耐碳青霉烯类肠杆菌细菌的耐药基因研究

张丽娟

532200崇左市人民医院检验科

耐碳青霉烯类肠杆菌细菌的耐药基因研究

张丽娟

532200崇左市人民医院检验科

目的：分析耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的耐药情况及其耐药基因，为临床防治CRE感染提供依据。方法：收集肠杆菌科细菌6 321株，采用PCR检测技术检测KPC、IMP、VIM，并测序分析基因型别。结果：经检测，6 321株肠杆菌科细菌中含有耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌33株，检出率0.52%，在尿液、血液、痰液、胆汁、脓液中均有分布，其中痰液分布最多，为12株。耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌是多药耐药菌，对不同药物具有不同程度耐药率，其对氨苄西林、头孢唑啉、舒巴坦耐药率较高，分别为100.00%、90.91%、78.79%。结论：KPC和IMP为产碳青霉烯酶主要基因型，临床加强对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的监测具有重要意义。

CRE；KPC；IMP；耐药基因

碳青霉烯类抗菌药物(如亚胺培南、美罗培南等)是β内酰胺类最强抗菌药物，具有抗菌谱广、抗菌活性强等特点[1，2]。但近年来由于碳青霉烯类抗菌药物的滥用，导致其耐药菌株广泛蔓延，尤其耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的出现，使碳青霉烯类抗菌药物作为抗肠杆菌科细菌用药受到冲击[3]。CRE的耐药机制极为复杂，已在世界范围内引起广泛关注[4]。2013年4月-2015年10月收集肠杆菌科细菌6 321株，分离了不重复的CRE 33株，并检测其耐药相关基因。现分析结果，汇报如下。

资料与方法

2013年4月-2015年10月收集肠杆菌科细菌6 321株，用全自动细菌鉴定和药敏系统进行试验，按照2010年美国CLSI标准进行结果分析和判定。细菌标本来源：痰液、尿液、胆汁、脓液、血液。

试剂及仪器：Premix Taq、DNA Marker(DL-2000)，日本TaKaRa公司；Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统，法国生物梅里埃公司；ABI7500 PCR仪，美国ABI公司；电泳仪、凝胶成像分析系统，美国Bio-Rad公司。

PCR扩增与测序：采用PCR技术扩增对碳青霉烯酶基因，经加热煮沸提取细菌DNA，引物序列，见表1。

统计学方法：所有数据均采用SPSS 17.00软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验。P＜0.05时差异具有统计学意义。

结果

检出率及病原菌分布：2013年4月-2015年10月收集肠杆菌科细菌6 321株，检测到CRE33株，检出率0.52%，见表2。

CRE在临床标本中的分布及构成比：检测到的33株耐碳青霉烯类肠杆菌细菌在尿液、血液、痰液、胆汁、脓液中均有分布，其中痰液分布最多，为12株，见表3。

CRE对不同药物的耐药性：CRE对多数抗菌药物具有高度耐药性，为多药耐药菌，对不同药物具有不同程度耐药率，其对氨苄西林、头孢唑啉、舒巴坦耐 药 率 较 高 ， 分 别 为 100.00%、90.91%、78.79%，见表4。

基因检测结果：33株碳青霉烯酶基因检测阳性率达100.00%，其中KPC、MP阳性率见表5。

讨论

近年来，随着广谱抗菌药物的使用增加，细菌耐药性为抗感染治疗带来很大困难，现在已成为全球关注的重要公共卫生问题之一。CRE已有许多国家和地区报道，我国某些地区也出现过耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌暴发流行[5]。

碳青霉烯类抗生素正受到严峻考验，联合多种抗菌药物治疗的过程中，这类细菌面临新的选择压力[6]。为快速诊断CRE，临床实验室应建立一套耐药基因初筛体系。在使用碳青霉烯类抗生素时应审慎、合理，关注感控部门的耐药情况，采取有效措施预防医院感染的暴发。

本研究结果显示，CRE对多数抗菌药物具有高度耐药性，为多药耐药菌，对不同药物具有不同程度耐药率。因此，KPC和IMP为产碳青霉烯酶主要基因型，临床加强对CRE产碳青霉烯酶的监测具有重要意义。

表1 引物序列与产物长度

表2 CRE检出率及病原菌分布

表3 CRE在临床标本中分布及构成比

表4 CRE对不同药物的耐药性

表5 CRE碳青霉烯酶基因检测阳性率

[1]俞刚,张肖,沈静，等.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC和NDM-1β内酰胺酶耐药基因的研究[J].中国感染与化疗杂志,2014,14 (1):38-41.

[2]丁卉,丁茂文,陈丽珠,等.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的分布及耐药性分析[J].药物流行病学杂志,2014,(10):608-611.

[3]谢宁,郭斌,蔡燕，等.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因研究[J].中华医院感染学杂志,2015,25(24):5555-5558.

[4]白永凤,祝进,陆军,等.耐碳青霉烯酶肠杆菌科耐药基因及同源性分析[J].中华医院感染学杂志,2016,26(10):2176-2178.

[5]刘萍,闫雪苗,张坚磊,等.23株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因分析[J].山东医药,2016,56(24):91-93.

[6]董方,宋文琪,徐樨巍,等.对碳青霉烯类抗生素不敏感肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶基因型研究[J].中国感染与化疗杂志,2013, 13(4):270-274.

Study on the resistant genes of carbapenem-resistant enterobacteriaceae

Zhang Lijuan
Department of Laboratory,the People's Hospital of Chongzuo City 532200

Objective:To analyze the drug resistance of carbapenem-resistant enterobacteriaceae(CRE)and its drug resistance gene,to provide basis for clinical prevention and treatment of CRE infection..Methods:6 321 strains of enterobacteriaceae were collected.PCR detection technology was used for KPC,IMP,VIM,and gene type was sequencing analyzed.Results:Among the detection of 6 321 strains of enterobacteriaceae bacteria,there were 33 strains of carbapenem-resistant enterobacteriaceae,and the detection rate was 0.52%.They were distributed in urine,blood,sputum,pus,bile,most of them distributed in sputum with 12 strains. Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae were multidrug-resistant bacteria;different drugs had varying degrees of resistance;the resistance rates to ampicillin,cefazolin and sulbactam were 100.00%,90.91%,78.79%.Conclusion:KPC and IMP were the main genotypes of carbapenemases,to strength the monitoring of carbapenemases production of carbapenem-resistant enterobacteriaceae in clinical is importment.

CRE;KPC;IMP;Drug resistance gene

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.3.1