癸壬化石丸对大鼠亚急性毒性实验研究

黄雨佳 卢兴凤 武 伟 杨树娟 万 婕 袁叶飞 唐喻莹 刘 勇 刘珉甬

1.西南医科大学护理学院，四川 泸州 646000；2.西南医科大学附属医院，四川 泸州 646000；3.西南医科大学药学院，四川 泸州 646000；4.泸州欣康生物科技有限公司，四川 泸州 646000；5.西南医科大学附属医院病理科，四川 泸州 646000；6.西南医科大学护理医疗器械研发实验室，四川 泸州 646000



癸壬化石丸对大鼠亚急性毒性实验研究

黄雨佳1卢兴凤1武 伟2杨树娟2万 婕1袁叶飞3唐喻莹4刘 勇5刘珉甬6*

1.西南医科大学护理学院，四川 泸州 646000；2.西南医科大学附属医院，四川 泸州 646000；3.西南医科大学药学院，四川 泸州 646000；4.泸州欣康生物科技有限公司，四川 泸州 646000；5.西南医科大学附属医院病理科，四川 泸州 646000；6.西南医科大学护理医疗器械研发实验室，四川 泸州 646000

目的：通过癸壬化石丸对大鼠亚急性毒性实验研究评价其安全性，为新药开发和临床安全用药提供实验依据。方法：将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组，对照组用5.0%吐温80+生理盐水灌胃3mL/(次·d)；实验组将癸壬化石丸浸膏+5.0%吐温80+生理盐水配置成浓度0.5g/mL混悬液(相当于生药浓度2.85g/mL)，灌胃3mL/(次·d)，连续给药14d。观察大鼠一般情况(血尿、大便、活动度、体重、进食量及死亡)；血液生化检测ALT、AST、AST/ALT、Urea；大体解剖观察心、肺、肝、肾外观有无异常；HE染色光镜下观察肝、肾组织有无病理改变。结果：实验组与对照组一般情况比较：均无血尿，活动度、大便性状无异常，进食量呈同步变化，体重变化差异无统计学意义(P>0.05)；血液生化各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)；肉眼观察两组大鼠心、肺、肝、肾无异常改变；光镜观察实验组仅见肝细胞轻度水肿；肾小管上皮轻度水肿，局灶可见空泡变性，间质少量淋巴细胞浸润。结论：在本实验条件下，癸壬化石丸无明显的亚急性毒性，安全性较高。

癸壬化石丸；大鼠；肾结石；亚急性毒性

肾结石是泌尿系统常见病，发病率在15%左右，尤其是中国川南地区发病率极高[1]，且采用手术治疗术后再发率高达50%左右[2-3]。西药枸橼酸盐、镁制剂、磷酸盐、乙酰半胱氨酸等对结石直径>0.6cm的患者效果不明显，且副作用较大。癸壬化石丸治疗肾结石在川南地区经较长时间应用，临床效果显著，拟开发为国家新药。前期试验研究结果表明[4]，癸壬化石丸对大鼠的急性毒性经口LD50>50.0g/kg，按急性毒性分级标准规定，该受试物为无毒级。本研究进行大鼠的亚急性毒性试验，旨在进一步探讨癸壬化石丸的毒性作用，对其安全性进行评价，为临床提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级SD大鼠20只，体重(200±20)g，雌雄各半，西南医科大学动物实验中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(川)2013-17。

1.1.2 药物 生理盐水(批号：15042343，美大康佳乐药业)；5%吐温80 (批号：080928，成都金山化学试剂)；癸壬化石丸浸膏(西南医科大附属中医院制备)；戊巴比妥钠(批号：F20050405，上海化学)。

1.2 方法 前期采用限量实验，癸壬化石丸对大鼠的急性毒性经口LD50>50.0g/kg，按急性毒性分级标准规定，该受试物为无毒级。对照组用5.0%吐温80+生理盐水灌胃3mL/(次·d)，连续14d。实验组用癸壬化石丸最大使用浓度灌胃，即癸壬化石丸浸膏+5.0%吐温80+生理盐水配置成0.5g/mL混悬液(相当于生药浓度2.85g/mL)灌胃3mL/(次·d)，连续14d。每次癸壬化石丸浸膏灌胃剂量约7.5g/kg，相当于33.75g生药/kg。

1.3 观察指标

1.3.1 一般情况 每天观察记录大鼠有无血尿，大便情况，活动度，体重变化、进食量及有无死亡。

1.3.2 血液生化 实验第15d用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，经眼眶静脉采血查ALT、AST、AST/ALT、Urea。

1.3.3 组织病理学 大鼠采血后断颈处死并解剖，肉眼观察心、肝、肾、肺外形、体积、颜色有无异常；将肝、肾用10%甲醛固定、石蜡包埋切片、HE染色后光镜下观察肝组织结构、肝细胞，肾小管结构、肾实质改变。

2 结果

2.1 一般情况 实验组与对照组均无血尿、大便性状正常、活动度正常。实验组2只、对照组1只大鼠在灌胃后立即死亡，解剖观察各脏器无异常改变，仅见胸腔内约有2mL灌胃液，分析系灌胃溶液误入气管导致窒息死亡。对比进食量，实验组与对照组进食量呈同步变化(见图1)。随时间推移，实验组与对照组体重较前均稳定增长，差异有统计学意义(P<0.05)，两组平均体重差异无统计学意义(P>0.05)，时间与干预因素不存在交互作用(P>0.05)，表明癸壬化石丸对体重无明显影响。见表1。

表1 实验组与对照组体重变化

2.2 血液生化 实验组与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

检查项目对照组实验组ALT(U/L)60.23±10.9253.57±9.55AST(U/L)218.15±37.39 209.26±24.96AST/ALT(U/L)3.70±0.59 4.01±0.62Urea(mmol/L)7.35±0.99 6.95±0.53

2.3 肉眼观察各脏器 实验组与对照组心、肝、肾、肺外形、体积、颜色无异常。

2.4 病理组织检查 对照组肝、肾均正常(见图2、图3)；实验组肝组织结构基本正常，仅见肝细胞轻度水肿；肾小管结构正常，皮髓质分界清，肾小管上皮轻度水肿，局灶可见空泡变性，间质少量淋巴细胞浸润(见图4、图5)。

3 讨论

中医认为肾结石本虚标实，顽固难愈，非一般草木之品所能宣达，必借虫类走窜之品搜剔窜透，方能浊开凝去，邪去正复。癸壬化石丸是根据中医药“清热利湿，化瘀通络，补益肝肾等法于一方，攻补兼施，溶排相合”理论，结合现代生物学研究，根据肾结石的特点研制的内服中药。前期研究表明癸壬化石丸无明显毒副作用，为进一步评价其安全性，开展了本次研究。

动物排尿、排便、活动、进食量、体重变化是综合反映药物毒性对机体代谢、健康状况影响的基本指标，本次实验中对照组和实验组大鼠均未见血尿，大便性状、活动度正常，体重稳定增长，进食量呈同步变化，表明癸壬化石丸经口按剂量33.75g生药/kg灌胃，连续给药14d对大鼠生长代谢无明显影响(P<0.05)。肝脏是外源化合物在体内进行生物转化的主要器官，由外源性化合物引起动物肝脏损害时，会引起动物血清中一系列相关酶的变化。肾脏是外源化合物及其代谢产物的主要排泄器官，也是本实验受试药物的主要作用靶器官，通过对肾脏功能生化指标的检测，可了解受试药物对肾脏功能的影响。本研究结果显示对照组和实验组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、ALT/AST、尿素(Urea)差异无统计学意义(P>0.05)，说明癸壬化石丸连续给药14d对大鼠肝肾功能无影响。内脏是机体发挥生理功能的场所，其组织结构的改变将对机体正常生理功能的发挥产生影响。病理组织检查显示实验组肝脏、肾脏有轻度细胞水肿，肾小管上皮局灶可见空泡变性，间质少量淋巴细胞浸润，均属可逆性改变，提示癸壬化石丸浸膏给药剂量7.5g/kg，连续给药14d对大鼠肝、肾脏产生了一定影响，发生机制有待进一步研究。

在上述实验条件下，癸壬化石丸浸膏灌胃的安全剂量约为7.5g/kg，相当于33.75g生药/kg，相当于人临床用量的202.50倍(人临床用量为10.0g/60kg)，连续经口给药14d对大鼠的体重、血液生化指标等均无明显影响，而在该剂量范围内对大鼠心、肝、肾、肺等脏器组织也无可见病变损伤，因此癸壬化石丸无明显的亚急性毒性，安全性较高。

[1]师晶丽.中医肾病临床实践[M].贵阳:贵州科学技术出版社，2012：53-324.

[2]朱军，沈玉华，谢安建，等.草酸钙型尿结石的研究进展[J].化学世界，2007,3:175-178.

[3]周向文，黄冬梅，吕建新.中医药治疗泌尿系结石临床研究进展亚太传统医药[J].2011,4:151-152.

[4]张广平,叶祖光.有毒中药的“毒性”与毒性分级[J].世界中医药, 2014 ,9 (2):175-177.

(编辑：梁志庆)

Experimental Study on rat’s Subacute Toxicity of Guiren Melting-stone Pill

HUANG Yujia1LU Xingfeng1WU Wei2YANG Shujuan2WAN Jie1YUAN Yefei3TANG Yuying4LIU Yong5LIU Minyong6*

1.School of Nursing of Southwest Medical University,Luzhou 646000，China；2.Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000，China；3.School of Pharmacy of Southwest Medical University，Luzhou 646000，China；4.Xinkang Biotechnology Co.,Ltd，Luzhou 646000，China；5.department of pathologyof Southwest Medical University，Luzhou 646000，China；6.Nursing Medical Research Laboratory of Southwest Medical University，Luzhou 646000, China

Objective To investigate the subacute toxicity of Guiren Melting-Stone Pill in rats and to evaluate its safety, providing theoretical basis for the new drug development and clinical application. Methods 20 SD rats were randomly divided into control group(10) and experimental group(10). Rats in control group were given intragastric administration by saline plus 5% Tween 80，3ml/d. Rats in experimental group were given intragastric administration by extractum Guiren melting-stone pill plus saline plus 5% Tween 80, 3mL/d for 14d. Observation Index: rat urine, stool, activity, body weight, food intake and death; blood biochemical parameters: ALT, AST, AST/ALT, Urea; the internal organs were observed by gross anatomy; the liver and kidney tissues were stained for HE expression. Results During the experiment, rats didn't have hematuria in experimental group and control group, stool, activity, weight, food intake were normal. Two sets of blood biochemical results showed no significant difference between the indicators (P>0.05); gross anatomy by naked eye, the internal organs don't have change; there were mild hydropic degeneration of liver cells, mild edema of PCT epithelial cells, very limited vacuolization and inflammatory cell infiltration in the interstitium.Conclusion There was no obviously subacute toxicity of the Guiren Melting-Stone Pill under the condition of this experiment.

Guiren Melting-stone Pill；Rats；Renal Calculus；Subacute Toxicity

2016-09-26

四川省科技厅支撑计划(NO：2015FZ0054)。

黄雨佳(1988-)，女，汉族，研究生在读，研究方向为外科护理应用技术与应用基础研究。E-mail:289416092@qq.com.

刘珉甬(1952-)，女，汉族，本科，教授，研究方向为外科护理应用技与应用基础研究。E-mail:1047986020@qq.com.

R

A

1007-8517(2016)23-0046-03