血清高类风湿因子对胱抑素C检测的干扰

陈素芸王瑜伟(通讯作者)

400060武警重庆总队医院检验科1

400021重庆市中医院检验科2

血清高类风湿因子对胱抑素C检测的干扰

陈素芸1王瑜伟(通讯作者)2

400060武警重庆总队医院检验科1

400021重庆市中医院检验科2

目的：评估血清高浓度类风湿因子对胱抑素C检测的干扰。方法：利用抗原抗体反应原理，去除血清中的高浓度类风湿因子。处理前后标本同时检测血清胱抑素C。判断两组数据有无差异。结果：去除类风湿因子后的血清胱抑素C值明显下降，差异有统计学意义(P＜0.001)。结论：类风湿因子浓度较高的血清样本对胱抑素C的检测会带来干扰，引起血清胱抑素C假性升高。

类风湿因子；胱抑素C；抗原抗体反应

近年来，血清胱抑素C(CYS-C)作为检测肾功能的一项新的内源性标志物受到临床重视，已成为肾功能检测常规指标之一[1]。CYS-C是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，由122个氨基酸残基组成，分子量13.3 KD，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。由于其不受年龄、性别、体重、炎症等因素影响，分子量小，能自由从肾小球滤过，完全被肾小管上皮细胞重吸收并于细胞内降解，不重新回到血液中等特点被认为是早期反应肾功能损伤的可靠指标。类风湿因子(RF)是一种多株系自身抗体，并不只在类风湿关节炎患者血清中存在，在其他自身免疫性疾病中也有发现，包括系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性活动性肝炎，并且在约5%的正常人群中也以低浓度水平存在。

经过长期观察研究，我们发现某些RF浓度较高的患者，经临床排除实质性器官病变的可能，血清检测其他肾功指标均正常，唯独CYS-C异常增高，而反应肾脏早期损伤的另一个指标β2微球蛋白(β2-MG)也并没有增高[2]。此时，CYS-C的异常高值是真实反映早期肾功能损伤还是由于受到干扰而出现的假阳性结果。如何判断其真实性对临床诊断及治疗具有重要意义。因此，本课题采用抗原抗体反应原理，去除血清中的RF，以验证较高浓度的RF是否会干扰血清CYS-C的检测，导致CYS-C结果假性增高[3]。

资料与方法

2014年8月-2016年8月收治检测RF较高患者 20例(＞300 IU/ML)，同时CYS-C异常，而尿素氮、肌酐、尿酸、β2-MG等其他肾功指标均正常的血清样本。其中女10例，男10例，年龄38～87岁。

仪器与试剂：RF检测仪器为西门子IMMAGE800特种蛋白分析仪，试剂为BECKMAN COULTER的类风湿因子检测试剂盒(免疫比浊法)。血清胱抑素、尿素氮、肌酐、尿酸、β2-MG检测仪器为HITACHI7600全自动生化分析仪，试剂采用四川迈克的CYS-C测定试剂盒(胶体金增强免疫法)。尿素氮、肌酐、尿酸、β2-MG检测同为四川迈克生化试剂。

方法：RF和血清CYS-C均为免疫比浊法，本质为抗原抗体反应。分别用相应试剂盒检测各指标后，选取符合条件的标本进行试验。首先将RF检测试剂盒(免疫比浊法)中的RF抗原添加到血清标本中使其充分反应，中和RF，离心沉淀去除RF抗原抗体复合物，然后取上清再次检测血清CYS-C，比较两次血清CYS-C值是否存在差异。将符合研究条件的患者血清与RF试剂在37℃等比例低速振荡反应10min，再3 000 rpm离心沉淀10min，然后取上清检测血清CYS-C，倍比稀释后为避免检测敏感性降低，采取倍比浓缩测定，每个标本测定两次取平均值作为测定结果。当样本中RF＞500 IU/mL时，重复上述操作1次。已达到尽可能多清除血清RF的目的。

统计学方法：应用SPSS 16.0统计软件对计量资料采用配对t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 标本处理前后各指标检测值

结果

标本处理前后各指标检测值，见表1。

RF处理前后血清CYS-C检测结果比较：①去除RF后的血清再次检测CYS-C值均明显下降。处理前后数据比较，差异具有统计学意义(P＜0.001)。②血清CYS-C的下降幅度与RF的浓度有关，但并不是成正比的关系。③血清CYS-C的下降与年龄、性别无明显相关性。

讨论

RF是一种病理性球蛋白，主要为19S的IgM，也有7S的IgG、IgA或者IgE，常以单一型或混合型同时存在。RF与天然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。所有类型的RF靶抗原均为IgG，其结合部位一般认为在IgG的Fc段[4，5]。

从本研究结果可以看出，经处理后的血清CYS-C检测值均有不同程度降低。尤其是RF极高的样本，血清CYS-C检测值下降明显。说明血清中较高浓度的RF对血清CYS-C的检测存在一定程度干扰，导致血清CYS-C假性增高[6]。这可能是因为RF结构复杂，在机体中以多种分子结构型存在，其理化性状，表位种类及数目等均可影响抗原抗体反应。人体内IgG分子由于某些原因常相互聚集，产生抗原多价性，这也促进了RF与IgG分子或抗原抗体复合物的结合。

另外，本实验也存在需要进一步深入研究的现象。首先，在筛选研究对象时发现，部分RF极高的患者，血清CYS-C检测值正常。为排除钩状效应影响，本实验室对标本进行倍比稀释重新检测CYS-C，并未发现钩状效应的存在。其次，由于RF结构差异导致其干扰程度有所差异，影响程度并不与RF浓度成正比。最后，不同试剂盒CYS-C抗体的来源不一，其结合特异性不能保证一致，因此，不同厂家试剂盒干扰程度可能有所差异。

虽然非特异性抗体引起分析干扰的发生率近年来已经明显下降，但免疫测定过程中的假阳性仍不可避免。实验室在下列情况时应怀疑干扰物的存在：患者产生RF可能性的病史或与RF产生有关的疾病；临床医生根据其他的临床试验数据开始怀疑肾功能损伤，在这种情况下实验室能通过直接测定RF的水平监测干扰物的存在，若结果正常，排除干扰的可能；升高的结果可怀疑由RF引起的CYS-C的假性增高，这类标本可先进行预处理，消除方法[7，8]：①将RF抗原添加到血清标本中使其充分反应，中和RF，离心沉淀去除RF抗原抗体复合物；②将经热变性的动物IgG与聚苯乙烯微球结合后加入血清中，反应后离心清除样本中的RF；③用还原剂使RF降解，2-巯基乙醇可使RF的巯基裂解；④PEG沉淀法，人r-球蛋白预吸收法；⑤重组单克隆IgY作试剂抗体可有效防止干扰现象，纠正错误结果。

综上所述，当血清RF浓度较高时，而β2-MG正常，那么CYS-C增高可能是假性增高，可能导致肾功能损伤的错误诊断和不当治疗，只有保证排除了RF的假性干扰，血清中CYS-C的测定结果与肾功能损伤才有密切联系。

[1]尹广.血清胱抑素C的临床应用[J].肾脏病与透析肾移植杂志，2007,(16):273-277.

[2]魏崇莉.胱抑素C的临床意义及其应用进展[J].国际检验医学杂志,2012,33(2):182-183.

[3]刘红春,苏利沙,赵占正,等.血清胱抑素C评估慢性肾脏病患者肾小球滤过率的应用研究[J].中华检验医学杂志,2014,37(3):184-188.

[4]Ahao J.Comparison between Cystation C and TradinonalGFR Edogenous Markers[J]. Agricultural Biotechnology,2014,3(3):41.

[5]王惠欣.免疫测定中内源性蛋白质的相关问题探讨[J].黑龙江医药,2010,23(6):970-972.

[6]王兰兰,许化溪.类风湿关节炎相关自身抗体的检测与应用［M].临床免疫学检验.2012:290-292.

[7]王兰兰,许化溪.临床免疫学检验[M].北京:人民卫生出版社2012:12-17.

[8]陈金超,刘涤瑕,王丽,等.免疫学检测方法中的干扰与对策[J].现代中西医结合杂志, 2009,18(21):2575-2576.

The interference of serum high rheumatoid factor on cystatin C detection

Chen Suyun1,Wang Yuwei(Corresponding author)2
Department of Clinical Laboratory,Chongqing Armed Police Corps Hospital 4000601
Department of Clinical Laboratory,Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital 4000212

Objective:To evaluate the influence of serum high rheumatoid factor on cystatin C detection.Methods:Using antigen antibody reaction principle,to remove the high concentration of rheumatoid factor in serum.The serum cystatin C was detected before and after the treatment of specimens,to determine whether there was difference.Results:The serum cystatin C was deseased after removing the rheumatoid factor in serum,and the difference was statistically significant(P＜0.001).Conclusion:Serum samples with high concentrations of rheumatoid factor may interfere with the detection of cystatin C,causing a false increase in serum cystatin C levels.

Rheumatoid factor;Cystatin C;Antigen antibody reaction

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.3.61

重庆市卫计委项目(2015MSXM081)

Fund ProjectProject of the Chongqing municipal health and family planning commission(2015MSXM081)