原发性肾病综合征患儿外周血单个核细胞IL-18、Fas mRNA表达变化及其意义

龙彪,曾冬梅,罗莉

(黔东南州人民医院,贵州黔东南 556000)

原发性肾病综合征患儿外周血单个核细胞IL-18、Fas mRNA表达变化及其意义

龙彪,曾冬梅,罗莉

(黔东南州人民医院,贵州黔东南556000)

目的观察原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血IL-18、Fas mRNA表达变化，并探讨其临床意义。方法选择68例PNS患儿为观察组，其中单纯型PNS45例、肾炎型PNS23例，另选47例健康体检儿童为对照组。抽取两组患儿外周血分离单个核细胞，采用实时荧光定量PCR法检测Fas、IL-18 mRNA。结果观察组、对照组儿童外周血单个核细胞IL-18 mRNA表达量分别为0.13±0.02、0.02±0.01，Fas mRNA表达量分别为0.05±0.02、0.48±0.08。观察组外周血单个核细胞IL-18、Fas mRNA与对照组相比P均<0.05。单纯型、肾炎型PNS患儿外周血单个核细胞IL-18 mRNA表达量分别为0.08±0.06、0.19±0.09，Fas mRNA表达量分别为0.51±0.13、0.32±0.11。观察组单纯型PNS患儿外周血单个核细胞IL-18 、Fas mRNA表达量与肾炎型PNS相比P均<0.05。 Pearson相关性分析结果显示观察组患儿、单纯型PNS患儿、肾炎型PNS患儿外周血单个核细胞Fas mRNA表达量与IL-18 mRNA表达量呈负相关(r=-0.468、-0.567、-0.327，P均< 0.05)。结论PNS患儿外周血单个核细胞IL-18表达升高、FAS mRNA表达下降。检测外周血单个核细胞IL-18 、FAS mRNA有助于鉴别判断单纯型和肾炎型PNS。

白细胞介素18;Fas蛋白;原发性肾病综

原发性肾病综合征(PNS)是各种原因引起肾小球的通透性增加，进而导致水肿、高血脂症、大量蛋白尿、低蛋白血症等特征性的临床症状[1]。儿童肾病综合征是泌尿系统常见的疾病[2]。PNS的发病机理目前不是十分明确。IL- 18是重要的炎症因子，Fas是细胞凋亡标志物[3～5]。IL- 18、Fas是否在PNS发生过程中发挥作用尚无定论。我国临床将PNS分为单纯型和肾炎型两种类型[6]。这两种类型的PNS患儿IL- 18、Fas表达情况是否有差异也不明确。为解决上述问题，本研究观察了PNS患儿外周血单个核细胞IL- 18、Fas mRNA表达变化，并比较了单纯型、肾炎型PNS患儿外周血单个核细胞IL- 18、Fas mRNA表达情况。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2016年1月～2017年3月收治的初治PNS患儿68例为观察组。纳入标准：①年龄14岁；②满足PNS诊断标准[7]，即血清白蛋白(ALB)<25 g/L、24 h尿蛋白定量≥50 mg/(kg·d)、尿蛋白≥+++伴有水肿、高脂血症等临床症状。排除标准：①继发性肾病综合征；②心脏、肝脏功能不全者；③身体患有其他可能影响本研究结果的疾病。其中男38例、女30例，年龄3～9(6.15±3.18)岁。按照《儿童常见肾脏疾病诊治循证指南》[8]将患儿分为单纯型45例，肾炎型23例。另选同期体检的健康儿童47例作为对照组，其中男27例、女20例，年龄4～10(7.85±3.71)岁。两组儿童性别、年龄相比P均> 0.05。本研究已获得我院医学伦理委员会批准，患儿及其家属均签署知情同意书。

1.2 外周血单个核细胞Fas 和IL-18 mRNA检测方法 观察组患儿入院第2天，对照组患儿体检时采血5 mL，分离单个核细胞。按照RNA提取试剂盒的说明书进行操作提取RNA。然后反转录为cDNA。采用实时荧光定量PCR法进行扩增，以GAPDH为内参照。Fas上游引物序列为5′-ACCAACTATTGCTTCAGCTC-3′，下游引物序列为5′-CTTGCAGGAGCGCACGATCA-3′；IL-18上游引物序列为5′-GGCCTCTATTTGAAGATATGACTGATT-3′，下游引物序列为5′-CCTCTAGGCTGGCTATCTTTATACATAC-3′；GAPDH上游引物序列为5′-TGGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3′，下游引物序列为5′ - ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGC-3′ 。PCR反应条件：94 ℃预变性3 min，然后进行40个循环(94 ℃变性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s)，最后72 ℃延伸5 min，产物在4 ℃恒温保存。采用2-ΔΔCt表示Fas 和IL-18 mRNA表达量。

2 结果

2.1 观察组、对照组儿童外周血单个核细胞IL-18、Fas mRNA比较 观察组、对照组儿童外周血单个核细胞IL-18 mRNA表达量分别为0.13±0.02、0.02±0.01，Fas mRNA表达量分别为0.05±0.02、0.48±0.08。观察组外周血单个核细胞IL-18 、Fas mRNA表达量与对照组相比，P均<0.05。

2.2 观察组单纯型、肾炎型PNS患儿外周血单个核细胞Fas、IL-18 mRNA比较 单纯型、肾炎型PNS患儿外周血单个核细胞IL-18 mRNA表达量分别为0.08±0.06、0.19±0.09，Fas mRNA表达量分别为0.51±0.13、0.32±0.11。观察组单纯型PNS患儿外周血单个核细胞IL-18、Fas mRNA表达量与肾炎型PNS相比P均<0.05。

2.3 观察组患儿外周血单个核细胞Fas、IL-18 mRNA表达量的相关性 Pearson相关性分析结果显示观察组患儿外周血单个核细胞Fas mRNA表达量与IL-18 mRNA表达量呈负相关(r=-0.468，P<0.05)，单纯型PNS患儿中外周血单个核细胞Fas mRNA表达量与IL-18 mRNA表达量呈负相关(r=-0.567，P<0.05)，肾炎型PNS患儿中外周血单个核细胞Fas mRNA表达量与IL-18 mRNA表达量呈负相关(r=-0.327，P<0.05)。

3 讨论

儿童PNS主要由肾小球毛细血管的通透性增加，导致血浆中的白蛋白从尿液中大量丢失。有研究表明，原发性肾病综合征占小儿肾病的90%[7～9]，是小儿中比较常见的肾小球疾病，但其发病机制目前尚未清楚。近年来的研究发现，T淋巴细胞亚群可能参与PNS的发生发展过程，PNS患儿的T淋巴细胞分泌的细胞因子异常于正常儿童，并介导细胞的免疫应答过程，进而在儿童体内引发迟发型的超敏反应[10～12]。

IL-18是由活激活后的单核细胞分泌，是近年来新发现的炎症因子，可以加强NK细胞的毒性作用能力，可参与新月体肾炎以及急性缺血性肾功能衰竭过程[13～15]。已有研究报道，PNS患儿在治疗前后的外周血中的IL-18 mRNA差异显著，且与24h尿蛋白定量有着呈显著的正相关性[16]。本研究结果显示观察组患儿外周血单个核细胞IL-18 mRNA高于对照组，与其结果一致。Fas又称细胞凋亡蛋白1，是细胞凋亡过程中重要的细胞信号转导因子，Fas及其配体FasL与细胞外细胞因子，如白细胞介素、转化生长因子等结合，将凋亡信号转导到细胞内，启动细胞凋亡程序。本研究结果显示，观察组患儿外周血单个核细胞Fas mRNA低于对照组，表明PNS患儿外周血单个核细胞的凋亡活性弱于对照组，细胞免疫功能处于亢进状态，这符合已知的PNS的发病机理。本研究结果显示，观察组患儿外周血单个核细胞Fas与IL-18 mRNA表达水平呈负相关，说明在PNS发病过程中Fas与IL-18之间相互作用的方式可能是相互拮抗或者负性调节。结合文献笔者认为IL-18可能是Fas的上游调控因子，对Fas的表达发挥负性调控作用。

肾病综合症的类型中，单纯型主要以肾脏的微小病变为主，而肾炎型主要以非微小型病理改变为主，如系膜增生性肾炎、膜性肾炎、局灶节段性肾小球硬化等等。从病理损伤程度方面分析，肾炎型PNS的病情要比单纯型PNS重，而且更容易引起激素类药物耐药[17]。本研究结果提示，单纯型组PNS患儿外周血单个核细胞IL-18 mRNA表达低于肾炎组、Fas mRNA表达高于肾炎组，也佐证了肾炎型PNS患者的病情比单纯型PNS轻，同时提示我们检测外周血单个核细胞IL-18、Fas mRNA表达有助于鉴别单纯型和肾炎型PNS。

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贵州省卫生厅重点基金资助项目(GW-2014B-101237)。