌组织中VM阳性比例显著高于非肝转移组（P=0.000 5）；术前无肝转移患者中，大约26.7%患者癌组织VM阳性，而这些患者术后2年肿瘤复发比例达75.0%，且全部伴有肝转移。由此可见，VM与大肠癌恶性程度呈正比。术前无肝转移的VM阴性患者，术后2年内肿瘤复发比例为31.8%，肝转移27.3%；无肝转移大肠癌患者术后肿瘤复发与肝转移与癌组织VM显著相关（P=0.000 3 和P＜0.000 1），与文献报道一致。本研究表明，大肠癌组织VM在一定程度上预示患者的预后不良[24-25]。由于VM与大肠癌等肿瘤的恶性程度相关，故可作为潜在的癌症药物治疗靶点[26-27]。对VM的深入研究可能为肿瘤的治疗和临床预后提供依据。

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Study of relationship between vasculogenic mimicry and liver metastasis in patients with colorectal cancer

ZHANGWenzhong，LING Jie，XU Bin，QIUWei，WANG Yongbing
DepartmentofSurgery，Pudong New Area People’s Hospital，Shanghai 201200，China

Ob jective To observe the relationship between vasculogenic mimicry（VM）and liver metastasis in patients with colorectal cancer.Methods VM in 115 patients with colorectal cancer was examined by immunohistochemical staining.Of them，25 cases were with liver metastases and 90 without liver metastases.Cancer recurrence and liver metastases of these patients 2 years after operation were followed up.Results VM positivity was examined in 64.0%of patients with liver metastases，while only 26.7%of patients without liver metastases showed VM positivity.Recurrence and liver metastases of patients without liver metastases before operation were significantly related to VM existence，with P values of 0.000 3 and less than 0.000 3，respectively.Conclusion VM is positively associated with recurrence and liver metastasis of colorectal cancer.

Colorectal cancer；Vasculogenic mimicry；Liver metastasis

R735.3+4

A

2095-378X（2016）03-0162-04

10.3969/j.issn.2095-378X.2016.03.005

2016-07-14）

上海市浦东新区卫生计生委科技项目（PW 2013B-7，PW 2013B-6）

张文忠（1980—），男，主治医师，硕士，研究消化道肿瘤外科

王永兵，电子信箱：wwybw@sina.com