不同产地盾叶薯蓣质量综合评价比较＊

左春芳，吕亚新，张贤良

药学

不同产地盾叶薯蓣质量综合评价比较＊

左春芳，吕亚新，张贤良

目的 对采自3个不同产地的盾叶薯蓣的质量进行综合评价研究。方法 利用HPLC法对3个不同产地共计12批的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元的含量进行测定。结果 湖北郧西、陕西安康、湖南安化3个产地中薯蓣皂苷的含量范围为0.4752%～0.8931%、伪原薯蓣皂苷的含量为0.7348%～1.0023%、薯蓣皂苷元的含量范围为2.3384%～5.6641%，经分析表明3个产地的盾叶薯蓣中有效成分有显著性差异（P＜0.05）。结论

盾叶薯蓣；产地；HPLC法；质量评价

盾叶薯蓣（Dioscorea zingiberensis C.H.Wright），又名火头根，是被子植物门，单子叶植物纲，薯蓣科薯蓣属，草质藤本，根茎横生。根据中国薯蓣植物资源调查资料，盾叶薯蓣垂直分布在海拔100～1500 m的河谷﹑山地﹑落叶阔叶混交林的边缘或稀疏的常绿灌木林内，要求气温高﹑光照强。将其划分为两个区：Ⅰ秦巴－武当区，Ⅱ西南－中南区。盾叶薯蓣以根状茎入药，其性味甘﹑苦﹑凉 ，具有清肺止咳，利湿通淋，通络止痛，解毒消肿的功能，也有降低胆固醇、抗炎、抗肿瘤等药理作用。它有祛痰、脱敏、抗炎、降脂、抗肿瘤等作用，而且它还是合成甾体激素类药物的重要原料［1－3］。

该实验主要采集了湖北郧西、陕西安康、湖南安化3个产地的盾叶薯蓣，建立能够客观反映盾叶薯蓣质量的多类型多指标成分的评价体系，并对其质量进行综合评价研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 1200型 HPLC仪 （Agilent公司）；ELSD 2000 ES型蒸发光散射检测器 （德国Alltech公司）；DAD检测器 （Agilent公司）；色谱柱为DIKMA C18色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；KQ－700DB型数控超声波清洗器；HHS－6型水浴锅 （江苏省金坛市医疗仪器厂）；FA2004A型电子分析天平（上海精天电子仪器有限公司）。

1.1.2 试药 薯蓣皂苷标准品（批号：19057－60－4，成都曼斯特生物科技有限公司）；薯蓣皂苷元标准品 （批号：512－04－9，成都曼斯特生物科技有限公司）；伪原薯蓣皂苷标准品（批号：111855－201001；中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯（TEDIA公司），水为双蒸水，甲醇、乙醇均为分析纯。中性氧化铝（150目，上海陆都化学试剂厂），石油醚（60～90℃，深圳市奥斯朗科技有限公司）。

1.1.3 药材 本实验所用的盾叶薯蓣药材分别采自陕西安康、湖北郧西、湖南安化，经河南中医学院董诚明教授鉴定， 为盾叶薯蓣 Dioscorea zingiberensis C.H.Wright根茎，清除杂质，60℃烘干，粉碎过四号筛。

1.2 方 法

1.2.1 薯蓣皂苷含量测定 （1）对照品的制备。精密称取薯蓣皂苷对照品8.00 mg，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成0.800 mg/ ml的薯蓣皂苷对照品溶液，经0.22 μm的微孔滤膜滤过，即得。（2）供试品的制备。称取盾叶薯蓣药材粉末2g，置具塞锥形瓶中，加入80%乙醇溶液50ml，密塞，称重，在40 kHz、700 W的条件下超声40 min，冷却，用80%乙醇溶液补足重量，摇匀滤过，精密量取续滤液25 ml，浓缩至干，残渣用甲醇溶解，定容于5 ml量瓶中，用0.22 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得［4］。（3）色谱条件。流动相为乙腈∶水（45∶55），进样量20 μl，流速1.0 ml/min，检测波长210 nm，柱温30℃。此色谱条件下薯蓣皂苷与相邻色谱峰的分离度良好，理论塔板数按薯蓣皂苷峰计算为4000以上。

1.2.2 伪原薯蓣皂苷含量测定 （1）对照品的制备。精密称取伪原薯蓣皂苷对照品11.25 mg，置于5 ml容量瓶中，加75%乙醇溶液至刻度，摇匀，制成浓度为2.25 mg/ml的溶液，即得。（2）供试品的制备。精密称定盾叶薯蓣粉末2 g，置具塞锥形瓶中，加入75%乙醇50 ml，称定重量，密塞，放置过夜，超声处理（频率40 kHz，功率700 W）30 min，放冷，再称定重量，用75%乙醇补足重量，摇匀，滤过，量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加甲醇适量，超声处理使溶解，转移至5 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得［5］。（3）色谱条件。色谱柱为DIKMA C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相乙腈-水（30∶70）；流速1.0 ml/min；柱温30℃；进样量20 μl。蒸发光散射检测器参数：漂移管温度105℃，载气流速3.0 L/min，气压4.5 kPa。在此色谱条件下，伪原薯蓣皂苷与样品中相邻色谱峰可得到良好地分离，理论塔板数按伪原薯蓣皂苷峰计算为8000以上。

1.2.3 薯蓣皂苷元含量测定方法 （1）对照品的制备。精密称取薯蓣皂苷元对照品6.52 mg，置5 ml容量瓶中，加乙醇使溶解，稀释至刻度，摇匀，即得1.30 mg/ml薯蓣皂苷元的标准品溶液。用0.22 μm的微孔滤膜过滤至进样瓶中，即得。（2）供试品的制备。精密称取盾叶薯蓣粉末0.5 g，置具塞锥形瓶中，加2.0 mol/L的硫酸50 ml，超声20 min后在100℃水浴锅中水解4 h，放冷过滤，药渣用蒸馏水洗至中性，60℃干燥后，用石油醚（60～90℃）50 ml在90℃水浴中索氏提取5 h，提取液回收至干后用无水乙醇溶解，过滤至10 ml容量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得［6］。（3）色谱条件。色谱柱为DIKMA C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（90∶10），流速：1 ml/min，柱温：30℃，检测波长：210 nm，进样量10 μl。理论塔板数按薯蓣皂苷元峰计算应不低于5000。

1.2.4 高效液相色谱图 薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元对照品及供试品色谱图见图1～3。

图1 薯蓣皂苷对照品与供试品HPLC色谱图

2 结果

通过上述实验方法，对采集的3个不同产地的盾叶薯蓣中各指标性成分进行含量测定，结果数据见表1、概况趋势见图4。

3 讨论

运用SPSS Statistics17.0分析软件对上述结果进行配对样本t检验。结果表明，对于湖北郧西和陕西安康、湖南安化和陕西安康的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量，其双侧P值分别为P1=0.000、P2=0.006、P3= 0.602，其中P1、P2＜0.05，差异有统计学意义，认为湖北郧西和陕西安康的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量有差别，而P3＞0.05，差异无统计学意义，则认为湖北郧西和湖南安化的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量没有差别，由图4可以直观地看出陕西安康的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量略高于湖北郧西和湖南安化。

图2 伪原薯蓣皂苷对照品与供试品HPLC色谱图

图3 薯蓣皂苷元对照品与供试品HPLC色谱图

表1 不同产地的盾叶薯蓣中各指标性成分含量测定结果（n=12）

图4 不同产地盾叶薯蓣中指标性成分折线图

对于湖北郧西和陕西安康、湖南安化的盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷含量，其双侧P值分别为P1= 0.005、P2=0.001、P3=0.023，则P1、P2、P3＜0.05，差异有统计学意义，认为湖北郧西、陕西安康和湖南安化盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷含量有差别由图4可以直观地看出陕西安康的盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量最高，湖北郧西次之，湖南安化最低。

对于湖北郧西和陕西安康、湖南安化的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量，其双侧P值分别为P1= 0.000、P2=0.000、P3=0.187，其中P1、P2＜0.05，按α= 0.05水准拒绝H0，差异有统计学意义，认为湖北郧西和陕西安康的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量有差别，而P3＞0.05，差异无统计学意义，则认为湖北郧西和湖南安化的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量没有差别，由图4可以直观的看出陕西安康的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量明显高于湖北郧西和湖南安化。

药用植物有效成分含量的高低从某种意义上来说是种质与生态环境双重作用的结果，种质是内在因素，而生态条件则是种质好坏得以体现的外在条件［7］。因此在盾叶薯蓣GAP基地的建设中，应首选遗传性状好的种质和适应的生态条件，才能保证GAP的顺利实施。由于各地所处的生态和地理环境不同，药物本身的治疗作用也有着显著的差异［8］。盾叶薯蓣作为一种重要的提取原料，要保证薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元含量在有效地治疗范围内，不仅要求有优良的种质作为前提，还与一系列的栽培环境有关。为此，本论文对不同产地的盾叶薯蓣中有效成分进行分析比较，得出陕西安康的地理条件较适宜盾叶薯蓣的生长，为盾叶薯蓣GAP的制定提供依据。

［1］黄亚辉，盛效邦.盾叶薯蓣植物学研究进展与展望［J］.中国中药杂志，2005，30（23）：1806-1808.

［2］王 辉，胡长鹰，庞自洁，等.盾叶薯蓣中甾体皂苷的研究［J］.中草药，2009，40（1）：36-39.

［3］秦松云，丁季春，舒 抒，等.中国盾叶薯蓣资源现状及保护对策［J］.资源开发与市场，2004，20（4）：263-265.

［4］刘中博，王铁杰，卢忠强，等.HPLC法同时测定穿龙薯蓣中薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷［J］.中草药，2008，39（5）：774-776.

［5］荆文光，张启伟，刘 安.HPLC测定黄山药中伪原薯蓣皂苷的含量［J］.中国中药杂志，2009，34（20）：2616-2618.

［6］刘 咏，任凤莲，禹文峰.黄姜中薯蓣皂苷元的提取、纯化及其鉴定［J］.广州化学，2006，31（3）：24-27.

［7］荆文光.黄山药化学成分及质量标准研究［D］.北京：中国中医科学院中药研究所，2007.

［8］谢彩侠，高山林，秦惠贞.不同产地来源的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量分析［J］.河南中医学院学报，2009，24（1）：58-60.

［2016－06－16收稿，2016－07－13修回］ ［本文编辑：刘一洋］

Comprehensive evaluation and comparison on the quality of Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright from different growing areas

ZUO Chun－fang①，LV Ya－xin，ZHANG Xian－liang.①The 150th Central Hospital of PLA，Luoyang，Henan 471031，China

Objective To draw comprehensive evaluation and comparison on the quality of Dioscorea zingiberensis C.H.Wright from three growing areas.MethodsHPLC method was used to detect 12 batches of shield in dioscin，Pseudoprodioscin，Diosgenin content，then the obtained results were compared.ResultsThe samples from were respectively as：Hubei YunXi，Shaanxi ankang，Huna anhua，dioscin content range of 0.4752%－0.8931%，Pseudoprodioscin content 0.7348%－1.0023% and diosgenin content range of 2.3384%－5.6641%.In effective components from the origins of the Dioscorea zingiberensis C.H.Wright there was relatively significant difference（P＜0.05）.ConclusionGeographical conditions on the content of active ingredients of the medicinal materials have a significant impact.From Shaanxi ankang region the effective component contents were all higher in the Dioscorea zingiberensis C.H.Wright，and the quality is good，so do provide basis for the establishment of GAP of Dioscorea zingiberensis C.H.Wright.

Dioscorea zingiberensis C.H.Wright；Growing area；HPLC；Quality evaluation

10.14172/j.issn1671－4008.2016.12.022

R282.5

A

河南省高等学校青年骨干教师资助计划 （2010GGJS－134），河南省教育厅自然科学研究项目资助（2011A360021）

471031河南洛阳，解放军150医院（左春芳，吕亚新）；472400河南三门峡，解放军72660部队（张贤良）

地理条件对药材的有效成分的含量有显著的影响，由该实验得出陕西安康地区的盾叶薯蓣中3种有效成分含量均较高，质量较好，为盾叶薯蓣GAP的制定提供依据。