白介素-1受体相关激酶-M在系统性红斑狼疮患者单核细胞中的表达及与临床的相关性①

胡同平 白 力 张文兰

(包头医学院风湿免疫研究所，包头医学院第一附属医院，内蒙古自治区自体免疫学重点实验室，包头014010)

白介素-1受体相关激酶-M在系统性红斑狼疮患者单核细胞中的表达及与临床的相关性①

胡同平 白 力 张文兰②

(包头医学院风湿免疫研究所，包头医学院第一附属医院，内蒙古自治区自体免疫学重点实验室，包头014010)

目的：研究白介素-1受体相关激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinases M，IRAK-M)在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者单核细胞中的表达情况及与临床的相关性。方法：采用实时荧光定量PCR技术，检测SLE组和健康对照组单核细胞中IRAK-M的mRNA表达量；采用酶联免疫吸附试验法检测抗双链DNA抗体(dsDNA)和抗单链DNA抗体(ssDNA)；采用动态免疫散射比浊法测定补体3(C3)、补体4(C4)和C-反应蛋白(CRP)；采用魏氏法测定红细胞沉降率(ESR)。同时，使用Pearson或Spearman分析IRAK-M与SLEDAI评分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相关性。结果：①SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于健康对照组(P<0.05)，活动期SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于稳定期SLE组(P<0.05)。 ②SLE组dsDNA、ssDNA、CRP和ESR水平明显高于健康对照组(P<0.05)，C3和C4水平明显低于健康对照组(P<0.05)；而且，活动期SLE组dsDNA、ssDNA、CRP和ESR水平明显高于稳定期SLE组(P<0.05)，C3和C4水平明显低于稳定期SLE组(P<0.05)。③相关分析显示：IRAK-M的mRNA表达量与C3成正相关(P<0.05)，与SLEDAI评分、dsDNA、CRP、ESR呈负相关(P<0.05)，与ssDNA和C4无相关性(P>0.05)。结论：IRAK-M在SLE发病机制中起着重要的作用；定量检测IRAK-M的mRNA表达量可监测SLE疾病活动度和判断预后。同时，对SLE患者dsDNA、ssDNA、CRP、C3、C4和ESR水平的常规检测和定期监测是非常必要的。

系统性红斑狼疮；白细胞介素-1受体相关激酶-M；SLEDAI评分

系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus，SLE)是一种可累及多系统、多器官的自身免疫性疾病[1]。迄今为止，其确切的发病机制尚不清楚，与遗传、环境、雌激素、免疫紊乱等多种因素有关，引起B细胞功能的亢进，自身抗体的生成，免疫复合物的沉积，T细胞及NK细胞功能的失调，最终导致SLE的发生[2]。白介素-1受体相关激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinases M，IRAK-M)是Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)信号途径中的负性调节因子，在多种感染性及非感染性疾病中，可通过抑制前炎症因子的产生而调节免疫自稳和免疫耐受[3]。本研究采用实时荧光定量PCR技术，检测SLE组和健康对照组单核细胞中IRAK-M的mRNA表达量，同时采用酶联免疫吸附试验法检测抗双链DNA抗体(dsDNA)和抗单链DNA抗体(ssDNA)，动态免疫散射比浊法测定补体3(C3)、补体4(C4)和C-反应蛋白(CRP)，魏氏法测定红细胞沉降率(ESR)，使用Pearson或Spearman分析IRAK-M与SLEDAI评分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相关性，探讨其在SLE发病机制中的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2015年1月～2016年4月我院风湿免疫科门诊和住院患者及门诊健康体检者。(1)SLE组包括128例SLE患者，均为初次发病患者，未经过糖皮质激素及免疫抑制剂治疗。其中男性18例，女性110例，年龄17～71岁，平均年龄(41.38±11.17)岁。皆按美国风湿病协会1982年诊断标准及1997年修订诊断标准确诊。并按SLEDAI评分(≥10分为活动期，<10分为稳定期)，将SLE患者进一步分为疾病活动组(68例)和疾病稳定组(60例)。(2) 健康对照组50例，男性8例，女性42例，年龄18～69岁，平均年龄(42.51±10.26)岁。

1.2 研究方法 SLE组和健康对照组均于清晨空腹抽取静脉血，分别注入3个管，一管为EDTA抗凝管2 ml，一管为普通干燥管4 ml，一管为枸橼酸钠抗凝管2 ml。EDTA抗凝管采用Ficoll梯度密度离心法分离提取单核细胞，保存于-70℃冰箱内。应用人基因RNA提取试剂盒按照说明书进行单核细胞RNA提取，-20℃冰箱保存。实时荧光定量PCR仪分别检测SLE组和健康对照组单核细胞中IRAK-M的mRNA表达量。普通干燥管分离的血清采用酶联免疫吸附试验法检测dsDNA和抗ssDNA，动态免疫散射比浊法测定C3、C4和CRP。枸橼酸钠抗凝管采用魏氏法测定ESR。

2 结果

2.1 SLE组和健康对照组IRAK-M的mRNA表达量 从表1可以看出，SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于健康对照组(P<0.05)，活动期SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于稳定期SLE组(P<0.05)。

2.2 dsDNA和ssDNA的结果 从表2可以看出，SLE组dsDNA和ssDNA水平均高于健康对照组(P<0.05)；活动期SLE组dsDNA和ssDNA水平均高于稳定期SLE组(P<0.05)。

2.3 C3和C4的结果 从表3可以看出，SLE组C3和C4水平均低于健康对照组(P<0.05)；活动期SLE组C3和C4水平均低于稳定期SLE组(P<0.05)。

2.4 CRP的结果 从表4可以看出，SLE组CRP水平高于健康对照组(P<0.05)；活动期SLE组CRP水平高于稳定期SLE组(P<0.05)。

2.5 ESR的结果 从表5可以看出，SLE组ESR水平高于健康对照组(P<0.05)；活动期SLE组ESR水平高于稳定期SLE组(P<0.05)。

GroupsnIRAK⁃MSLEpatients128369±0821)Activeperiod68252±0572)Stableperiod60458±071Healthycontrols50573±062

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsndsDNAssDNASLEpatients12839328±247641)12172±82851)Activeperiod6852141±212552)17125±63042)Stableperiod6021143±106774393±1849Healthycontrols501495±743448±222

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsnC3C4SLEpatients128063±0551)011±0091)Activeperiod68041±0232)008±0062)Stableperiod60103±037018±009Healthycontrols50135±063028±012

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsnCRPSLEpatients1283165±19621)Activeperiod685192±32552)Stableperiod601043±677Healthycontrols50315±222

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsnESRSLEpatients1284112±29581)Activeperiod686512±44362)Stableperiod602657±1653Healthycontrols50218±127

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

2.6 IRAK-M的mRNA表达量与SLEDAI评分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相关性分析 从表6中数据可以看出，IRAK-M的mRNA表达量与C3成正相关(P<0.05)，与SLEDAI评分、dsDNA、CRP、ESR呈负相关(P<0.05)，与ssDNA和C4无相关性(P>0.05)。

表6 SLE患者IRAK-M与SLEDAI、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相关性

Tab.6 Correlation of SLEDAI,dsDNA,ssDNA,C3,C4,CRP and ESR with IRAK-M

IndexrvaluePvalueSLEDAI-0227<005dsDNA-0392<005ssDNA-0808>005C30132<005C40534>005CRP-024<005ESR-016<005

3 讨论

SLE是一种免疫相关疾病，细胞免疫、体液免疫紊乱及自身抗体的产生是重要的致病因素。其临床表现差异很大，多种器官脏器均可受累，一旦病情发展恶化，最终可出现多器官衰竭而死亡，因此对SLE发病机制及诊断的研究显得十分重要。

TLRs是哺乳动物体内发现的一类与果蝇Toll蛋白具有同源性的受体家族，是固有免疫反应的模式识别受体，参与识别病原体、介导前炎症细胞因子的产生、启动免疫应答，为机体天然免疫的第一道防线。目前为止，已发现多种TLR信号通路的负向调控分子，包括 IRAK-M、SOCS-1、A20、Tank、SIGIRR及ST2等。IRAK-M对TLRs信号转导负性调控的机制，目前还不十分清楚。IRAK-M可能通过抑制IRAK-1的磷酸化，防止其与受体复合物分离，并促进IRAK-1、IRAK-4和MyD88之间的结合，进而对TLRs介导的信号通路起负性调控作用[4-6]。本研究显示，SLE患者组IRAK-M的mRNA表达量明显低于健康对照组(P<0.05)，而活动期SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于稳定期SLE组(P<0.05)，这表明，IRAK-M的mRNA表达量降低是SLE免疫紊乱的炎症状态下机体的反应，是SLE的结果，暗示着IRAK-M的缺乏与炎症反应增强和TLR信号通路激活有关，这也证明了IRAK-M的负性调节作用。

本文结果还显示，SLE患者和健康对照组相比较，无论是dsDNA、ssDNA，还是C3、C4，以及CRP和ESR水平，差异均有统计学意义(P<0.05)；而且，SLE活动期和稳定期的比较，也是差异有统计学意义(P<0.05)，因此，对患者进行这些指标的常规检测和对SLE患者定期进行这些指标的监测，是非常必要的。

IRAK-M的mRNA表达量与SLEDAI评分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相关性分析结果显示，IRAK-M的mRNA表达量与C3成正相关(P<0.05)，与SLEDAI评分、dsDNA、CRP、ESR呈负相关(P<0.05)，与C4、ssDNA无相关性(P>0.05)。这些结果显示，严密监测SLE患者单核细胞中IRAK-M的mRNA表达量对患者的临床诊疗有重要价值。

[1] 庞春艳,吕凤凤,尹芳蕊,等.CD40 siRNA对MRL/Lpr小鼠狼疮肾炎的治疗作用[J].中国免疫学杂志,2015,31(8):1089-1093.

[2] 陈海莲,杨晓娥.系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Toll样受体9和核因子-κB水平的测定及其临床意义[J].中国现代医学杂志,2016,26(11):63-67.

[3] Flavell R,Christman JW,Standiford TJ,etal.Glucocorticoids suppess inflammation via the upregulation of negative regulator IRAK-M[J].J Immunol,2015,6(5):6062-6065.

[4] 李君莉,张 权,程明亮.苗药防感香囊对小鼠肺组织IRAK-M、SOCS1基因和蛋白表达的影响[J].贵阳医学院学报,2014,39(5):706-708.

[5] Ballinger MN,Newstead MW,Zeng X,etal.IRAK-M promotes alternative macrophage activation and fibroproliferation in bleomycin-induced lung injury[J].J Immunol,2015,194 (4):1894-1904.

[6] Kobayashi K,Hemandez LD,Galhn JE,etal.IRAK-M is a negative regulator of Toll-like receptor signaling[J].Cell,2013,7(2):191-202.

[收稿2016-08-12]

(编辑 张晓舟)

Expression and clinical relevance of IRAK-M in monocytes in patients with systemic lupus erythematosus

HUTong-Ping，BaiLi,ZHANGWen-Lan.

InstituteofRheumatologyofBaotouMedicalCollege,theFirstAffiliatedHospitalofBaotouMedicalCollege,KeyAutoimmunityLabofInnerMongolia,Baotou014010,China

Objective:To study the expression and clinical relevance of IRAK-M in monocytes in patients with systemic lupus erythematosus.Methods: Real-time quantitative PCR was performed for IRAK-M mRNA measurement and enzyme-linked immunosorbent assay was used for anti-double-stranded DNA antibody(dsDNA) and anti-single-stranded DNA antibody (ssDNA).Dynamic scattering turbidimetric immunoassay was applied for complement 3(C3),complement 4(C4) and C-reactive protein(CRP),while Westergren method for erythrocyte sedimentation rate (ESR).Correlation analysis of IRAK-M with SLEDAI,dsDNA,ssDNA,C3,C4,CRP and ESR was computed by Pearson or Spearman.Results: ①The result showed that the mRNA expression of IRAK-M in SLE patients was significantly lower than healthy controls (P<0.05);and the mRNA expression of IRAK-M in active group was significantly lower than stable group (P<0.05).②The levels of dsDNA,ssDNA,CRP and ESR in SLE patients were significantly higher than healthy controls(P<0.05);and the levels of C3 and C4 in SLE patients were significantly lower than healthy controls(P<0.05).Meanwhile,the levels of dsDNA,ssDNA,CRP and ESR in active group were significantly higher than stable group (P<0.05),and the levels of C3 and C4 in active group were significantly lower than stable group (P<0.05).③Correlation analysis showed that the mRNA expression of IRAK-M had a positive correlation with C3 (P<0.05),and had a negative correlation with SLEDAI,dsDNA,CRP and ESR (P<0.05)，but had no correlation with ssDNA and C4(P>0.05).Conclusion: This study indicated that IRAK-M play certain significant roles in the pathogenesis of SLE.We can monitor SLE disease activity and prognosis by quantitative detection of mRNA expression of IRAK-M.Meanwhile,it is very necessary to routinely test and regularly monitor the levels of dsDNA,ssDNA,C3,C4,CRP and ESR in SLE.

SLE;IRAK-M;SLEDAI

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.02.019

①本文为国家自然科学基金(No.81360464)和内蒙古自治区高等学校科学研究项目(No.NJZY12219)。

胡同平(1976年-)，男，硕士，副主任检验师，主要从事自身抗体的实验室检测研究，E-mail：hutongping1976@126.com。

R446.62

A

1000-484X(2017)02-0256-04

②通讯作者，E-mail：zwl20051001@126.com。