松乳菇菌丝培养基的筛选

孙慧娟

摘要[目的]筛选松乳菇菌丝培养最佳培养基配方。[方法]以松乳菇菌种（编号NZ1）为供试菌株，设计2组不同的培养基配方进行菌丝培养的比较试验。[结果]松乳菇菌丝培养的最佳培养基配方为新西兰进口PDA培养基。[结论]该研究可为更好地进行松乳菇人工培养提供科学依据。

关键词松乳菇；培养基；菌丝

中图分类号S646文献标识码A文章编号0517-6611（2017）14-0020-02

Abstract[Objective]To screen the optimum culture medium for mycelia of Lactarius deliciosa. [Method]Taking L.deliciosa strains（number NZ1）as the tested strains，a comparative experiment was conducted to design mycelia culture with two different culture medium recipes. [Result]The best medium for cultivating mycelia of L. deliciosus was PDA medium which import from New Zealand. [Conclusion]The study provides a scientific basis for better cultivating L.deliciosus.

Key wordsLactarius deliciosus；Medium；Mycelia

松乳菇，拉丁学名为Lactarius deliciosus（L. ex Fr.）Gray，系红菇科乳菇属外生菌根真菌，它是Fries在1921年命名的，俗名有很多，如美味松乳菇、松菌、寒菌等[1-3]。松乳菇是与植物根系共生的菌根食用菌，具有较高的营养价值、经济价值和生态价值。过度采摘导致野生资源产量不断下降[4]，然而目前还难以实现人工栽培[5]。松乳菇菌丝生长缓慢且组织分离过程中极易被污染，筛选合适的培养基配方对组织分离培养菌丝具有重要意义。

目前松乳菇菌种分离采用较多的方法是孢子分离法和组织分离法[6]，前人对松乳菇菌丝培养的最佳条件筛选做了大量的试验[7-11]。笔者研究不同培养基配方及化学试剂来源不同的PDA培养基对松乳菇菌丝生长的影响，以期筛选出更优配方组合，为今后松乳菇的驯化栽培提供借鉴。

1材料与方法

1.1试验材料试验用菌株是西藏自治区农牧科学院蔬菜研究所食用菌课题组采集的野生松乳菇菌种（编号NZ1）。

1.2试验设计

1.2.1母种制备。将采集的野生松乳菇带回实验室，挑选菌盖直径为2～3 cm的无蛆虫、菇柄实心的松乳菇，去除附着于松乳菇的泥土，用75%乙醇棉球轻轻擦洗菇体2次。在无菌操作台取菌柄与菌盖交界处的组织，接种到供试斜面培养基中，置于23 ℃恒温培养箱中培养。对组织分离得到的菌丝转管纯化，再转接到装有PDA培养基的培养皿中，观察菌丝生长特征，再对菌丝进行显微观察。

1.2.2不同培养基配方及化学试剂来源不同的PDA培养基筛选试验。试验共设计8种培养基（表1、2），在无菌條件下，用直径3 mm打孔器在菌种上打孔，在平板培养基上接2个直径为3 mm菌种，封口并做标记，设置3个重复，置于23 ℃恒温培养箱中培养。每隔7 d观察并测量菌丝生长指标，筛选适宜的培养基。

1.2.3数据分析。用Excel对试验数据进行基本计算和制图，SPSS软件进行方差分析。

2结果与分析

2.1不同培养基配方筛选结果由于松乳菇菌丝萌发较慢，所以在接种后第11天测量数据，之后每隔7 d测量1次，不同培养基配方对菌丝生长的影响见表3。

由表3可以看出，MMN培养基和自制马铃薯培養基中菌丝长势均较好。在不同培养基配方条件下菌丝生长速度的快慢依次为自制马铃薯培养基、MMN培养基、松乳菇浸出液培养基、马铃薯综合培养基、松针浸出液培养基。且PDA培养基中菌丝生长速度极显著高于MMN培养基，试验结果表明PDA培养基为培养松乳菇菌丝的最佳培养基。

2.2化学试剂来源不同的PDA培养基筛选结果虽然利用实验室自制马铃薯浸出液的方法所做出的PDA培养基培养松乳菇菌丝取得了较好的效果，但是培养基颜色较深不利于观察松乳菇菌丝。由于松乳菇菌丝生长缓慢且为白色，需要培养基具有较高的纯度和投射度，所以又做了进一步试验，通过比较化学试剂来源不同的PDA培养基对菌丝生长的影响来选择一个更加适宜培养松乳菇菌丝的培养基配方。 化学试剂来源不同的PDA培养基对菌丝生长的影响见表4。

由表4可以看出，在化学试剂来源不同的PDA培养基中菌丝生长速度快慢依次为新西兰进口培养基、自制马铃薯培养基、美国进口培养基、国产培养基，其中新西兰进口培养基中菌丝生长速度极显著高于自制马铃薯培养基。松乳菇菌丝培养的最佳PDA培养基为新西兰进口培养基。

3结论与讨论

试验结果表明，在新西兰进口PDA培养基中松乳菇菌丝表现出较好的长势，而松针浸出液培养基配方效果并不好，表现为菌丝长势很弱，这与前人的研究[12]有所不同。不同培养基配方对松乳菇菌丝生长的影响很大，从试验看无论是哪种配方的培养基，松乳菇菌丝生长速度都比一般腐生性菌类慢很多，这可能与其共生的特殊营养需求有关，这一观点与林亲雄等[13]的结论一致。前人实践及该研究表明，组织分离获得松乳菇菌种时，一定要选取新鲜且无病虫害的子实体作为分离材料，保证无菌操作能有效提高组织分离培养菌丝的成功率[12]。

参考文献

[1] FRIES E M. Syst. Mycol[M]. Lunde：Ex officina Berlingiana，1921.

[2] 陈士瑜.食用菌生产大全[M].北京：北京农业出版社，1988.

[3] 卯晓岚.中国食用菌图谱[M].北京：中国轻工业出版社，1999.

[4] 马琼，黄建国，蒋剑波.接种外生菌根真菌对马尾松幼苗生长的影响[J].福建林业科技，2005，32（2）：85-88.

[5] 王辉宪，李会良，姚俊.湘西松乳菇、红汁乳菇中金属元素的测定及其营养价值的研究[J].吉首大学学报（自然科学版），1994，15（5）：63-66.

[6] 陈少珍，韦仕岩，吴圣进，等.野生松乳菇菌丝的分离试验[J].食用菌，2004，26（1）：12-13.

[7] 杜丽飞，肖兵南，曾胜，等.松乳菇菌种分离及菌丝生长特性的研究[J].食用菌，2009，31（1）：9-10.

[8] 李文艺，刘建成. 松乳菇菌丝生长营养需求的初步研究[J].亚热带植物科学，2004，33（2）：41-43.

[9] 周传云，廖兴华，谭周进，等.野生松乳菇菌种分离与培养特性的研究 [J].食品科学，2004，25（8）：66-69.

[10] 冀宝莹，陈超，邓春海，等.野生松乳菇菌种分离的研究[J].微生物学杂志，2001，21（2）：56-60.

[11] 李忠海，敖常伟，钟海雁. 松乳菇菌丝体固体平板培养的研究[J].食品与机械，2006，22（3）：11-13.

[12] 周国英.松乳菇菌丝纯培养及其分离物的DNA指纹研究[D].长沙：中南林学院，2002.

[13] 林亲雄，陈京元.碳源和氮源对松乳菇菌丝生长的影响[J].食用菌学报，2002，9（1）：44-46.