GAS5基因插入/缺失多态性与甲状腺滤泡癌易感性的相关性研究

王会平 陈 浩 朱占胜

1徐州医科大学基础医学院遗传学教研室 江苏省徐州市 221004 2徐州医科大学临床医学系 江苏省徐州市 221004 3徐州医科大学基础医学院病理学教研室 江苏省徐州市 221004

GAS5基因插入/缺失多态性与甲状腺滤泡癌易感性的相关性研究

王会平1陈 浩2朱占胜3

1徐州医科大学基础医学院遗传学教研室 江苏省徐州市 221004 2徐州医科大学临床医学系 江苏省徐州市 221004 3徐州医科大学基础医学院病理学教研室 江苏省徐州市 221004

目的：研究在中国徐州地区汉族人群中，GAS5基因中的一个5-bp插入/缺失多态性和甲状腺滤泡癌（FTC）易感性的相关性。方法：应用PCR和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染法检测204例FTC患者和232例健康对照者插入/缺失基因型频率，经统计分析探讨其与FTC的关联性。结果：选择的患者和健康对照组人群在性别、年龄、方面的频率分布无显著性差异,吸烟和饮酒在FTC患者中比例较大；基因分型结果显示：患者中插入/插入型(Ins/Ins) ，插入/缺失型(Ins/Del)和缺失/缺失型(Del/Del)基因型频率分别为0.363，0.500和0.137，健康对照组分别为0.478，0.440和0.082。基因型为Ins/Del和Del/Del的个体CRC易感性明显增高（OR=1.51，95%CI: 1.02-2.22，P=0.048）（OR=2.21，95%CI: 1.21-4.85，P=0.022）。结论：GAS5基因5-bp插入/缺失多态性与FTC发生存在关联，这一结果对FTC早期诊断具有重要意义。

GAS5；插入/缺失多态性；甲状腺滤泡癌

甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤，近年来甲状腺癌的发病率来呈现爆发式上升，给家庭和社会带来沉重负担[1]。在临床实践中，甲状腺滤泡癌（FTC）在甲状腺癌组织学分类中排第二位，占所有甲状腺癌的15%以上，恶性程度高，预后差[2]。因此，对FTC的预防和预测称为关注的焦点。精准医疗的兴起，可以有效地帮助潜在患者防止FTC的发生[3]。然而，精准医疗的关键点是可疑基因及遗传多态性的发现和鉴定，只有发现尽量多的遗传标记，才能做到尽可能的准确判断。本课题组多年来致力于基因多态性尤其是插入缺失多态性与肿瘤易感性的研究，在最近的研究中，课题组首次发现位于非编码基因GAS5区域内的一个5-bp插入/缺失多态性（rs145204276）与FTC易感性存在关联。目前尚无针对GAS5多态性和FTC易感性相关性的类似报道，这一研究应当对于FTC的预测和预防，维持健康具有重要意义。在本研究中，课题组检测了徐州地区FTC癌患者和健康对照人群的GAS5基因插入/缺失多态性，分析其与FTC易感性的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

FTC患者204例，男55例，女149例，年龄44.7 ± 7.5岁，无滤泡性腺瘤，甲状腺肿病史。收集2015年5月至2017年7月在徐州市二院入院治疗的FTC患者，患者符合我国中华医学会2012年关于甲状腺癌诊断指南标准。健康对照232例，选自健康体检人群的随机个体，男65例，女167例，年龄43.2 ± 8.2岁，无滤泡性腺瘤，甲状腺肿病史。所有研究对象均为自然人群、汉族且无血缘关系。

表1：病例组和对照组的临床资料

1.2 标本收集

受试对象均静脉抽取全血1.5 mL，课题组采用DNA提取试剂盒(ThermoFisher)从全血标本抽提基因组DNA，-20℃保存备用。

1.3 基因分型

采用按照陶瑞旸等人所述方法[4]进行基因分型。

1.4 统计分析

采用卡方检验比较临床资料差别；卡方检验比较病例组和对照组基因型及等位基因频率差别；遗传多态性与CRC易感性的关联强度分析采用逻辑回归方法，采用校正临床资料诸因素后的优势比(odds ratio，OR)和95%置信区间(con fi dence interval，CI)表示，统计学分析结果以P＜0.05为显著性标准。

2 结果

2.1 病例组与对照组的一般特征

204例FTC样本和232例健康对照样本人口学资料情况比较(见表1)，从表中可以看出二者在性别和年龄吸烟和饮酒情况方面的频率分布无显著性差异。吸烟和饮酒情况方面的频率分布存在统计学差异，其中吸烟患者在病例组中较多（P＜0.001）。

2.2 rs145204276基因座分型结果

经凝胶电泳分型，存在插入/缺失（Ins/Del），插入/插入Ins/Ins），缺失/缺失（Del/Del）三种基因型。对照组基因座基因型分布频率 Phwe＞0.05。

2.3 GAS5基因插入缺失多态频率分布

研究中插入缺失多态性频率分布见表2， CRC组缺失型纯合子频率为13.7%，明显高于正常对照组的频率8.2%（P＜0.01）。

表2：GAS5基因插入缺失多态基因型分布

2.4 多态性与CRC易感性分析

进行逻辑回归分析（调整诸临床资料因素），数据表明基因型为杂合子和缺失型纯合子的患者CRC易感性增高 明 显（OR=1.52，95%CI∶ 1.02-2.22，P=0.048）（OR=2.21，95%CI∶ 1.21-4.85，P=0.022），即在95%置信区间内，与插入型纯合子相比教，带有杂合子个体患FTC的风险高出52%（P=0.048），带有缺失型纯合子个体患FTC的风险性是带插入型纯合子个体的2.21倍（P=0.022）。逻辑回归结果提示GAS5基因遗传多态性与FTC患病风险之间明显相关，课题组由此认为带有缺失型等位基因是FTC的潜在致病因素。

3 讨论

GAS5基因5-bp插入/缺失多态有可能影响该基因表达，而GAS5在肺癌[5]、肾癌[6]等恶性肿瘤中起抑瘤作用，课题组认为该多态可以下调GAS5蛋白表达，抑瘤作用下降，增加FTC发生的风险。

此前，已有相关报道证实了该多态与肝细胞肝癌等多种肿瘤相关[7]，但是缺乏与FTC的相关性报道。本研究首次发现了这一相关性，并且鉴定缺失型等位基因具有致病性，有助于FTC的早期预防及机制的深入研究。

本研究首次发现中国汉族人群中GAS5基因区域插入/缺失多态与FTC易感性之间存在显著关联，但条件有限，调查范围仅局限在徐州地区的汉族人群，且未进行组织蛋白表达情况分析，得出更加明确的结论还有待于更大样本量和其他不同人群中相关实验的验证。

[1]王卓颖,吴毅.分化型甲状腺癌的诊治指南解读[J].外科理论与实践,2014(03):185-188.

[2]陈祯勇.分化型甲状腺癌外科治疗的研究进展.当代医学,2013;05-18(02):12-13.

[3]陈健,江亮.精确病理诊断在甲状腺癌精准医疗中的意义.中国肿瘤临床,2017;44(04):181-185.

[4]陶瑞旸.LncRNA GAS5启动子区插入/缺失多态与肝细胞肝癌易感性关联研究及功能分析.苏州大学,2016.

[5]Shi X,Sun M,Liu H,et al.A critical role for the long noncoding RNA GAS5 in proliferation and apoptosis in non-small-cell lung cancer.MolCarcinog,2015;54 Suppl1(S1):E1.

[6]Qiao H,Gao W,Huo J,et al.Long non-coding RNA GAS5 functions as a tumor suppressor in renal cell carcinoma. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2013,14(02):1077.

[7]Tao R,Hu S,Wang S,et al.Association between indel polymorphism in the promoter region of lncRNA GAS5 and the risk of hepatocellular carcinoma. Carc inogenesis,2015(36):1136-1143.

徐州医科大学优秀人才科研启动基金（D2015018，D2015019）。

（通讯作者：朱占胜）

王会平（1984-），女，博士。讲师。研究方向为甲状腺癌的预防与治疗。

朱占胜（1980-），男，博士。讲师。研究方向为甲状腺癌的预防与治疗。