冰冻红细胞的制备与应用分析

黄飞??谭均强??高炳谏

[摘要] 目的 研究并探讨冰冻红细胞的制备方法及应用价值。 方法 对100份悬浮红细胞（2016年6月～2017年1月本站采集2～6d内的RH（D）阴性红细胞16U）标本在不同条件下进行制备，制备方法为甘油化、去甘油化，分别在不同放置时间、不同离心速度下将其制备成冰冻红细胞，比较加甘油后不同放置时间的甘油残留量、去甘油化过程中不同离心速度的各项冰冻红细胞参数。 结果 加甘油后不同放置时间下，放置30min的标本甘油残留量明显低于放置15min的标本（P<0.05）；不同离心速度下，去甘油化后冰冻解冻红细胞的各项参数均符合国家质检标准，离心速度2600转/min的标本其甘油残留量、体外溶血率、游离血红蛋白均明显低于离心速度3300转/min的标本（P<0.05），且其红细胞回收率明显高于离心速度3300转/min的标本（P<0.05）。 结论 对红细胞标本进行甘油化、去甘油化制备，可获得优质冰冻红细胞，有利于保证输血的安全性，缓解血液供需矛盾。

[关键词] 冰冻红细胞；制备；去甘油化；输血

[中图分类号] R457.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）11-146-03

Preparation and application of frozen red blood cells

HUANG Fei TAN Junqiang GAO Bingjian

Yunfu Central Blood Station，Yunfu 445300，China

[Abstract] Objective To study and explore the preparation method and application value of frozen red blood cells. Methods 100 suspension with white and red cell specimens （RH（D） negative erythrocyte 2-6d（16U） were collected in this station from June 2016 to January 2017） were prepared under different conditions.The frozen red blood cells were preparated by the preparation method of glycerol and glycerol，respectively in different time and different centrifugal speed under，at different times after the addition of glycerol for glycerol residues，red blood cell the parameters of different centrifugal speed in the process of freezing glycerol. Results The time of different placement with glycerol，glycerol residues placed specimens of 30min were significantly lower than that of 15min（P<0.05） were placed.Different centrifugal speeds，deglycerolizing after the parameters of frozen thawing red blood cell were in line with national quality inspection standards，centrifugal speed 2600rpm /min were the glycerol residue and residual white blood cells in vitro，and free hemoglobin were significantly lower than that of centrifugal speed 3300rpm/min samples （P<0.05），and the recovery rate of RBC was significantly higher than that of centrifugal speed 3300rpm/min samples （P<0.05）. Conclusion The red blood cells can be obtained by high quality frozen red blood cells.It is helpful to ensure the safety of blood transfusion and relieve the contradiction between supply and demand of blood.

[Key words] Frozen red blood cells；Preparation；De glycerol；Blood transfusion

冰凍红细胞是利用冰冻保护剂将红细胞保存于低温环境下，冰冻红细胞的保存时间长，且能够维持红细胞原有的ATP及2，3-dpg水平，可有效解决患者急救输血，同时，自身输血还可防止输血反应与输血相关疾病的传播。但值得注意的是，红细胞的代谢速度受保存温度的影响。冰冻红细胞是缓解血源供需矛盾、应对突发事件时采取的重要措施，而关于如何制备冰冻红细胞关系到冰冻解冻红细胞的质量[1-2]，本次研究采用ACP125全自动血细胞处理仪对冰冻红细胞进行甘油化以及去甘油化制备，并对其冰冻解冻红细胞质量进行分析后发现，各项参数均符合质量标准，现就研究进行报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料

悬浮红细胞标本共100袋（每袋2U），北京博德桑特输采血器材科技开发中心生产的57%甘油160mL、9%氯化钠溶液80mL，山东威高集团医用高分子制品股份有限公司生产的0.9%氯化钠溶液四联袋750、200mL转移袋，山东威高集团医用高分子制品股份有限公司生产的1000mL转移袋，美国血液技术公司生产的配套甘油化耗材LN225、去甘油化耗材LN235。

1.2 仪器

美国血液技术公司生产的ACP125全自动血细胞处理仪，德国赛默飞世尔公司生产的906-ULTS零下80℃冰箱，德国赛默飞世尔生产的Cryfuge 6000i大容量冷冻离心机，江苏医用仪器厂生产的37℃恒温水浴箱，德国费森尤斯生产的无菌接口机，日本Sysmex KX-21全自动血球计数仪，长春迪瑞公司生产的CS-600B自动化生化分析仪，上海跃进医疗器械厂生产的Xk24-106007恒温培养箱，美墨尔特（Memmert）生产的低温细菌培养箱。

1.3 方法

在不同条件下（加甘油后放置15、30min，去甘油化过程中离心速度分别为2600、3300转/min，每种条件下各50份红细胞标本），对200份悬浮红细胞标本进行制备，将其制备成冰冻红细胞。

红细胞甘油化：取悬浮红细胞标本血袋，将1000mL转移袋与无菌接口机连接，将血袋倒置，待血液流入1000mL转移袋后与LN225甘油化耗材实施无菌接驳，将ACP125全自动血细胞分析仪启动，选择甘油化模式，加入复方甘油溶液，按照预设流速，经血液泵将甘油缓慢置入血袋，并轻轻震荡，使其混匀。

红细胞去甘油化：待甘油与红细胞在血袋中混匀后，在室温下放置15或30min，再采取2600或3300转/min的离心速度进行离心处理，将未吸收甘油去除，再将冰冻红细胞置入专用纸盒，置于零下80℃冰箱中保存；2h后，取冰冻红细胞置于37℃恒温水浴箱中，使其复融，再将无菌接口机与LN235去甘油化耗材无菌接驳，将ACP125全自动血细胞分析仪启动，选择去甘油化模式，安装好去甘油化管道，将血袋固定于细胞摇床，加入9%氯化钠溶液和0.9%氯化钠溶液，按照仪器说明书进行稀释和洗涤，将冰冻红细胞制备成冰冻解冻去甘油化红细胞。

冰冻解冻去甘油化红细胞制备完成后，取5mL红细胞标本进行检测，对其质量达标情况进行分析，如甘油残留量不足10g/L、体外溶血率不足50%、游离血红蛋白不足1.0g/L、红细胞回收率达到80%，即可判断为质量达标[3]。

1.4 观察指标

比较加甘油后不同放置时间（15、30min）的甘油残留量、去甘油化過程中不同离心速度（2600、3300转/min）的各项冰冻红细胞参数（甘油残留量、体外溶血率、游离血红蛋白、红细胞回收率）。

1.5 统计学处理

数据处理采用SPSS19.0软件进行处理，计量资料以（）表示，采用t检验，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 加甘油后不同放置时间的甘油残留量比较

加甘油后不同放置时间下，放置30min的标本甘油残留量明显低于放置15min的标本（P<0.05）

2.2 去甘油化不同离心速度下红细胞的各项参数比较

不同离心速度下，去甘油化后冰冻解冻红细胞的各项参数均符合国家质检标准，离心速度2600转/min的标本其甘油残留量、体外溶血率、游离血红蛋白均明显低于离心速度3300转/min的标本（P<0.05），且其红细胞回收率明显高于离心速度3300转/min的标本（P<0.05）。

3 讨论

红细胞的代谢速度与保存温度密切相关，保存温度越低，红细胞代谢速度越慢，故在低温下保存红细胞可起到延长红细胞保存时间的作用[4-5]。冰冻红细胞具有保存时间长、生理形态和生化特性接近正常液态红细胞等优点，临床上常将冰冻红细胞应用于部分血型稀有患者的输血治疗中[6-8]。冰冻红细胞主要是通过特殊方法进行制备，既需要保证红细胞处于冰冻状态，延长保存时间，又需避免红细胞膜及其内部结构不受破坏，因此，冰冻红细胞的制备方法及过程十分重要，关系到冰冻红细胞的质量以及临床输血安全性[9-12]。

甘油法是目前临床制备冰冻红细胞的主要方法，主要是通过在红细胞中加入甘油，使甘油充分发挥防冻作用，从而避免红细胞内部结构在低温下受到破坏[13-14]。甘油法制备的冰冻红细胞在临床应用前需进行去甘油化，主要是将冰冻红细胞加入至37℃恒温水浴箱中使其复融，再采用氯化钠溶液进行洗涤，可有效去除血袋中的甘油，实现红细胞有效输注[15-16]。本次研究采用甘油法对红细胞进行冰冻制备，再对其进行去甘油化复融后发现，不同放置时间及离心速度下去甘油化后冰冻解冻红细胞的各项参数均符合国家质检标准，说明对红细胞采用甘油法进行制备，可获得高质量的冰冻红细胞。

在本次研究结果中，放置30min的标本甘油残留量明显低于放置15min的标本（P<0.05），而离心速度2600转/min的标本其甘油残留量、体外溶血率、游离血红蛋白均明显低于离心速度3300转/min的标本（P<0.05），其红细胞回收率明显高于离心速度3300转/min的标本（P<0.05），这提示我们在采取甘油法制备冰冻红细胞时需严格把握放置时间和离心速度，加甘油后放置30min可使甘油充分与红细胞融合，而在去甘油化复融解冻时，采取2600转/min的速度进行离心处理，可通过降低离心力，确保红细胞不受破坏[17-19]。

综上所述，对红细胞标本进行甘油化、去甘油化制备，可获得优质冰冻红细胞，有利于保证输血的安全性，缓解血液供需矛盾。

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（收稿日期：2017-03-30）