沙丁胺醇的检测方法研究进展

李政清， 聂 婉， 伍晓红， 陈秋玲， 王琤*

（江西科技师范大学生命科学学院，江西南昌330013）

检测分析

沙丁胺醇的检测方法研究进展

李政清， 聂 婉， 伍晓红， 陈秋玲， 王琤韦华*

（江西科技师范大学生命科学学院，江西南昌330013）

沙丁胺醇是β-兴奋剂的一种，在临床应用中能有效地治疗支气管哮喘、肺气肿等常见哮喘类呼吸道疾病。在畜牧业中能提高瘦肉率，但由于β-兴奋剂易产生残留而危害食用者的身体健康，因此大部分国家通过立法以禁止β-兴奋剂的使用。本文就β-兴奋剂中沙丁胺醇的危害以及常用检测方法作一简述。

沙丁胺醇；检测；方法

1 沙丁胺醇的作用与危害性

沙丁胺醇化学名为1-（4-羟基-3-羟甲基苯基），属于β-兴奋剂的一种。添加5～10倍剂量的沙丁胺醇可增强蛋白质的合成和脂肪组织代谢能力（王振玲等，2014），从而达到提高饲料利用率、改善肉质（赵德明，2008；Zhang等，2007）、促进禽类生长的目的（黄素文等，2007）。沙丁胺醇易在人和动物的内脏、器官中残留（Shelver等，2003），产生的毒性对心脏、肝脏、肾脏的危害较大（孙书刚等，2015），易使糖尿病、心脑血管疾病病人病情恶化，严重危害人们的身体健康。近年来发生多起沙丁胺醇中毒事件（胡萍，2008）。因此，高效、实用的检测方法对畜产品安全有着重要的作用（Wang等，2006），本文就猪肉以及猪尿中的沙丁胺醇检测方法作一概述。

2 沙丁胺醇的检测方法

2.1 感官检测法 正常生猪色泽淡红，肉质具有良好弹性，不易渗血。长期使用沙丁胺醇饲喂的生猪皮肤光亮、色泽光鲜，毛较少，臀部圆润且上翘，伤口不易愈合，易跛足，及蹄部易感染，易渗血等（毕玉香，2009）。另外，其瘦肉率高、脂肪少、肌肉饱满、瘦肉纤维疏松。感官检测法对人员的技术要求比较低，适用于各种人员，但会因每个人的判定标准不同而产生误判。

2.2 酶联免疫吸附法 酶联免疫吸附法（ELISA）是当前最常用的检测方法之一，也是当前分析化学的重点研究方向。酶联免疫吸附法的原理是用酶复合物和抗体结合，从而产生显色反应以检测沙丁胺醇是否存在，酶联免疫法的检测限为0.1 ppb（Sawayawn，2000），灵敏度较高。沙丁胺醇的分子结构与莱克多巴胺相似，检测时容易产生交叉反应。为了建立沙丁胺醇直接竞争酶联免疫法，王俊平等（2011）使用沙丁胺醇多克隆抗体进行了试验，结果所获得IC15的值为0.05 ng/mL，具有较高的灵敏度。酶联免疫法具有检测时间短、操作简单、见效快等优点，目前可作为一个快速检测方法，并不能作为确证方法。

2.3 胶体金免疫法 胶体金免疫法（GIFA）是以胶体金为示踪物，对沙丁胺醇进行快速检测的方法。其原理为在硝酸纤维素膜上加入待测样品，以液体的胶体金为标记抗体，对渗滤膜中形成的抗体抗原复合物进行检测，如果试验结果为阳性，硝酸纤维素膜上会有红色斑点显现（吴巧丽和叶春生，2012）。彭涛等（2015）利用胶体金免疫层析法对猪尿中的沙丁胺醇进行了快速检测，其检测限为0.83μg/L，回收率为86.6%～109.7%。韩京朋等（2014）对猪尿中的沙丁胺醇建立了胶体金检测法，用时5 min，可检测出猪尿中的SAL，检测限为3.0μg/L。由此可见，胶体金免疫法具有操作简便、见效迅速、成本低廉的优点。但此法只能作为初步的筛选方法来确定样品是否含有β兴奋剂，并不能准确的检测出样品中是否含有沙丁胺醇。

2.4 色谱法

2.4.1 气象色谱-质谱法 气象色谱-质谱法（GC-MS）是一种可定性和定量的检测方法，其在检测样品中沙丁胺醇含量的应用中已十分成熟。在使用气相色谱法检测样品中的沙丁胺醇时，通常要经过处理、净化、衍生三个步骤 （管健等，2007）。王建平等（2007）对猪肝中的沙丁胺醇建立了免疫亲和色谱-气相色谱/质谱法，又称IAC-GC/MS法，检测限为0.5 ng/g，定量限为2 ng/g，回收率为78.4%～106.9%。气相色谱法检测精准度高、灵敏度高、稳定性强（Shen等，2005），但是实验仪器昂贵，不能普及使用，检测时间慢，不适合快速检测，而且气相色谱法操作难度大，对实验人员的技术操作与专业知识要求较高。

2.4.2 反相高效液相色谱-紫外法 反相高效液相色谱-紫外法是利用含有沙丁胺醇的溶液在紫外下特定的吸收波长，用紫外分光光度计对其进行波长扫描，会有一条特异的峰型曲线。秦永平（2003）等对血浆中的沙丁胺醇建立了反相高效液相色谱-紫外法，以吗啡为内标，采用Ultraspher Cyano分析柱（250 mm×4.6 mm，5μm），乙腈∶甲醇∶0.025mol/L磷酸铵缓冲液 （2∶0.5∶97.5）为流动相，在224 nm波长下检测离子萃取纯化后的样品，按内标法进行定量，标准曲线在0.5～32μg/L内有良好线性关系，最低检测浓度为0.3μg/L，萃取回收率为93%～99%，方法回收率为98%～109%，批内RSD小于5%，批间RSD小于8%，回收率高。

2.4.3 高效液相色谱-二极管阵列检测法 高效液相色谱-二极管阵列检测法是当前沙丁胺醇检测法中一种较为重要的检测方法，二极管阵列检测器工作原理是组分选择性吸收通过样品池的复色光进入单色器，然后照射在二极管阵列装置上，二极管阵列装置把光信号转化为电信号，从而获得特定组分的成分。戴华等（2003）在检测饲料中的盐酸克伦特罗与沙丁胺醇时利用了高效液相色谱-二极管阵列检测法，测得盐酸克伦特罗、沙丁胺醇的定量下限分别为0.10、0.36mg/kg，回收率分别大于88%、74%，RSD（n=5）分别小于6.4%、3.0%。尚红霞等（2003）在检测饲料中沙丁胺醇含量时使用了Amberlite XAD-2大孔吸附树脂进行固相萃取，解决了萃取时产生的乳化问题，取得了良好的试验结果。这种检测方法的优点在于检测精确度高、噪音低、成本低、易于操作和推广、可提供组分的定性信息（Korfmachen，2005），而且还可以得到任意时间的光谱图。

2.4.4 高效液相色谱-串联质谱法 高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS）也是沙丁胺醇的常用检测法之一，该方法采用乙酸铵缓冲液酶以及经混合阳离子交换柱净化的提取液解提血浆中的目标化合物，再采用超高效液相色谱对化合物进行检测。此法对猪肝中的沙丁胺醇含量检测可精确到0.1μg/kg。为了检测动物血液中的沙丁胺醇含量，王凤美等（2015）对其建立了高效液相色谱-串联质谱法，线性相关系数均大于0.99，测定低限为0.5μg/kg，说明沙丁胺醇回收良好。谷丽丽等（2010）利用高效液相色谱-串联质谱法对病理小鼠的肝脏进行检测，并对其建立病理模型，可以详细的观察出沙丁胺醇的含量以及变化趋势，并且其精确度、灵敏度都较高 （Josefsson等，2006；Spyridaki等，2006）。但是质谱仪操作复杂，仪器昂贵，不易普及使用。

3 小结

沙丁胺醇的检测方法在日益发展，检测灵敏度和精确度也在不断的提高。相信随着科技的不断进步，沙丁胺醇的检测技术会变的越来越成熟，检测方法会更加精确、简单。

[1]毕玉香.瘦肉精的残留危害及监控对策 [J].畜牧兽医科技信息，2009，4 （6）：136.

[2]戴华，袁智能，黄志强，等.饲料中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇高效液相色谱测定[J].分析测试学报，2003，22（3）：57～60.

[3]管健，王立媛，吴平谷，等.同位素作内标气质联机测定动物源食品中4 种β2-兴奋剂的含量[J].中国卫生检验杂志，2007，17（12）：2194～2196.

[4]谷丽丽，李飞，牛英豪，等.沙丁胺醇的病理作用研究及其液相色谱-串联质谱方法的检测[J].食品科学，2010，31（3）：224～229.

[5]韩京朋，吴小平，邱检萍，等.动物尿液中沙丁胺醇残留检测试纸条的研制[J].黑龙江畜牧兽医，2014，7：174～176.

[6]胡萍，余少文，李红.中国13省1999年—2005年瘦肉精食物中毒个案分析[J].深圳大学学报（理工版），2008，25（1）：1～6.

[7]黄素文，周宏斌，赵秀玲，等.饲料中沙丁胺醇快速检测技术研究[J].中国饲料，2007，17：30～31.

[8]彭涛.胶体金免疫层析法快速定量检测猪尿中β2-受体激动剂残留的研究：[硕士学位论文][D].江西南昌：南昌大学，2015.

[9]秦永平，邹远高，梁茂植，等.柱切换-反相高效液相色谱法测定血浆中沙丁胺醇浓度[J].四川大学学报（医学版），2003，3：576～579.

[10]尚红霞，张智，周晓辉.用高效液相色谱法分析克仑特罗和沙丁胺醇[J].化学世界，2003，44（8）：412～415.

[11]孙书刚，李建伟，张富刚，等.沙丁胺醇及其常用检测方法[J].中国畜牧业，2015，3：57～58.

[12]王凤美，何京橙，张鸿伟，等.超高效液相色谱-串联质谱法检测动物血浆中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇[J].食品安全质量检测学报，2015，12：5024～5028.

[13]王建平，史为民，沈建忠.免疫亲和色谱-气相色谱／质谱法（I-ACGC/MS）检测猪肝中的沙丁胺醇与克伦特罗 [J].畜牧兽医学报，2007，38 （3）：271～275.

[14]王俊平，赵云襄，王硕，等.沙丁胺醇直接酶联免疫快速检测的方法[J].食品研究与开发，2011，32（2）：97～100.

[15]吴巧丽，叶春生.胶体金免疫层析技术快速检测沙丁胺醇残留[J].现代食品科技，2012，11：1595～1599.

[16]王振玲，章丽娇，段跃强，等.猪轮状病毒的分离与电镜观察[J].畜牧与兽医，2014（1）：74.

[17]赵德明.猪病学[M].北京：中国农业大学出版社，2008：493.

[18]Josefsson M，Sabanovic A.Sample preparation on polymeric solid phase ex-traction sorbents for liquid chromatograph-ic-tandem mass spectrometric analysis of human whole blood—A study on a number of beta-agonists and beta-antagonists[J].JChromatogr A，2006，1120（12）：1～12.

[19]Korfchen W A.Foundation review：Principlesand applicationsof LC-MS in newdrug dicovery[J].Drug Discov Today，2005，10：1357.

[20]Sawayawn，Lone，Husain A，et al.Screening forβ-agonists in sheep urine and eyesby an enzyme-linked immunosorbent assay in the state of Kuwait[J]. Food Control，2000，11：1～5.

[21]Shen S H，Ouyang J，BaeyensW R G，et al.Determ ination ofβ-agonistsby ion chromatography w ith direct conductivity detection[J].JPharmaceuti-calandBiomedical Analysis，2005，38：166～172.

[22]Shelver W L，Sm ith D J.Determ i-nation of Ractopam ine inCattle and Sheep U rine Samples Using an Optical BiosensorAnalysis：Comparative Study w ith HPLC and ELISA [J].Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2003，51：3721～3751.

[23]SpyridakiM H，Vonaparti P K A，Vala-vani P，et al.Doping control analysis in hu-man urine by liquid chromatography-elec-trospray ionization ion trap mass spectrome-try for the OlympicGamesAthens2004：Determinationof corticosteroids and quan-tification of ephedrines，salbutamol andmorphine[J]. Anal ChiMacta，2006，573（1）：242～249.

[24]W ang JP，Li X W，ZhangW，et al.Development of immunoaffinity sample-purific-ation for GC-MS analysisof ractopam ine in sw ine tissue[J].Chromatographia，2006，64（9）：613.

[25]ZhangY T，Zhang Z J，Sun Y H，et al.Development of analyticalmethod for thedeterm ination ofβ-agonist residuesin animal tissues by high-performanceliquidchromatography w ith on-line electrogenerated[Cu（HIO 6）2]5—-lum inol chem ilum inescencedetection [J].Journalof agriculture andfood chemistry，2007，55（13）：4949～4956.

Salbutamol sulfate is a kind of beta adrenergic agonists，which have effective treatment of bronchial asthma，emphysema and other common asthma respiratory diseases in the clinical.In animal husbandry，salbutamol can effectively improve the rate of leanmeat，while due to beta doping particularly prone to produce residual and harm the health of the human body，most countries legislation prohibit the use of stimulants beta.In this paper，the dangers of salbutamol and its detectionmethodswere reviewed.

salbutamol；detection；methods

S816.17

A

1004-3314（2017）01-0033-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170107

*通讯作者