尿结缔组织生长因子联合血清胱抑制素C检测在早期糖尿病肾病患者肾损害筛查中的意义

赵雯红 田俊丽 杨一民 辛海利 孙姗姗 李彦竹 张国瑛

(石家庄市中医院肾内科，河北 石家庄 050051)

尿结缔组织生长因子联合血清胱抑制素C检测在早期糖尿病肾病患者肾损害筛查中的意义

赵雯红 田俊丽1杨一民1辛海利 孙姗姗 李彦竹 张国瑛

(石家庄市中医院肾内科，河北 石家庄 050051)

目的 探讨尿结缔组织生长因子(CTGF)、血清胱抑素(cystatin)C水平联合检测在早期筛查糖尿病肾病(DN)患者肾损伤中的意义。方法 选择1～3期DN患者，检测各期患者尿CTGF、血清cystatin C、尿白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(SCr)、内生肌酐清除率(Ccr)水平变化。结果 与1期DN组比较：2期DN组患者尿CTGF、血清cystatin C、SCr水平均明显升高(P<0.05)，而UAER水平无统计学差异(P>0.05)，3期DN组患者尿CTGF、血清cystatin C、UAER、SCr水平均明显升高(P<0.01)，两组Ccr水平均明显降低(P<0.01)；Pearson分析示尿CTGF、血清cystatin C与SCr、UAER显著正相关，与Ccr显著负相关，且ROC曲线分析表明二者联合检测诊断价值较高。结论 尿CTGF联合血清cystatin C检测对筛查1～3期DN患者肾损害意义较大。

尿结缔组织生长因子；血清胱抑素C；早期糖尿病肾病

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见、最严重的微血管并发症之一，也是引起终末期肾病的主要原因〔1〕。因此，预防DN的发生，提高DN早期诊断水平为目前急需解决的重大问题。研究证实，在DN患者中，尿结缔组织生长因子(CTGF)与蛋白尿和肾小球率过滤(GFR)均密切相关〔2,3〕，且其出现更早〔4〕；血清胱抑素(cystatin)C是一种非糖基化的半胱氨酸蛋白酶抑制因子，其蛋白分子量为13 kD，广泛表达于各种组织细胞，并能被肾小球自由滤过。一项前瞻性队列研究表明血清cystatin C比肌酐估测的GFR在预测终末期肾病方面更具优势〔5〕。可见，尿CTGF与血清cystatin C的联合检测在评估DN患者的肾功能及预后方面更加客观、全面。本研究评估尿CTGF和血清cystatin C联合检测在DN早期筛查中的意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 严格按照DN临床分期标准，选择本院门诊或住院的1～3期DN患者，各期60例，其中1期27例，女33例，年龄43～71〔平均(58.02±7.84)〕岁，病程2～5〔平均(3.48±1.16)〕年，2期男25例，女35例；年龄52～78〔平均(64.43±7.40)〕岁；病程5～10〔平均(7.28±1.85)〕年；3期男22例，女38例；年龄59～75〔平均(68.43±4.37)〕岁；病程5～10〔平均(6.97±1.77)〕年。纳入标准：符合2004年美国糖尿病学会糖尿病诊断标准及Mogenson分期标准属于1～3期DN患者，且肾功能正常〔血肌酐(SCr)<133 μmol/L,GFR>90 ml/min〕；排除标准：排除合并高血压性肾病等其他继发性肾病及原发性肾小球疾病、急性感染、酮症酸中毒、急性肾损伤、肿瘤、已应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素受体阻滞剂(ARB)类药物、严重心脑血管疾病的患者。随机选择与之年龄相匹配的健康者20例为对照组，男10例，女10例；年龄50～72岁，平均(63.40±7.58)岁。

1.2 指标检测

1.2.1 尿CTGF的测定 收集各组患者连续24 h的尿液，混匀，取10 ml，以2 000 r/min离心10 min，取上清液2 ml于-80℃冰箱中保存，备用。采用酶联免疫吸附(ELISA)方法测定尿CTGF的浓度(美国Biopioneer公司)。严格按照试剂盒说明书进行操作，取3次结果的平均值。由于标本经盐酸和氢氧化钠预处理，为了减少尿液稀释或浓缩对结果的影响，尿CTGF测定结果以其与尿肌酐的比值(CTGF/Cr)表示。

1.2.2 血清cystatin C测定 抽取受试者空腹静脉血5 ml，3 000 r/min离心15 min，取上清，采用全自动生化分析仪(美国贝克曼公司)进行血清cystatin C测定。

1.2.3 肾功能、尿白蛋白排泄率(UAER)测定 采取标本同上，采用全自动生化分析仪(美国贝克曼公司)检测各组SCr水平，并按照cockcroft公式计算内生肌酐清除率(Ccr),放免法检测各组24 h尿蛋白定量，并换算成UAER(μg/min)，取3次结果的平均值。

1.3 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行方差分析，相关性采用Pearson相关性分析，绘制ROC曲线。

2 结 果

2.1 各组患者尿CTGF/Cr、血清cystatin C、UAER、SCr、Ccr水平比较 与对照组比较：1期DN组患者各项指标无统计学差异(P>0.05)；2期DN组患者尿CTGF、血清cystatin C水平明显升高(P<0.01)，Ccr水平明显降低(P<0.01)，而UAER和SCr水平无统计学差异(P>0.05)；3期DN组患者尿CTGF、血清cystatin C、UAER水平均明显升高(P<0.01)，Ccr水平明显降低(P<0.01)，SCr水平无统计学差异(P>0.05)。与1期DN组比较：2期DN组患者尿CTGF、血清cystatin C、SCr水平均明显升高(P<0.05)，Ccr水平明显降低(P<0.01)，而UAER水平无统计学意义(P>0.05)；3期DN组患者尿CTGF、血清cystatin C、UAER、SCr水平均明显升高(P<0.01)，Ccr水平明显降低(P<0.01)。与2期DN组比较：3期DN组患者尿CTGF、血清cystatin C、UAER、SCr水平均明显升高(P<0.05)，Ccr水平明显降低(P<0.05)。见表1。

2.2 DN患者尿CTGF/Cr、血清cystatin C与UAER、SCr及Ccr相关性分析 尿CTGF/Cr、血清cystatin C与UAER、SCr呈显著正相关(r=0.977、r=0.531；r=0.296、r=0.362，均P<0.01)，与Ccr呈显著负相关(r=-0.533、r=-0.854，均P<0.01)。

2.3 尿CTGF/Cr、血清cystatin C筛查DN肾损害的ROC曲线分析 以尿CTGF/Cr、血清cystatin C为检验变量,以Ccr是否异常为状态变量,取状态变量值为1,建立ROC曲线,尿CTGF/Cr筛查DN肾损害的ROC曲线下面积为0.848，血清cystatin C筛查DN肾损害的ROC曲线下面积为0.865。见图1。

组别尿CTGF/Cr(ng/mg)血清cystatinC(mg/L)UAER(μg/min)SCr(μmol/L)Ccr(ml/min)对照组3.38±1.960.71±0.087.15±2.2375.94±11.50106.76±9.991期DN组5.55±0.870.73±0.098.29±0.9472.17±10.54109.25±11.762期DN组24.52±3.511)2)1.17±0.301)2)16.36±2.7476.83±8.472)91.86±8.501)3)3期DN组121.96±38.251)3)4)1.32±0.291)3)4)111.28±43.731)3)4)80.83±10.993)4)86.82±12.621)3)4)F/P值381.06/0.0084.12/0.00241.82/0.007.23/0.0051.57/0.00

与对照组比较：1)P<0.01；与1期DN组比较：2)P<0.05，3)P<0.01；与2期DN组比较：4)P<0.05

图1 尿CTGF/Cr、血清cystatin C筛查DN肾损害的ROC曲线

3 讨 论

目前临床普遍以微量白蛋白尿作为DN诊断的早期线索，然而研究表明，尿微量白蛋白的变化对肾小球硬化的预后不敏感，且可能受其他疾病的影响而干扰诊断〔4〕，所以寻找与肾脏病理改变相关性更高的，且更早出现的新的诊断指标是DN临床研究广泛关注的热点问题。CTGF被认为是TGF-β的下游效应分子，但有报道CTGF也可以不依赖TGF-β独立发挥作用〔6〕。CTGF可促进成纤维细胞增生，诱导系膜细胞基质(ECM)的合成和抑制ECM的降解，从而参与了DN肾脏的纤维化过程〔7〕。研究表明，微量蛋白尿的患者尿CTGF增加10倍，而大量蛋白尿患者则增加100倍〔8〕，故尿中的CTGF可作为肾脏纤维化的早期诊断指标。研究证实，在DN患者中，尿CTGF与蛋白尿和GFR均密切相关〔9〕。单独血肌酐的测定不足以说明肾功能受损情况，所以一些更有价值的血清标志物应运而生。与目前临床上常用的估测GFR的血清肌酐、尿素氮相比，血清cystatin C的合成分泌比较稳定，受年龄、体重、种族、蛋白摄入或炎症的影响较小。根据血清cystatin C得出的GFR在预测DN的微量蛋白尿阶段方面，优于比根据血清肌酐得出的GFR，同时也似乎提示了肾功能的下降早于蛋白尿的出现〔5〕。

可见，尿CTGF与血清cystatin C的联合检测在筛查早期DN患者的肾损害方面更有价值。

1 Dabla PK.Renal function in diabetic nephropathy〔J〕.World J Diabetes,2010;1(2):48-56.

2 James LR,Le C,Doherty H,etal.Connective tissue growth factor(CTGF)expression modulates response to high glucose〔J〕.PLoS One,2013;8(8):e70441.

3 Nguyen TQ,Tarnow L,Andersen S,etal.Urinary connective tissue growth factor excretion correlates with clinical markers of renal disease in a large population of type 1 diabetic patients with diabetic nephropathy〔J〕.Diabetes Care,2006;29(1):83-8.

4 Elizabeth TR,Monika AN,Linda HF,etal.Between hyperfiltration and impairment:demystifying early renal functional changes in diabetic nephropathy〔J〕.Diabet ResClin Pract,2008;82(1):46-53.

5 Krolewski AS,Warram JH,Forsblom C,etal.Serum concentration of cystatin C and risk of end-stage renal disease in diabetes〔J〕.Diabete Care,2012;35(11):2311-6.

6 Slagman MC,Nguyen TQ,Waanders F,etal.Effects of antiproteinuric interventionon elevate connective tissue growth factor(CTGF/CCN-2)plasma and urine levels in nondiabetic nephropathy〔J〕.Clin J Am Soc,2011;6(8):1845-50.

7 Deelman L,Sharma K.Mechanisms of kidney fibrosis and the role of antifibrotic therapies〔J〕.Curr Opin Nephrol Hypertens,2009;18(1):85-90.

8 Andersen S,Nieuwenhowen FA,Tarnow L,etal.Reduction of urinary connective tissue growth factor by Losartan in type 1 patients with diabetic nephropathy〔J〕.Kidney Int,2005;67(6):2325-9.

9 Tam FW,Riser BL,Meeran K,etal.Urinary monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)and connective tissue growth factor(CCN2)as prognostic markers for progression of diabetic nephropathy〔J〕.Cytokine,2009;47(1):37-42.

〔2015-12-28修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

2012年石家庄市科学技术研究与发展指导计划项目(No.12146893)

赵雯红(1980-)，女，博士，副主任医师，主要从事肾脏病临床与实验研究。

R587.205

A

1005-9202(2017)06-1361-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.06.024

1 石家庄四药有限公司职工医院