围手术期食管鳞状细胞癌患者血清UHRF1水平变化*

李金昌，余丽莉，吴钧，严枫

(南京医科大学附属肿瘤医院检验科，江苏省恶性肿瘤分子生物学及转化医学重点实验室， 南京 210009)

·临床实验研究·

围手术期食管鳞状细胞癌患者血清UHRF1水平变化*

李金昌，余丽莉，吴钧，严枫

(南京医科大学附属肿瘤医院检验科，江苏省恶性肿瘤分子生物学及转化医学重点实验室， 南京 210009)

目的 检测食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)水平，分析其在不同临床病理参数亚组间的差异以及围手术期的变化。方法 收集130例ESCC患者术前血清，另收集其中62例患者的术后1周血清以及14例患者术后1周和2周血清，以67例体检健康者作为对照组。同时收集患者临床病理资料。用ELISA法检测血清UHRF1含量，采用独立样本t检验、配对t检验及单因素方差分析比较不同组间水平差异。结果 130例ESCC患者术前血清UHRF1含量明显高于健康人对照组(t=7.680,P<0.01)；在不同年龄、性别、肿瘤部位和大体分型间UHRF1水平差异无统计学意义(P>0.05),不同肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况、pTNM分期间血清UHRF1水平差异有统计学意义(P<0.05)。62例患者术后UHRF1水平较术前明显降低(t=5.530,P<0.01)，且与健康人对照组差异无统计学意义(t=1.622,P>0.05)；14例患者术前、术后1周、术后2周血清UHRF1水平逐渐降低，差异有统计学意义(F=7.595,P<0.01)。结论 血清UHRF1可作为围手术期动态监测的潜在指标。

食管鳞状细胞癌；泛素样含PHD和环指域1；动态监测

泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like with PHD and ringfinger domains 1，UHRF1)是近年来发现的一种与DNA甲基化有关的表观遗传学修饰相关蛋白质[1]，在乳腺癌、结直肠癌、胃癌、子宫颈癌等多种肿瘤组织中高表达[2-5]。研究表明，在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)组织中UHRF1高表达[6-8]，但在ESCC围手术期血清UHRF1蛋白质水平定量检测目前尚未见报道。本研究通过ELISA法定量检测ESCC患者手术前后血清UHRF1水平，探究其判断手术效果和围手术期动态监测的价值，并分析其在不同临床病理参数亚组间的差异。

1 材料和方法

1.1 研究对象与一般资料 收集2015年6月至2016年12月南京医科大学附属肿瘤医院胸外科初诊收治入院进行根治手术的ESCC患者130例(男102例，女28例)，中位年龄64岁(四分位间距49～67岁)。均经病理组织学确诊为ESCC。按分化程度进行分组：≥中分化组包括高级别上皮内瘤5例、高-中分化19例和中分化58例；<中分化组包括中-低分化31例和低分化17例。除手术外，患者未接受放、化疗或其他抗肿瘤治疗。收集同时期67例体检健康者作为对照组(男20例，女47例)，中位年龄60岁(四分位间距55～63岁)。通过我院病案室电子病历系统和病理科数据库查询ESCC患者临床病理资料，肿瘤部位分段、浸润深度、分化程度、淋巴结转移和pTNM分期参照美国癌症联合委员会(AJCC)2016年发布的第8版标准[9]；大体分型依据《食管癌规范化诊治指南》[10]。本研究经医院医学伦理学委员会批准和研究对象知情同意。

1.2 标本采集 分别采集患者和健康人对照组清晨空腹外周静脉血5 mL，4 000 r/min离心5 min，分离血清，置-80 ℃保存。患者的采血时间点如下：130例ESCC患者术前，其中62例术前+术后1周、14例术前+术后1周+术后2周。

1.3 主要仪器与试剂 多功能酶联仪SpectraMax M2(美国美谷分子仪器公司)，低速离心机(德国Eppendorf公司)，快速自动高压灭菌仪SX-700(日本TOMY公司)，恒温水槽(上海精密仪器公司)，血清UHRF1检测ELISA试剂盒(厦门慧嘉公司)。

1.4 血清UHRF1检测 用ELISA法，按照试剂盒说明书进行操作，用酶联仪在450 nm波长检测吸光度(A)值，绘制标准曲线，计算UHRF1浓度。

2 结果

2.1 ESCC患者术前血清UHRF1水平及不同临床病理参数亚组间的比较 130例ESCC患者术前组血清UHRF1水平为(298.01±138.46) ng/L，明显高于67例健康人对照组(165.12±40.83) ng/L，差异有统计学意义(t=7.680，P<0.01)。对130例ESCC患者术前血清UHRF1水平在各临床病理参数亚组间差异进行统计学分析，结果显示，不同年龄、性别、肿瘤部位、大体分型患者间术前UHRF1水平差异无统计学意义(P>0.05)，不同肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移情况和pTNM分期患者间术前UHRF1水平差异有统计学意义(P<0.05)，肿瘤较大、分化程度较差、浸润深度较深以及淋巴结转移分期和pTNM分期较晚者术前UHRF1水平较高。见表1。

表1 ESCC患者不同临床病理参数亚组间术前血清UHRF1水平比较

临床病理参数n浓度(ng/L)检验统计量aP值年龄(岁)0．0280．978 <6464297．75±144．04 ≥6466298．44±133．94性别0．4160．678 女28288．42±112．15 男102300．76±145．23肿瘤部位0．7050．496 胸上段18325．52±144．61 胸中段77300．50±148．95 胸下段35278．71±109．08大体分型0．4720．853 斑块型鳞癌11330．43±160．29 乳头型鳞癌4331．82±65．29 糜烂型鳞癌10351．68±188．91 溃疡型鳞癌65294．44±145．12 髓质型鳞癌25272．84±111．18 缩窄型鳞癌5287．34±132．16 蕈伞型鳞癌5301．95±129．99 其他b5273．54±93．68肿瘤大小(cm)2．1470．034 <472274．38±119．08 ≥458327．54±155．35分化程度2．3660．019 ≥中分化82276．50±123．75 <中分化48335．00±155．00浸润深度/T分期2．6640．009 Tis/T1/T264266．13±114．08 T366329．10±153．14淋巴结转移/N分期7．8840．000 N071261．39±102．84 N138310．85±153．42 N215361．42±143．09 N36493．41±192．12pTNM分期6．1370．003 Ⅰ期24263．21±101．46 Ⅱ期53264．54±109．99 Ⅲ期+Ⅳ期53347．45±163．46

注：a,两组均数比较采用独立样本t检验(统计量为t)，3组及以上均数比较采用单因素方差分析(统计量为F)；b，包括5例高级别上皮内瘤。

2.2 ESCC患者手术前后血清UHRF1水平变化 62例ESCC患者血清UHRF1水平术后较术前明显降低，分别为(188.01±107.27) ng/L和(309.33±135.42) ng/L，差异有统计学意义(t=5.530,P<0.01)。同时，术后血清UHRF1水平与健康人对照组相比，差异无统计学意义(t=1.622,P>0.05)。14例ESCC患者连续检测其术前、术后1周和术后2周血清UHRF1浓度，分别为(313.27±117.24) ng/L、(227.20±127.68) ng/L和(152.89±74.68) ng/L，呈依次降低趋势，差异有统计学意义(F=7.595,P<0.01)。见图1。

图1 ESCC患者手术前后血清UHRF1水平变化

3 讨论

UHRF1可能参与表观遗传学调控，促进肿瘤进展和转移[11-12]，通过招募DNA甲基转移酶DNMT1至半甲基化的DNA上来维持DNA甲基化[1]。DNA甲基化与年龄存在一定相关性，但在不同疾病、样本等研究的结论并不一致[13]，有报道UHRF1在结直肠癌[3]、胃癌[4]、食管癌[6,8]等组织表达水平与患者年龄、性别无关。本研究结果显示：术前血清UHRF1水平在不同年龄和性别的ESCC患者之间差异无统计学意义，可能因为人体衰老和体内甲基化水平变化是一个复杂的多方面作用的生物过程，单一的UHRF1对DNA甲基化并未产生直接影响。此外，发现血清UHRF1水平在不同肿瘤部位、大体分型组间差异无统计学意义；在不同淋巴结转移和pTNM分期之间差异有统计学意义(P<0.01)；血清UHRF1升高的患者，肿瘤体积较大、分化较差、侵袭较深；术前血清UHRF1水平显著高于健康人对照组(P<0.01)，研究结果与组织中UHRF1检测的报道相似[6-8]。ESCC患者行食管癌根治手术1周后血清UHRF1水平较之术前明显降低(P<0.01)，且趋于健康人水平，提示可作为判断手术效果的指标；连续监测其术前、术后1周和术后2周血清UHRF1水平变化，呈依次下降趋势。因此，可根据血清UHRF1水平变化评估患者病情进展，检测血清UHRF1水平可用于ESCC围手术期监测。本研究尚存在标本量偏少问题，缺少良性疾病对照组结果的支持，血清UHRF1对ESCC的诊断价值有待证实，后续工作中将增加样本量，补充更长时间段和更多时间点的检测，进一步深入研究。

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(本文编辑：刘群)

Changes of serum UHRF1 levels in perioperative patients with esophageal squamous cell carcinoma

LIJin-chang,YULi-li,WUJun,YANFeng

(DepartmentofLaboratoryMedicine,CancerHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,JiangsuKeyLaboratoryofMolecularandTranslationalCancerResearch,Nanjing210009,Jiangsu,China)

Objective To detect serum ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1 (UHRF1) levels in the patients with esophageal squamous cell carcinoma (ESCC), and analyze their differences among different clinicopathological features subgroups and changes during the perioperative period. Methods Serum samples from 130 preoperative ESCC patients, 62 patients 1 week after operation, 14 patients 1 week and 2 weeks after operation and 67 healthy controls, and clinicopathological data from ESCC patients were collected. Serum UHRF1 levels were detected by ELISA, and the differences among different groups were analyzed with independent t test, paired t test or one-way ANOVA. Results Serum UHRF1 levels in 130 preoperative ESCC patients were significantly higher than that in healthy controls (t=7.680,P<0.01), and they were related to the ESCC patients′ tumor size, differentiation degree, tumor invasion, lymph nodes metastasis and pTNM stage (P<0.05), but unrelated to the patients′ age, gender, tumor location and types (P>0.05). Serum UHRF1 levels in 62 postoperative patients were significantly lower than that before operation (t=5.530,P<0.01), but similar to that in healthy controls (t=1.622,P>0.05). The serum UHRF1 levels before operation, 1 week after operation and 2 weeks after operation in 14 ESCC patients decreased gradually (F=7.595,P<0.01). Conclusion Serum UHRF1 levels may be a potential biomarker for dynamically monitoring perioperative ESCC patients.

esophageal squamous cell carcinoma; ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1; dynamic monitoring

10.13602/j.cnki.jcls.2017.05.05

国家自然科学基金(21475063)；江苏省医学领军人才与创新团队基金(LJ201617)。

李金昌，1990年生，男，硕士研究生，主要从事肿瘤分子诊断和肿瘤标志物研究。

严枫，研究员，硕士研究生导师，E-mail:yanfeng1895@163.com。

R730.4

A

2017-03-17)