低氧诱导因子-2α在高原地区女性乳腺癌发生发展不同阶段的表达及意义*

王 欢， 马文岩， 窦报敏， 邓 延， 吴 穹， 沈国双

(青海大学医学院，青海西宁 810001)



低氧诱导因子-2α在高原地区女性乳腺癌发生发展不同阶段的表达及意义*

王 欢， 马文岩， 窦报敏， 邓 延， 吴 穹， 沈国双

(青海大学医学院，青海西宁 810001)

目的:探讨低氧诱导因子2α(hypoxia-inducible factor-2α，HIF-2α)在高原地区女性乳腺癌发生发展不同阶段的表达及意义。方法:应用免疫组化过氧化物酶标记的链酶卵白素(streptavidin peroxidase,SP)法检测20例乳腺囊性增生组织，20例乳腺不典型增生组织，20例乳腺癌组织和20例乳腺正常组织中HIF-2α的表达。结果:HIF-2α在4种组织中均有表达，但在乳腺囊性增生组织，不典型增生组织及癌组织的阳性表达率高于正常组织(P<0.05)；在不同组织中表达率差异明显，20例乳腺正常组织中，14例呈阴性表达，占70.0 %；20例乳腺囊性增生组织中，12例阳性表达，占60.0 %；20例乳腺不典型增生组织中，12例中等阳性占60.0 %；在20例乳腺癌组织中，16例强阳性表达，占80.0 %；HIF-2α在乳腺癌发生发展不同阶段的表达率与乳腺癌的发生发展成正相关(P<0.05)。结论:HIF-2α在乳腺正常组织，囊性增生组织，不典型增生组织以及癌组织都有不同程度的表达，可作为判断高原地区女性乳腺癌发生发展不同阶段的生物学行为指标之一。

乳腺癌；低氧诱导因子-2α；高原地区

低氧普遍存在于实体肿瘤组织中,随着实体肿瘤的增大,肿瘤内部得不到充足的血液供应,导致局部处于缺血缺氧环境下。乳腺癌同其他肿瘤一样都会出现低氧的特征，绝大多数人的实体肿瘤氧分压低于肿瘤起源的正常组织，缺氧是肿瘤发展过程中所必须经历的环境条件之一。肿瘤细胞对缺氧的自身调节和适应机制主要是通过提高葡萄糖转运、糖酵解及形成血管体系来完成。低氧诱导因子-2α(hpoxia-inducible factor-2α，HIF-2α)是缺氧条件下存在于哺乳动物及人体的一种转录因子，作用于内皮素、血管内皮生长因子、血管紧张素Ⅱ及促红细胞生成素等因子，可能也与乳腺癌的生长及转移相关。有研究表明，HIF-2α在正常组织中表达低或无表达，但可以在多种肿瘤组织或细胞中表达，并调节其生物学行为[1]。在低氧情况下，HIF-2α在肺组织中的表达具有时间特异性和组织特异性，而且在慢性缺氧时的低氧适应可能主要由HIF-2α诱导所致。因此HIF-2α与乳腺癌的发生可能有更强的时间相关性，可作为乳腺癌治疗的靶向。本实验旨在采用免疫组织化学方法观察高原地区女性乳腺癌发生发展不同阶段HIF-2α的分布与表达，并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系，以期为高原地区乳腺癌新靶点的诊断和治疗提供理论依据。

1 材料和方法

1.1研究对象 选取青海大学医学院附属医院2012年至2014年经病理证实的乳腺囊性增生组织20例，乳腺不典型增生组织20例，乳腺癌组织20例。全部病例均是女性，年龄34～78岁，平均年龄56.0岁。所有患者术前均未进行化疗和放疗。均有完整的病理临床资料。20例正常组织取自乳腺良性疾病周围正常组织，术前未做任何治疗。

1.2主要试剂 抗HIF-2α兔抗人多克隆抗体和免疫组化染色试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司，二氨基联苯氨(diaminobezidin,DAB)试剂盒购自上海皓尘生物科技有限公司。

1.3方法 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase,SP)法,HIF-2α多抗稀释液倍数为1∶200，免疫组化染色按即用型免疫组化试剂盒说明书进行，二氨基联苯氨显色，苏木素复染，盐酸酒精分化，氨水返蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.4结果判断 HIF-2α阳性显色为棕黄色颗粒，在细胞核和细胞浆都有表达，主要以胞浆表达为主。随机选取5个高倍镜(10×20)视野阳性细胞所占比例，无阳性细胞或阳性细胞数<1%为阴性，阳性细胞数>1 %且≤10 %为阳性(+)，>10 %且≤50 %为中度阳性(++)，>50 %为强阳性(+++)。

1.5统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件进行统计学处理。计量数据以(均数±标准差)表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

HIF-2α在乳腺囊性增生组织，不典型增生组织及癌组织的阳性表达率均高于正常组织(P<0.05)；但在不同组织中表达率差异明显，20例乳腺正常组织中，14例呈阴性表达，占70.0 %；20例乳腺囊性增生组织中，12例阳性表达，占60.0 %；20例乳腺不典型增生组织中，12例中等阳性占60.0 %；在20例乳腺癌组织中，16例占强阳性表达，占80.0 %，见表1、图1。

表1 HIF-2α在乳腺正常组织、囊性增生组织、不典型增生组织及癌组织中的表达情况

3 讨论

正常乳腺组织发展成为乳腺癌，一般还要经历乳腺增生，乳腺不典型增生这两个阶段。在乳腺增生，乳腺不典型增生，乳腺癌这三个阶段中，缺氧是它们共同的特征，却也不尽相同。缺氧作为实体肿瘤微物理环境的典型特征，对肿瘤的生物学行为有明显的影响。HIF作为肿瘤缺氧微环境的特征表达方式，它也是细胞缺氧情况下调控基因表达的主要转录因子之一，能改变一系列的基因表达[2]。HIF-1α与HIF-2α具有48 %的结构同源性，受氧水平的调节[3]。相对于HIF-1α，人们对HIF-2α功能的了解还比较少。目前认为，HIF-2α与癌编码的血管生成因子、增殖与存活因子有关，它还能激活含有缺氧反应元件的基因，参与红细胞生成素、糖分解酶等的激活[4]。因此，HIF-2α在调节哺乳动物生理性应答中具有重要而明确的作用[5]。

本研究采用免疫组化的方法检测了20例乳腺囊性增生组织，20例乳腺不典型增生组织，20例乳腺癌组织和20例乳腺正常组织中HIF-2α的表达，结果显示HIF-2α在细胞核和细胞浆都有表达，主要以胞浆表达为主。另外，HIF-2α在乳腺囊性增生组织，不典型增生组织及癌组织的阳性表达率高于正常组织，这可能与组织的恶性程度密切相关；在不同组织中表达率差异明显，20例乳腺正常组织中，14例呈阴性表达，占70 %；20例乳腺囊性增生组织中，12例占阳性表达，占60 %；20例乳腺不典型增生组织中，12例中等阳性占60 %；在20例乳腺癌组织中，16例占强阳性表达，占80 %。这可能提示从正常组织发生发展为癌组织的过程中，由于组织生长越来越来迅速，导致组织缺血缺氧不断加重，从而减慢了HIF-2α的降解，使HIF-2α的表达率增高。

综上所述，HIF-2α可能是乳腺癌发生、发展过程中众多基因之一，可以作为判断高原地区女性乳腺癌发生发展不同阶段的生物学行为指标之一，有望成为高原地区女性乳腺癌诊断和治疗的新靶点。

[1] Li Y,Qiu X,Zhang S,et al.Hypoxia induced CCR7 expres sion via HIF-1alpha and HIF-2alpha correlates with migration and invasion in lung cancer cells [J].Cancer Biol Ther,2009,8(4):322-330.

[2] Melillo G.Inhibiting hypoxia-inducible factor 1 for cancer therapy[J].Mol Cancer Res,2006,4(9):601-605.

[3] Skuli N,Liu L,Runge A,et al.Endothelial deletion of hypoxia-inducible factor-2 alpha(HIF-2alpha) alters vascular function and tumor angiogenesis[J].Blood, 2009,114(2):469-477.

[4] 孙亚楠，黎卫平，强群，等.HIF-2α及TAMs和VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及其相互关系[J].实用医药杂志，2009，26(6)：15-17.

[5] Petrella B L,Lohi J,Brinckerhoff C E.Identification of membrane type-1 matrix metalloproteinase as a target of hypoxia-inducible factor-2 alpha in von Hippel-Lindau renal cell carcinoma[J].Oncogene,2005,24(6):1043-1052.

Expression and significance of HIF-2α in different stages of the development of female breast cancer in plateau area

WANG Huan, MA Wenyan, DOU Baomin, DENG Yan, WU Qiong, SHEN Guoshuang

(MedicalCollegeofQinghaiUniversity,Qinghai810001,China)

Objective:To explore the expression and significance of HIF-2α in different stages of the development of female breast cancer in plateau area.Methods: Immunohistochemical streptavidin peroxidase (SP) method was adopted to detect the expression of HIF-2α in 20 cases of breast cystic hyperplasia tissues, 20 cases of breast atypical hyperplasia tissues, 20 cases of breast carcinoma tissues and 20 cases of normal breast tissues.Results： HIF-2α is expressed in the four different tissues. The positive expression rates of HIF-2α in breast cystic hyperplasia tissues, breast atypical hyperplasia tissues and breast carcinoma tissues were higher than that in the normal breast tissues (P<0.05). Expression rates of HIF-2α are significantly different in different tissues. 14 cases are negatively expressed in the 20 cases of normal breast tissues, accounting for 70 %; 12 cases are positively expressed in the 20 cases of breast cystic hyperplasia tissues, accounting for 60 %; 12 cases are moderately positively expressed in the 20 cases of breast atypical hyperplasia tissues, accounting for 60 %; 16 cases are strongly positively expressed in the 20 cases of breast carcinoma tissues, accounting for 80 %. The expression of HIF-2 in different stages of breast cancer development is positively correlated to the development of breast cancer (P<0.05). Conclsion:There were different degree expressions of HIF-2α in normal breast tissue, cystic hyperplasia, atypical hyperplasia and carcinoma tissues, which can be regarded as a biological behavior indicator in the assessment of different stages of the development of female breast cancer in plateau area.

Breast cancer; HIF-2α; Plateau region

2014年青海大学医学院大学生科技创新基金项目

沈国双

2015-12-18)