左甲状腺素钠片的含量测定方法学研究

王东欣

（哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心）

摘 要：目的：研究并验证HPLC法检测左甲状腺素钠片的含量的测定方法。方法：采用氰基硅烷键合硅胶；以乙腈-水-磷酸（300：700：1）为流动相；检测波长为225nm。结果：方法的专属性、准确度、精密度及耐用性良好；在左甲状腺素钠的进样量为50.6ng～506ng范围内，进样量与色谱峰面积线性关系良好，平均回收率为99.98%，RSD为0.99%（n=9）。结论：本方法简便、快速、灵敏，可有效检测左甲状腺素钠片的含量。

关键词：左甲状腺素钠；含量；HPLC

左甲状腺素钠，化学名为O-（4-羟基-3，5-二碘苯基）-3，5-二碘-L-酪氨酸单钠盐，为白色或微黄色结晶性粉末；无臭，无味；微有引湿性，是一种人工合成的四碘甲状腺原氨酸钠盐，主要作用有：①维持人体的正常生长发育，在生长发育期避免由于甲状腺功能不足导致的身体矮小、肢体短粗、发育缓慢、智力低下等问题，避免成年人甲状腺功能不全时导致的黏液性水肿。②促进机体的代谢并增加产热。③有效提高交感肾上腺系统的感受性。在临床上适用于甲状腺激素缺乏的替代治疗。

国家药典委员会发布了左甲状腺素钠片国家标准征求意见稿，标准中采用高效液相色谱法检测左甲状腺素钠片的含量，本研究将对该方法进行详细的方法学研究，以判断该方法是否适合于左甲状腺素钠片的产品质量控制。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（安捷伦1260）；色谱柱：以氰基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；左甲状腺素钠片（规格：25μg，批号：160501、160502、160503，实验室自制）；左甲状腺素钠对照品（含量为87.6%，批号：410006-201301），碘塞罗宁对照品（含量为99.2%，批号：410013-201501），均购自中检所。

乙腈、甲醇均为色谱级；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

本品含量检测方法参照国家药典委员会发布的左甲状腺素钠片标准征求意见稿中色谱条件进行。

2.1 色谱条件

色谱柱：以氰基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；以乙腈-水-磷酸（300：700：1）为流动相；检测波长为225nm；流速：1.0ml/min；进样量50μl。

2.2 供试品溶液的制备

取左甲状腺素钠片样品10片，分别加入到5ml量瓶中，加入0.02mol/L氢氧化钠溶液-甲醇（1：1）的混合溶液2ml，超声约5分钟使左甲状腺素钠溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，振摇使混合均匀，离心，取上清液作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取左甲状腺素钠对照品适量（约10mg），加入到100ml容量瓶内， 加0.02mol/L氢氧化钠溶液-甲醇（1：1）混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，加入20ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 混合对照品溶液的制备

取左甲状腺素钠和碘塞罗宁对照品适量，加0.02mol/L氢氧化钠溶液-甲醇（1： 1）混合溶液溶解并稀释制成每1ml中各约含100μg 的溶液，取1ml，再用流动相定量稀释制成每1ml中各约含5μg 的溶液，作为混合对照品溶液。

2.5 系统适用性试验

精密量取混合对照品溶液50μl注入色谱仪，记录色谱图，理论板数按左甲状腺素峰计算不得低于2000，左甲状腺素峰与碘塞罗宁峰的分离度不得小于4.0。

结果：左甲状腺素峰与碘塞罗宁峰的分离度符合要求，左甲状腺峰理论板数符合要求。

2.6 专属性实验

按照处方量精密称量本品中的辅料，按照供试品溶液的稀释方法配制辅料空白溶液，精密量取50μl注入色谱仪，记录色谱图。

结果：辅料和溶剂在左甲状腺素出峰处无干扰。

2.7 溶液稳定性试验

取供试品溶液分别于0、1、2、4、6小时进样，考察各时间点左甲状腺素钠峰峰面积的RSD%，验证供试品溶液的稳定性。

结果：左甲状腺素峰面积6小时内RSD为0.7%，结果表明左甲状腺素钠溶液在6小时内稳定性良好。

2.8 左甲状腺素钠线性试验

精密称取左甲状腺素钠对照品适量，分别配制成每1ml分别含左甲状腺素钠浓度为1μg、3μg、5μg、8μg、10μg的混合对照溶液，分别进样50μl，记录谱图。以左甲状腺素钠的峰面积为纵坐标，以左甲状腺素钠对照品的进样量为横坐标，计算线性回归方程及相关系数。

结果：左甲状腺素钠线性方程为：y=2057.4x-4776.8，r=0.9999；表明该方法左甲状腺素钠进样量在50.6ng～506ng范围内线性关系良好。

2.9 定量限试验

取2.8项下左甲状腺素钠对照品溶液，继续进行稀释，分别精密量取50μl进样，以左甲状腺素钠峰的信噪比10：1时浓度计算进样量为检测限。

结果：当左甲状腺素钠色谱峰信噪比即约为10：1时，根据该稀释倍数下的左甲状腺素钠对照品溶液浓度计算出左甲状腺素钠的检测限为0.506ng。

2.10 回收率试验

按照本品处方配比，分别精密称取左甲状腺素钠对照品和辅料各9份，分成3组，按照供试品溶液稀释方法配制，使每1ml溶液中含左甲状腺素钠对照品的加入量分别为4μg、5μg、6μg，并按照规定的方法配制对照品溶液，精密量取各溶液50μl，按照规定的检测方法分别进样检测，记录谱图，计算回收率。

结果：平均回收率为99.98%，RSD为0.99%，说明本方法耐用性较好。

2.11 中间精密度试验

取左甲状腺素钠片，按照标准中规定的检测方法分别由不同人员、不同仪器、不同日期按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。

结果：不同人员、不同仪器、不同日期分别检测左甲状腺素钠含量结果间RSD为1.06%，表明本方法中间精密度良好。

2.12 重复性试验

取左甲状腺素钠片，按照标准中规定的检测方法配制各溶液，共6份，按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。

结果：左甲状腺素钠片6次含量测定结果间RSD为1.12%，表明本方法重复性良好。

2.13 耐用性试验

取左甲状腺素钠片，按照标准中规定的配制方法配制各溶液，分别调整流动相的比例分别为（295：705：1）、（300：700：1）、（305：695：1）；调整高效液相色谱仪泵流速为1.0ml/min、0.8ml/min、1.2ml/min；调整检测波长分别为225nm、223nm、227nm；分别精密量取以上各溶液50μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，考察耐用性。

结果：液相各检测条件轻微改变后，左甲状腺素峰与碘塞罗宁峰分离度均符合要求，左甲状腺素钠含量检测结果无明显差异，说明本方法耐用性较好。

2.14 左甲状腺素钠片含量测定

取三批样品，检查左甲状腺素钠含量，结果分别为100.2%、99.3%、99.3%。

3 讨论

本品的含量测定参照国家药典委员会左甲状腺素钠片标准征求意见稿中方法进行检查。方法学验证结果表明，方法的专属性、准确度、中间精密度、重复性、耐用性较好，检测灵敏度较高。该方法简便、快捷，可準确检测左甲状腺素钠片的含量。

参考文献：

[1] 国家药典委员会，左甲状腺素钠片标准征求意见稿.