Survivin和VEGF在口腔鳞状细胞癌中的表达

薛梦姗

100038北京市海淀区羊坊店社区卫生服务中心口腔科

Survivin和VEGF在口腔鳞状细胞癌中的表达

薛梦姗

100038北京市海淀区羊坊店社区卫生服务中心口腔科

目的：探讨口腔鳞状细胞癌患者癌组织中Survivin、VEGF表达的相互关系，研究它们的表达与临床病理指标及预后的联系。方法：采用免疫组化S-P法检测相应口腔鳞状细胞癌组织及癌旁组织中Survivin、VEGF的表达情况。结果：Survivin、VEGF在口腔鳞状细胞癌组织中均呈高表达，二者在癌组织中的阳性表达(分别是81.2%、68.9%)均明显高于癌旁组织中的阳性表达(分别是31.2%、12.5%)(P＜0.05)，其阳性率高低与淋巴结转移、临床分期、分化程度有关。结论：口腔鳞状细胞癌组织中的Survivin、VEGF异常表达可能对口腔鳞状细胞癌中发生、发展起重要作用。

Survivin；VEGF；ELISA；口腔鳞状细胞癌

Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的一个新成员，位于染色体的17q25，长度75～130 kb，由1.9 kb的mRNA转录和编码。Survivin表达具有高度的特异性，在正常组织中不表达或低表达，而在多种肿瘤组织中表达，其主要通过抑制凋亡核心Caspase3和Caspase7，抑制细胞凋亡，使肿瘤细胞获得恶性增殖潜能。VEGF是一种血管内皮细胞特异性生长因子，是选择性有丝分裂原，它通过其受体，在体外促进内皮细胞生长，在体内诱导血管发生。国外已有研究表明，Survivin可能是血管形成中生长因子诱导的保护性基因，维护血管内皮细胞的正常增殖。国内学者已研究发现，Survivin可能借助阻抗细胞凋亡、维持并促进瘤体血管内皮细胞存活和血管生成等多种途径影响肿瘤的生物学行为。本文采用免疫组化S-P法检测其癌组织中Survivin和VEGF的表达，初探二者在口腔鳞癌发生发展中的相互关系。

资料与方法

2006年5月-2007年11月收治内蒙古医学院第一附属医院口腔颌面外科住院治疗的口腔鳞状细胞癌患者32例，取其手术切取的癌组织及相应的癌旁正常组织各1份。口腔鳞状细胞癌组织标本均取自瘤心，为手术切除后1 h内获得，获得后立即放入冰桶中送实验室-86℃保存。男18例，女14例，平均年龄58.2岁(37～76岁)。高分化鳞癌18例，中低分化鳞癌14例。

结果判定：实验设有阳性和阴性对照，用已知Survivin、VEGF阳性口腔鳞状细胞癌组织标本片作为阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。每张切片随机选取5个视野，利用Smartscape进行分析，平均灰度值大(染色强度弱、透光度强)，蛋白表达水平低，反之则增强。将平均灰度值50%～55%定强阳性，55%～60%阳性，60%～65%弱阳性。

统计学方法：采用SPSS 13.0进行分析，计量资料以(±s)表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，Fisher确切概率法检验；P＜0.05表示差异具有统计学意义。

结果

Survivin和VEGF在口腔鳞癌组织和癌旁组织中的表达：Survivin阳性染色主要定位在肿瘤细胞的胞质，也可见于淋巴细胞和血管内皮细胞，偶可见细胞的胞质和胞核同时着色。在32例口腔鳞癌组织中Survivin的阳性表达率为81.2% (26/32)，表达强度较高；在相应的癌旁组织中阳性表达率为31.2%(10/32)，其表达强度较低。Survivin在口腔鳞癌与癌旁组织中的阳性率相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。VEGF阳性染色主要定位在肿瘤细胞的胞质和细胞膜、肿瘤组织血管内皮细胞及基底膜、肿瘤基质中呈现棕色或深棕色，见图2和图3。在32例口腔鳞癌中VEGF的阳性表达率为68.9%(22/32)，其表达强度较高；在相应的癌旁组织中阳性表达率为12.5% (4/32)，其表达强度较低。VEGF在口腔鳞癌与癌旁组织中的阳性表达率相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。Survivin和VEGF在中低分化组阳性表达率高于高分化组(P＜0.05)，在临床分期的Ⅲ、Ⅳ期高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05)，VEGF在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P＜0.05)。且在伴有淋巴结转移组的Ⅲ、Ⅳ期口腔鳞癌患者Survivin和VEGF表达为强阳性，而Ⅰ、Ⅱ期仅较少表达或弱～中度阳性表达，见表1。

表1 Survivin和VEGF在口腔鳞癌组织的表达

图1 血清Survivin和VEGF间的相互关系

讨论

Survivin蛋白口腔鳞癌中的表达及意义：Survivin的表达具有细胞周期的特异性，选择性表达在细胞周期的G2/M期，在G2/M期表达基因内发现的细胞周期依赖元件(CDE)和细胞周期同源结构域(CHR)存在于Survivin基因的启动子内，该基因的CDE/CHR盒对G2/M期的细胞周期依赖基因的表达起到了调节的作用，所以Survivin的抗凋亡作用依赖于G2/M期的检查点。Survivin可与有丝分裂纺锤轴的微管结合，微管的运动可以对Survivin基因进行调节，但其过度表达时，不能与微管分离，就会出现持续抗凋亡。本试验采用免疫组化S-P法检测了相应癌组织及癌旁组织中的Survivin的表达，两者差异有统计学意义(P＜0.05)，癌组织中Survivin的表达与分化程度和临床分期密切相关。提示癌组织中Survivin的过度表达对口腔鳞癌的诊断有重要意义。推断Survivin的异常变化可能促进了口腔黏膜细胞的增殖和恶性转化；可能在口腔鳞癌浸润演进中发挥一定的作用，并有希望成为预测口腔鳞癌患者预后的指标之一。

VEGF在口腔鳞癌中的表达及意义：1983年，Senfer等发现了一种可使血管通透性增加的因子。目前发现的主要受体有VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。VEGF的作用非常广泛，在机体的胚胎发育、血管形成、创伤愈合、骨折修复过程中起着非常重要的作用，与肿瘤的生长、浸润、转移和预后之间具有密切的关系。肿瘤能够分泌多种促进血管生成因子，这些因子对血管的生成进行调节作用。VEGF是一种高度特异性的有丝分裂原，刺激血管生成，对血管的通透性进行诱导作用，从而导致纤维蛋白的降解。VEGF是目前发现的刺激肿瘤血管形成最重要的促进因子。人们一直认为，VEGF是以旁分泌的方式调节肿瘤的血管形成。但是越来越多的证据表明，肿瘤中可能存在VEGF的自分泌机制，从而对肿瘤细胞分化产生调节作用，对肿瘤细胞的凋亡发挥抑制作用，肿瘤细胞生成增多。国内有学者在人工合成的反义寡核苷酸抑制肝癌细胞VEGF的表达的研究中发现，反义寡核苷酸作用后的肝细胞肝癌细胞周期中G2期细胞比例升高，S期细胞比例下降且出现一小的凋亡前期峰，推测这可能是针对VEGF及其受体的抗肿瘤血管治疗的一个理论依据。本试验采用免疫组化S-P法检测了相应癌组织及癌旁组织VEGF的表达，癌组织中VEGF的表达显著高于相应的癌旁组织(P＜0.05)，与李恩孝结果相同。结合临床病理，癌组织中VEGF的表达与分化程度、淋巴结转移及临床分期密切相关。说明在大部分的口腔鳞癌中，VEGF有高表达的癌基因，与口腔鳞癌的发生、发展、预后之间关系密切。

Survivin与VEGF之间的关系：目前，研究表明Survivin参与了血管形成过程。已有体外实验结果证实，Survivin与VEGF均为G2/M期的调控分子。一方面，Survivin过度表达可使细胞克服此期凋亡调控点而利于完成异常的有丝分裂；同时，VEGF作为有丝分裂原可直接和(或)通过促进G2/M期Survivin的表达，对内皮细胞凋亡进行干扰，从而促进细胞增殖，生成血管。还有研究证明，VEGF的大部分抗凋亡特性是通过内皮上重新诱导Survivin来实现的。Survivin在有丝分裂的进程中独立地介入了内皮细胞的保护，这样反义抑制Survivin可以消除VEGF的抗凋亡功能，因而可潜在加速新生血管的退化和减少肿瘤转移的发生率。本试验采用免疫组化S-P法检测了其癌组织及相应的癌旁组织中的Survivin及VEGF蛋白的表达。结果显示，本研究组织中Survivin、VEGF表达强阳性在有伴有淋巴转移的晚期口腔鳞癌病例中，而早、中期口腔鳞癌仅较少表达或弱～中度阳性表达。由此推断联合检测原发肿瘤标本中Survivin和VEGF的水平有可能反映出整个口腔鳞癌的一般转移特性。

综上所述，Survivin和VEGF在口腔鳞癌的发生、发展过程中起协同作用，其机制可能与Survivin是血管形成中生长因子诱导的保护性基因，维护血管内皮细胞的正常增殖，而后者又反过来增强了Survivin的表达有关。口腔鳞癌组织中Survivin、VEGF表达强阳性在有伴有淋巴转移的晚期口腔鳞癌病例中，而早、中期口腔鳞癌仅较少表达或弱～中度阳性表达。推断Survivin和VEGF可能在口腔鳞癌发生发展过程中起协同作用。

Expression of Survivin and VEGF in oral squamous cell carcinoma

Xue Mengshan
Department of Stomatology,Yangfangdian Community Health Service Center of Haidian District,Beijing City 100038

Objective:To explore the interrelationship between the expression of Survivin and VEGF in cancer tissues of patients with oral squamous cell carcinoma,and to study the relationship between their expression and clinical pathological parameters and prognosis.Methods:The expressions of Survivin and VEGF in the cancer tissue and adjacent tissue of oral squamous cell carcinoma were detected by using immunohistochemistry S-P method.Results:Survivin and VEGF in oral squamous cell carcinoma tissue all showed high expression,and the positive expressions of two in cancer tissues(respectively 81.2%,68.9%)were significantly higher than the positive expressions(respectively 31.2%,12.5%)in adjacent tissue(P＜0.05).The positive rate high or low were related to the lymph node metastasis,clinical stages,and differentiation degrees.Conclusion:The abnormal expression of Survivin and VEGF in oral squamous cell carcinoma may play an important role in the occurrence and development of oral squamous cell carcinoma.

Survivin;VEGF;ELISA;Oral squamous cell carcinoma

图2 Survivin和VEGF在低分化口腔鳞癌中的表达

图3 Survivin和VEGF在高分化口腔鳞癌中的表达

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.3.56