高效液相色谱法测定西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明试验

曹宁阳++董娇++吴迪++王烁++岑琴

摘要：为建立高效液相色谱同时测定减肥类保健品中非法添加药物西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明的方法，样品经液相色谱分离后采用二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外特征吸收光谱图作为定性依据。试验结果表明：西布曲明、麻黄碱、芬氟拉明的检出限分别为20，40，15 μg/mg；在4～80 μg/mL浓度范围，线性相关系数均大于0.999 5；样品加标回收率大于95%，RSD小于3.4%。

关键词：高效液相色谱法；西布曲明；麻黄碱；芬氟拉明；标准曲线

中图分类号：TS218 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2017）05-0052-03

目前，市场上的减肥类保健品品种繁多，有些不法商家通过非法添加酚酞、咖啡因、西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明等化学药品来提高产品功效，对人体造成极大伤害。针对减肥类功能產品可能添加的化学药物，国家食品药品监督管理局发布药品检验补充检验方法和检验项目批准件2006004，2012005以及国家食品药品监督管理局办公室文件食药监办许[2010]114号附件，上述3个文件中均规定采用液质法定性检测，高相液相色谱法定量检测，但批准件200604中只提到用高效液相法定量检测，却没有给出测定方法。为此，建立高效液相定量分析非法添加药物西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明的方法，且方法验证良好、简洁准确，可作为减肥类保健食品中非法添加药物的定量分析方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

麻黄碱（批号171241-201508）、西布曲明（批号100624-200401）由中国食品药品检定研究院提供；芬氟拉明（批号106265AL）由Dr.Ehrenstorfer提供。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。减肥保健品由沈阳食品检验所购买。

1.2 仪器与设备

Waters 2695高效液相色谱仪，配有2998二极管阵列检测器；HZF-A500电子天平（福州华志科学仪器有限公司）；KQ-250DB超声波发生器（昆山市超声仪器有限公司）；H2050R离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。

1.3 检测方法

1.3.1 HPLC色谱条件 色谱柱：Thermo Syncronis C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；

柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；进样量：10 μL。梯度条件见表1。

1.3.2 对照品溶液的配制 分别准确称取西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明对照品5 mg（精确至0.1 mg），置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解，并定容至刻度，配置成100 μg/ml的标准储备溶液。分别吸取西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明标准储备溶液200.0 μL，400.0 μL，800.0 μL，2.0 mL，4.0 mL，8.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成质量浓度分别为2，4，8，20，40，80 μg/mL的混合标准系列工作溶液。

1.3.3 样品前处理 取适量样品（约1 g），置于10 mL容量瓶中，加入约8 mL甲醇超声提取10 min，放冷至室温，加入甲醇定容至刻度，混合均匀，经过夜沉淀后取上层溶液适量，高速离心（不小于4 000 r/min），取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，用高效液相色谱仪分析。

2 结果与分析

2.1 流动相的选择

分别以甲醇-0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸水溶液，以及乙腈-0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸水溶液作为流动相，用混合标准溶液优化最佳分离条件。试验发现，以乙腈-0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸水溶液作为洗脱液，采用表1中的梯度洗脱条件，可使麻黄碱、芬氟拉明和西布曲明保持足够分离度和良好峰形。同时，根据不同化合物的紫外响应值，西布曲明采集225 nm的色谱图，麻黄碱和芬氟拉明采集265 nm的色谱图，分别见图1及图2。

2.2 标准曲线

将1.3.2中得到的西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明混合标准系列工作溶液按1.3.1色谱条件进行检测，以对应的色谱图峰面积为纵坐标（y，响应值）、质量浓度为横坐标（x，μg/mL）进行回归分析。结果表明，西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明在各自浓度范围内呈良好的线性关系，线性相关系数（r）均大于0.999 5，详见表2。

2.2.1 检出限 西布曲明、麻黄碱和芬氟拉明的检出限分别为20，40，15 μg/mg（信噪比S/N≈3）。

2.2.2 回收率和精密度 取空白样品6份，每份300 mg，加入各组分标样，按1.3.3进行样品前处理，进样10 μl，结果见表3。

由表3中的数据可知：样品加标回收率大于95%，RSD小于3.4%。

2.3 阳性样品验证

对市售某减肥药品按照1.3.3进行样品前处理，按照1.3.1色谱条件进行检测。在225 nm的检测波长下，24.016 min出现色谱峰，和标准品对照确定为西布曲明。

3 结论

样品经液相色谱分离后采用二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外特征吸收光谱图作为定性的依据，确定西布曲明、麻黄碱、芬氟拉明的检出限分别为20，40，15 μg/mg；在4～80 μg/mL浓度范围，线性相关系数（r）均大于0.999 5；样品加标回收率大于95%，RSD小于3.4%。阳性样品验证试验表明，方法学验证良好。

该方法样品前处理简单、结果准确、灵敏度高、重复性好，可作为减肥类保健食品中非法添加药物的定量分析方法。

参考文献

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