正交设计法探讨黑木耳多糖的提取

张星和+符翠丽

（保山学院 云南 保山 678000）

摘 要：探讨了利用酶解法从黑木耳中提取多糖的不同因素的影响，通过正交试验确立了酶法提取多糖的最佳条件为：酶解时间60min，温度50 ℃，pH为5.0，料液比1：：80，反复提取三次，多糖提取率达到15.64%。

关键词：酶法；黑木耳；正交设计

黑木耳是我国著名的药用和食用的胶质真菌，是木耳系真菌类担子菌纲。经常食用木耳， 可益气养神、滋阴润燥，增强抵抗力。多糖是一类具有广泛活性的生物大分子，又叫多聚糖。多糖不仅仅是人体生命必需的成分，也存在于一切细胞膜结构中，参与多种生命活动。木耳多糖是黑木耳的活性成分之一，其生物活性越来越受到重视[1]。多糖的提取方法有很多种。水浸提法操作简单，可是耗能多，耗时长，提取效率较低[2]。本文通过正交实验对黑木耳多糖酶法提取的条件进行了优化。

1.材料与方法

1.1 材料与设备

黑木耳购于保山金方超市；纤维素酶（BR，30U/mg，上海博奥生物科技有限公司）；其他试剂均为分析纯。

HH-S26s数显恒温水浴锅；GUO HUA 800低数离心机； JH-14-07 A-14-07-161型可见分光光度计；DFT-200型手提式高速万能粉碎机；DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥箱等。

1.2 多糖含量的测定

目前，多糖的测定方法主要有蒽酮硫酸法和苯酚-硫酸法[3-4]，本实验采用第二种方法，以干燥至恒重的葡萄糖为标准品。

1.3 木耳多糖的制备

准确称取过60目筛的木耳粉末若干于圆底烧瓶中，加少量蒸馏水浸泡24h，加入一定量的酶溶液并调pH值，放入恒温水浴锅中酶解一段时间后取出，离心得上清液。再将剩余沉淀重复酶解两次，合并上清液。放入90℃的水浴锅中灭活10min，冷却。用80%乙醇沉淀，离心得粗多糖，待显色后于490nm出测定吸光度A。

1.4 粗多糖提取率计算

多糖得率（%）=（多糖含量/原料重量）×100%

1.5 酶法提取的正交实验

影响多糖提取率的因素很多，如酶的添加量，反应时间，反应温度及其pH值。针对这些因素，采用四因素三水平的正交实验确定木耳多糖酶解法提取的最佳条件，具体参数见表1。

2. 结果与讨论

2.1 葡萄糖标准曲线

由实验得出的结果以葡萄糖浓度为横坐标（x），吸光度（y）为纵坐标绘制葡萄糖标准曲线如图1所示。

标准曲线回归方程为y=0.5021x+0.0163，R2=0.994，线性关系良好。

2.2 酶法提取条件的优化

取样品每份0.200g，按照L9（34）分9组实验，得到的数据如表2所示。

由直观分析可知，RB>RC>RD>RA，四个影响多糖提取率的因素主次顺序，分别是B>C>D>A，即酶的添加量>酶解温度>pH>酶解时间，最佳参数为A1B3C3D3，即以料液比1：80，在pH為5.0的缓冲溶液中，回流提取60min，提取温度定为50℃，反复提取三次，多糖提取率最高。按照最佳反应条件进行三次验证实验，结果木耳多糖的提取率为15.64%，较最高3号样14.51%高。

3. 结论

本文采用纤维素酶解新方法提取木耳多糖，该工艺通过酶水解破坏植物细胞壁的作用，可以使细胞内的多糖物质充分溶出，从而显著提高了橘皮多糖提取率。

为进一步优化酶解法提取多糖实验条件，本实验用L9（34）正交表考察了酶添加量（液料比）、酶解温度、酶解时间以及pH4个因素对提取率的影响。在最佳条件下，纤维素酶法提取木耳多糖的提取率为15.64%。

参考文献

[1]张立娟，于国萍. 黑木耳多糖酶法提取条件的优化及脱蛋白工艺的研究[J]. 食品工业科技，2005，26（5）：109-111.

[2]赵宇， 彭晓霞. 多糖类化合物提取工艺研究[J]. 医药卫生，2006，35（2）：223-224.

[3]刘晓涵. 蒽酮硫酸法与苯酚硫酸法测定枸杞子中多糖含量的比较[J]. 食品科技，2009，34（9）：270-272.

[4]杨贤庆， 刘名求， 戚勃等. 龙须菜中含量测定方法的比较研究[J]. 食品工业科技，2013（22）：54-57.