介入热化疗栓塞治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响

侯明星

(成都市第五人民医院肝胆外科，四川 成都 611130)

介入热化疗栓塞治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响

侯明星

(成都市第五人民医院肝胆外科，四川 成都 611130)

目的研究介入热化疗栓塞治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响。方法将94例原发性肝癌患者随机分为A组和B组，每组47例，A组患者接受介入热化疗栓塞术治疗、B组患者接受常规肝动脉化疗栓塞术治疗。化疗后，采集血清样本并检测肿瘤标志物的含量，采集肝癌病灶并检测增殖基因、侵袭基因的表达量。结果治疗后第4周、第8周时，A组和B组患者血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量均显著低于治疗前，且A组患者血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量均低于B组，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后第8周时，A组患者肝癌病灶中LETM1、CyclinD1、CDK4、BMP4、Vimentin、N-cadherin、FAT10、RhoA、ROCK的表达量低于B组，PPP1R16A、TMPyP4的表达量高于B组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论介入热化疗栓塞治疗肝癌能够较肝动脉化疗栓塞术更为有效地抑制癌细胞增殖和侵袭。

原发性肝癌；介入热化疗栓塞术；增殖；侵袭

原发性肝癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，具有病程短、进展快、恶性程度高的特点，多数患者确诊时已经发展至晚期并失去了手术切除的机会。肝动脉化疗栓塞术(transarterial chemoembolization,TACE)是临床上治疗晚期肝癌的首选方式，既能通过化疗药物的作用来杀伤癌细胞，又能通过栓塞术来诱导癌细胞发生缺氧性损伤[1-2]。但是，由于肝癌的血供丰富、癌细胞增殖活跃，单纯依靠TACE无法彻底杀灭癌细胞，残留的肝癌细胞会成为肿瘤复发的病理基础。热化疗栓塞术是近年来新发展起来的化疗栓塞治疗手段，通过热效应来造成癌细胞损伤、增加癌细胞对化疗药物的敏感性[3]。为了明确介入热化疗栓塞术用于晚期肝癌的治疗价值，我们在下列研究中分析了介入热化疗栓塞治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响。

1 材料与方法

1.1研究设计

设计前瞻性随机对照研究，经医院伦理委员会批准后由同一组医生完成临床操作、数据采集、指标检测。

1.2研究对象

选择2014年5月至2016年8月期间在成都市第五人民医院接受肝动脉化疗栓塞术的原发性肝癌患者作为研究对象，纳入标准：(1)所有患者均经影像学检查及肝穿刺活检确诊；(2)肿瘤数目<3个且单个病灶的长径线<3 cm；(3)肝功能Child-Pugh分级为A级；(4)预期生存时间>6个月。排除标准：(1)合并门静脉或胆管癌栓；(2)存在远处转移病灶；(3)存在肝动脉化疗栓塞术禁忌症。共入组94例患者，包括男性59例、女性35例，年龄42～65岁。

1.3研究方法

1.3.1 分组方法 采用随机数表法将入组的94例原发性肝癌患者分为A组和B组，A组患者接受介入热化疗栓塞术治疗，包括男性31例、女性16例，年龄42～63岁；B组患者接受常规肝动脉化疗栓塞术治疗，包括男性28例，女性19例，年龄43～65岁。两组患者一般资料的比较无显著性差异(P>0.05)。

1.3.2 治疗方法 A组患者进行介入热化疗栓塞治疗，方法如下：股动脉穿刺后插管至肝动脉，根据造影结果进一步超选择插管至肿瘤的供血动脉，将吉西他滨1 000 mg加入生理盐水1 200 mL中，经介入热疗机将吉西他滨灌注进入动脉导管，温度为(51±3)℃、速度为0.8～1.0 mL/s；热灌注后用吉西他滨200 mg、卡铂200 mg、超液化碘油混合进行肝动脉化疗栓塞。B组患者进行常规肝动脉化疗栓塞术治疗，肿瘤供血动脉的超选择插管方式同A组，而后直接用吉西他滨200 mg、卡铂200 mg、超液化碘油混合进行肝动脉化疗栓塞。两组患者均在4周后重复治疗一次。

1.3.3 恶性生物学行为的评估方法 治疗后第8周时，通过穿刺活检获取肝癌病灶，加入蛋白裂解液后提取病灶内的总蛋白，而后采用酶联免疫吸附试剂盒测定LETM1、PPP1R16A、TMPyP4、CyclinD1、CDK4以及侵袭基因BMP4、Vimentin、N-cadherin、FAT10、RhoA、ROCK的表达量。

1.4统计学分析

采用SPSS 17.0录入血清指标的含量及肿瘤病灶的基因表达量，两组间上述数据的差异采用t检验进行分析，按照P<0.05判断差异有统计学意义。

2 结果

2.1血清中肿瘤标志物的含量

治疗前及治疗后第4周、第8周时，两组患者血清中肿瘤标志物AFP、AFP-L3、GP73含量的分析如下：治疗前，A组和B组患者血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量无显著性差异(P>0.05)；治疗后第4周、第8周时，A组和B组患者血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量均显著低于治疗前(P<0.05)，且A组患者血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量均显著低于B组(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者治疗前后血清中肿瘤标志物的比较(μg/L)

*P<0.05，组内治疗前后比较；#P<0.05，组间治疗后比较。

2.2肝癌病灶中增殖基因的表达量

治疗后第8周时，两组患者肝癌病灶中增殖基因LETM1、PPP1R16A、TMPyP4、CyclinD1、CDK4表达量的分析如下：A组患者肝癌病灶中LETM1、CyclinD1、CDK4的表达量显著低于B组，PPP1R16A、TMPyP4的表达量显著高于B组。两组患者治疗后第8周时肝癌病灶中LETM1、PPP1R16A、TMPyP4、CyclinD1、CDK4表达量的差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2两组患者治疗后肝癌病灶中增殖基因表达量的比较(ng/mL，n=47)

组别LETM1PPP1R16ATMPyP4CyclinD1CDK4A组1.38±0.243.42±0.522.28±0.461.02±0.150.94±0.11B组2.18±0.352.03±0.355.62±0.922.50±0.562.78±0.62t值8.1827.72212.38215.28219.108P值<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

2.3肝癌病灶中侵袭基因的表达量

治疗后第8周时，两组患者肝癌病灶中侵袭基因BMP4、Vimentin、N-cadherin、FAT10、RhoA、ROCK表达量的分析如下：A组患者肝癌病灶中BMP4、Vimentin、N-cadherin、FAT10、RhoA、ROCK的表达量显著低于B组。两组患者治疗后第8周时肝癌病灶中BMP4、Vimentin、N-cadherin、FAT10、RhoA、ROCK表达量的差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3两组患者治疗后肝癌病灶中侵袭基因表达量的比较(ng/mL，n=47)

组别BMP4VimentinN-cadherinFAT10RhoAROCKA组2.76±0.421.24±0.180.91±0.123.48±0.561.78±0.251.24±0.16B组6.48±0.933.28±0.562.25±0.428.49±1.044.26±0.672.52±0.36t值16.78322.19214.85512.48515.28611.108P值<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

3 讨论

肝动脉化疗栓塞术(TACE)是目前临床上治疗晚期肝癌的首选方式，但是受到肝癌血供丰富的影响，TACE并不能彻底阻断肝癌血供，术后仍有部分癌细胞残留并成为肿瘤复发的病理基础[4]。介入热化疗栓塞术是新发展起来的介入治疗手段，在传统TACE的基础上加入了热疗，通过热效应来直接诱导癌细胞凋亡并增加癌细胞对化疗药物及缺氧的敏感性，同时还能增加局部组织对化疗药物的通透性、有利于化疗药物在局部组织蓄积[5-6]。在肝癌的病情进展过程中，癌细胞内AFP、AFP-L3、GP73等多种蛋白、多肽的合成增多并分泌进入血液循环，通过检测血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量能够反应癌细胞的活跃程度[7-9]。为了明确介入热化疗栓塞治疗原发性肝癌的效果，我们首先对血清中上述肿瘤标志物的含量进行了分析，结果显示：A组和B组患者治疗后血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量均显著低于治疗前且A组患者血清中上述肿瘤标志物的含量低于B组。这就说明单纯肝动脉化疗栓塞术以及介入热化疗栓塞术均对肝癌细胞具有杀伤作用、术后肿瘤标志物含量显著降低，并且介入热化疗栓塞术对肝癌细胞的杀伤作用强于单纯肝动脉化疗栓塞术、术后肿瘤标志物含量的降低更为显著。

肝癌细胞具有极强的增殖和侵袭能力，血清中肿瘤标志物的含量虽然能够给反应癌细胞增殖和侵袭的活跃程度，但是却不能直观反应病灶内癌细胞的增殖和侵袭情况。LETM1是肝癌病灶内调节癌细胞增殖的关键基因，所编码的产物是一类线粒体内膜结合蛋白，能够通过调节线粒体的功能来促进细胞的增殖[10-11]。PPP1R16A和TMPyP4则是参与肝癌病情发展变化的两类抑癌基因，两种基因所编码的产物均能抑制细胞周期蛋白CyclinD1及其激酶CDK4的表达，进而影响CyclinD1/CDK4/CDK6复合物的形成、干扰细胞周期的进程并抑制细胞增殖[12-13]。为了明确介入热化疗栓塞对肝癌病灶内癌细胞增殖的影响，我们对上述增殖基因的表达量进行了分析，结果显示：A组患者肝癌病灶中LETM1、CyclinD1、CDK4的表达量显著低于B组，PPP1R16A、TMPyP4的表达量显著高于B组。这就说明介入热化疗栓塞术能够较单纯肝动脉化疗栓塞术更为有效的抑制肝癌细胞增殖，具体表现为抑制促增殖基因的表达、增加抑癌基因的表达。

癌细胞侵袭是造成肝癌浸润性生长以及远处转移的重要生物学行为，肝癌病灶中的BMP4和FAT10分别能够通过上皮间质转化通路和RhoA/ROCK通过促进癌细胞侵袭[14-15]。BMP4是TGF-β超家族的成员，能够通过下游Smads信号分子来调节上皮间质转化过程，增加间质标志物Vimentin、N-cadherin的表达并降低细胞间极性、促进细胞侵袭。FAT10是泛素样蛋白家族的成员，能够激活Roa家族中的RhoA分子，进而作用于效应分子ROCK并促进细胞发生形态改变并诱导细胞迁移、侵袭。为了明确介入热化疗栓塞对肝癌病灶内癌细胞侵袭的影响，我们对上述侵袭基因的表达量进行了分析，结果显示：A组患者肝癌病灶中BMP4、Vimentin、N-cadherin、FAT10、RhoA、ROCK的表达量显著低于B组。这就说明介入热化疗栓塞术能够较单纯肝动脉化疗栓塞术更为有效的抑制肝癌细胞侵袭，具体表现为抑制促侵袭基因的表达。

综合上述实验数据我们认为，虽然单纯肝动脉化疗栓塞术以及介入热化疗栓塞术均对肝癌细胞具有杀伤作用，但是介入热化疗栓塞术均治疗晚期肝癌能够较单纯肝动脉化疗栓塞术更为有效地抑制癌细胞增殖、侵袭，进而发挥更为强大且确切的癌细胞杀伤作用。

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Effectofinterventionalthermotherapyembolismtherapyonmalignantbiologicalbehaviorofcancercellsinpatientswithhepatocellularcarcinoma

HOU Ming-xing

(DepartmentofHepatobiliarySurgery,ChengduFifthPeople’sHospital,Chengdu611130,Sichuan,China)

Objective：To study the effect of interventional thermotherapy embolism therapy on malignant biological behavior of cancer cells in patients with hepatocellular carcinoma.Methodsprimary liver cancer patients

hepatic arterial chemoembolization were enrolled and randomly divided into group A and group B.Patients in group A were treated with interventional thermochemotherapy embolization therapy,group B received routine hepatic artery chemoembolization.After chemotherapy,the serum samples were collected and the tumor markers were detected,and hepatocellular carcinoma lesion were collected and the expression of proliferative and invasive genes were detected.ResultsFourth weeks and eighth weeks after treatment,the content of serum AFP,AFP-L3 and GP73 contents of group A and group B were significantly lower than those before treatment and serum AFP,AFP-L3 and GP73 contents of group A were significantly lower than group B;Eighth weeks after treatment,the expression of LETM1,CyclinD1,CDK4,BMP4,Vimentin,N-cadherin,FAT10,RhoA and ROCK in hepatocellular carcinoma lesion of group A were significantly lower than group B,expression of PPP1R16A and TMPyP4 were significantly higher than group B.ConclusionInterventional hyperthermia embolization can effectively inhibit the proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma compared with transcatheter arterial chemoembolization.

Primary hepatocellular carcinoma;Interventional thermotherapy embolization;Proliferation;Invasion

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.031

2017-04-21

侯明星(1980-)，男，主治医师。E-mail:35194661@qq.com

时间： 2017-10-10 02∶28

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0228.064.html

1005-3697(2017)05-0759-04

R735.7

A

(学术编辑任亦星)

本刊网址：http：//www.nsmc.edu.cn作者投稿系统http：//noth.cbpt.cnki.net邮箱xuebao@nsmc.edu.cn

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